黃琪 虎峻瑞 張波 沙彥娟

【摘要】目的 觀察冠心病患者阿司匹林抵抗與CD4+CD25+調(diào)節(jié)性Treg細(xì)胞的關(guān)系。方法 選取90例冠心病阿司匹林抵抗患者為觀察組CHD（AR），冠心病阿司匹林敏感組CHD（AS）90例，使用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)各組外周血Treg、TGF-β1、IL-10含量；并測(cè)定血小板聚集率（PAR）。將CHD（AR）患者根據(jù)自愿的原則分為氯吡格雷及復(fù)方丹參滴丸兩組進(jìn)行干預(yù)，每組45例，并檢測(cè)上述指標(biāo)的變化情況。結(jié)果 CHD（AR）組及CHD（AS）組Treg、TGF-β1、IL-10均降低，CHD（AR）組明顯低于CHD（AS）組（P<0.05）有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)藥物干預(yù)后氯吡格雷組Treg、TGF-β1、IL-10均高于復(fù)方丹參滴丸組（P<0.05），且AA-PAR、FDP-PAR低于復(fù)方丹參滴丸組（P<0.05），均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 臨床上可將CD4+CD25+Treg作為CHD診斷、預(yù)后、治療和調(diào)控判斷的重要靶向指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】冠心??；阿司匹林抵抗；CD4+CD25+調(diào)節(jié)性；Treg細(xì)胞

【中圖分類號(hào)】R541.4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2017.36..02

冠心?。╟oronary heart disease，CHD）的發(fā)病率、死亡率逐年上升，[1]其發(fā)病過(guò)程涉及到炎癥、免疫、代謝等多個(gè)環(huán)節(jié)。阿司匹林是目前使用最廣泛的有效抗血小板聚集藥，為冠心病二級(jí)預(yù)防用藥。但是，CHD患者即使接受適當(dāng)劑量阿司匹林治療，有研究有證實(shí)仍有10%-45%CHD患者存在阿司匹林抵抗（aspirin resistance，AR）發(fā)生。有的觀點(diǎn)認(rèn)為具有免疫功能的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞主要是CD4+CD25+Treg細(xì)胞，它與感染、腫瘤、過(guò)敏反應(yīng)等多種疾病均直接相關(guān)[2]，故推測(cè)CHD可能與CD4+CD25+Treg水平變化存在相關(guān)性。本研究旨在通過(guò)測(cè)定CHD AR患者、已發(fā)生AR患者口服復(fù)方丹參滴丸以及口服氯吡格雷體內(nèi)CD4+CD25+Treg水平，

進(jìn)一步了解CHD AR患者相關(guān)機(jī)制。現(xiàn)報(bào)導(dǎo)如下。

1 研究對(duì)象

選取我院2016年1月～2017年1月門(mén)診、住院診斷CHD患者180人作為觀察對(duì)象，年齡在45～80歲之間；經(jīng)過(guò)阿司匹林抵抗診斷，共納入90例CHD（AR）患者，其中男性49例，女性41例，年齡（63.57±11.32）歲；同時(shí)選取90例阿司匹林敏感的CHD（AS）患者，男性48例，女性42例，年齡（63.26±11.97）歲；將CHD（AR）患者根據(jù)自愿原則分為氯吡格雷組、復(fù)方丹參滴丸組，每組各45例。氯吡格雷組：男性24例，女性21例，年齡（63.85±10.66）歲，平均病程（4.92±2.21）年；復(fù)方丹參滴丸：男性，25例，女性20例，年齡（63.28±11.77）歲，平均病程（4.26±3.62）年。經(jīng)x2檢驗(yàn)，兩組性別分布無(wú)顯著性差異（P>0.05），有可比性。符合冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)。阿司匹林抵抗診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：應(yīng)用20 μmol/L，ADP誘導(dǎo)血小板集聚率≥70%及0.5 mmol/L AA 誘導(dǎo)血小板集聚率≥20%診斷為AR，符合其中一項(xiàng)者判定為ASR，兩項(xiàng)均不符合判定為 AS。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：①服用氯呲格雷、噻氯匹定、非甾體抗炎藥。華法林、或使用肝素；②家族或個(gè)人出血史；③血小板計(jì)數(shù)<100×109/mL或>450×109/mL；

④血紅蛋白

2 研究方法

本課題采用血小板聚集率（PAR）試驗(yàn)，流式細(xì)胞術(shù)，藥物干預(yù)方法，對(duì)兩組研究對(duì)象進(jìn)行研究。

2.1 血小板聚集率（PAR）試驗(yàn)[5]

兩組研究對(duì)象空腹采集肘靜脈血10 ml，分別使用花生四烯酸（AA）及二磷酸腺苷（ADP）試劑，采用比濁法進(jìn)行PAR測(cè)定，AR的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)：用10 μmol/L ADP誘導(dǎo)，血小板聚集率≥70%；或0.5 mol/L AA誘導(dǎo)，血小板聚集率