孫一 趙紅巖

摘要 采用煎煮法浸提葛花中的總黃酮，通過正交試驗優(yōu)選最佳提取工藝并初步分析其解酒活性。采用L9（34）正交試驗，以總黃酮得率為考察指標，優(yōu)選最佳提取工藝；從耐受性、醉酒時間、醉酒率、死亡率等方面初步分析其解酒特性。結(jié)果表明，葛花總黃酮煎煮浸提的最佳工藝為煎煮時間6 h，加水量12倍，浸泡時間1 h。此工藝條件簡單方便，穩(wěn)定性好，可用于工業(yè)化生產(chǎn)，并適用于葛花解酒茶的開發(fā)過程。

關(guān)鍵詞 葛花；總黃酮；煎煮浸提工藝；解酒活性

中圖分類號 TS275.4 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）04-0235-02

Abstract The total flavonoids were extracted from Pueraria lobata using decoction method，the optimum extraction process was optimized by orthogonal test and the anti-alcohol activity of Pueraria lobata flavonoids was analyzed.Using L9（34）orthogonal test，the optimal extraction process was optimized guiding by the extraction rate of the total flavonoid. The anti-alcohol characteristics of Pueraria lobata flavonoids were analyzed from tolerance，intoxication time，intoxication rate and death rate.The optimum extraction process was that the decoction time was 6 h，added water was 12 times and soaking time was 1 h. This process is simple and convenient and has good stability，it can be used for industrial production，and is applicable to the development of Pueraria lobata anti-alcohol tea.

Key words Pueraria lobata；total flavonoid；decoction extraction process；anti-alcohol activity

葛花為藥食同源植物野葛[Pueraria lobata（Willd.）Ohwi]、甘葛藤（P.thomsonii Benth.）的花。葛花和葛根同為葛屬植物的入藥部位。葛根是功能性保健品和藥品的主要原材料，可藥食兩用，享有“亞洲人參”的美譽，開發(fā)利用程度較高。與葛根相比，葛花的開發(fā)利用程度較低。葛花于每年8—9月花苞初開時采收，曬干即可。葛花味甘性涼，具有解酒、醒脾、止血的功效，常用于治療煩熱口渴、頭痛頭暈、脘腹脹滿、嘔逆吐酸等癥。葛花為解酒護肝的良藥，民間素有“千杯不醉葛藤花”之說，被稱為“酒之克星”?，F(xiàn)代生物科學(xué)和藥理學(xué)研究表明，葛花的主要有效成分為黃酮類化合物、皂苷類化合物、揮發(fā)油類化合物、甾醇類、生物堿、氨基酸等，其中黃酮類化合物具有較強的抗氧化消除氧自由基的作用，皂苷類化合物具有強大的保肝功效。這2種成分協(xié)同作用可有效抑制腸胃對酒精的吸收，并促進血液中酒精的分解和排泄，達到解酒、護肝、養(yǎng)胃之功效，且安全無副作用。本文以煎煮法浸提葛花黃酮，以水作為溶劑，安全性高，成本更低，能更好地為后續(xù)葛花黃酮解酒茶的開發(fā)提供可靠的理論依據(jù)[1-3]。

1 材料與方法

1.1 試驗儀器

UV-2550紫外分光光度計：日本島津；DZF真空干燥箱：上海丙林電子科技有限公司；CJJ-931磁力攪拌器：江蘇環(huán)宇科學(xué)儀器廠；RE-5210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠。

1.2 試驗材料

試驗材料為葛花，市售；蘆丁：中國藥品生物研究所提供（0080-9705）。

1.3 試驗方法

1.3.1 葛花樣品的制備。取葛花藥材適量，粉碎，過80目篩，置于真空干燥箱70 ℃、95 KPa的條件下烘干至恒重，備用。

1.3.2 蘆丁標準曲線的繪制。精確稱取于105 ℃干燥至恒重的蘆丁對照品5 mg，以95%乙醇溶解并定容于50 mL容量瓶中。分別精確吸取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL標準溶液至10 mL容量瓶中，并用超純水定容?？瞻讓φ諡? mL 95%乙醇加入10 mL容量瓶中的溶液。檢測波長為510 nm，對蘆丁質(zhì)量濃度與吸光度作線性回歸，得到蘆丁標準曲線回歸方程為C=67.561A-0.412，R2=0.999 1，蘆丁在10～50 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.3.3 總黃酮提取工藝。精確稱量葛花粉末1.00 g，按照一定的液料比以水進行浸泡，并煎煮提取一定的時間。煎煮后抽濾，將濾液于4 000 r/min條件下離心處理10 min，將全部離心上清液定容至50 mL容量瓶中。精密量取1 mL于10 mL容量瓶中，按照1.3.2所示方法在510 nm處測吸光度，計算總黃酮的含量。

葛花總黃酮得率的計算公式如下：

W=■×B×V

式中：W為總黃酮得率（mg/g）；M為試驗原料所稱量的質(zhì)量（g）；A為測量的吸光度；B為稀釋的倍數(shù)；V為過濾液體的總體積（mL）。

1.3.4 正交試驗設(shè)計。為了優(yōu)化總黃酮的煎煮浸提工藝條件，試驗中選擇煎煮時間A（h）、加水量、浸泡時間C（h） 3個因素，每個因素3個水平，以總黃酮得率（mg/g）為考察指標，進行L9（34）正交試驗（表1）。

1.3.5 小鼠醒酒特性的測定。試驗中以翻正反射是否消失作為衡量小鼠醉酒與否的標準，即將正常小鼠置于仰臥或側(cè)臥位時，小鼠會很快翻正過來；而醉酒小鼠則翻正反射消失，可以由人任意將其翻轉(zhuǎn)。將30只昆明小鼠隨機分為3組，每組10只，試驗前禁食8 h，稱量并記錄。陰性對照組小鼠用去離子水灌胃，陽性對照組小鼠用1 g/mL海王金樽溶液灌胃，試驗組以葛花提取物灌胃，灌胃溶液體積均為0.1 mL。給藥0.5 h后對所有小鼠按照0.1 mL/10 g體質(zhì)量的標準用56°二鍋頭灌胃。觀察并記錄每組小鼠的耐受時間（從灌酒至醉酒后翻正反射開始消失的時間）、醉酒時間（從醉酒后翻正反射開始消失至其恢復(fù)的時間）、醉酒只數(shù)和死亡只數(shù)[4-6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 正交試驗結(jié)果

根據(jù)單因素試驗得到的結(jié)果，選取煎煮時間、加水量、浸泡時間3個因素按表1所示水平進行正交試驗，試驗結(jié)果及極差分析見表2，方差分析見表3。

由表2可知，對總黃酮得率的影響因素主次順序依次為煎煮時間>加水量>浸泡時間，最佳組合為A3B2C1，即最佳煎煮工藝條件為煎煮時間6 h、加水量12倍、浸泡時間1 h。由表3可知，煎煮時間、加水量、浸泡時間均對黃酮得率有顯著性影響，影響得率的因素的主次順序為煎煮時間>加水量>浸泡時間，這與表2極差分析的結(jié)果一致。

2.2 小鼠醒酒特性的測定結(jié)果

由表4可知，樣品試驗組小鼠平均耐受時間延長，醉酒率下降，表明樣品在飲酒前服用具有保護功效，同時，平均醉酒時間也有明顯縮短，顯示出了一定的解酒功效。

3 結(jié)論

本研究以總黃酮得率為考察指標，利用正交試驗確定葛花黃酮最佳煎煮浸提工藝為煎煮時間6 h、加水量12倍、浸泡時間1 h。該方法以水作為溶劑，安全性高，成本更低，能更好地為后續(xù)葛花黃酮解酒茶的開發(fā)提供可靠的理論依據(jù)。

4 參考文獻

[1] 孫洋.葛花藥理作用與臨床應(yīng)用研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2014，10（8）：51-53.

[2] 李玲，全沁果，沈艷欣，等.野葛藤地上部分葛根素的提取及穩(wěn)定性研究[J].食品工業(yè)科技，2016，37（9）：235-239.

[3] 國海東，蔣艷，上官新晨，等.葛根素的穩(wěn)定性研究[J].食品科技，2014，39（11）：229-232.

[4] 吳玲玲，韓墨，黃真，等.葛根素提取及分離純化的研究進展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2011，29（3）：569-571.

[5] 高學(xué)清，汪何雅，錢和，等.葛根和葛花對急性酒精中毒小鼠的解酒作用[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報，2012，31（6）：621-627.

[6] 雷紅偉，楊偉峰.葛花對酒精性肝損傷保護作用的研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2010，21（2）：489-490.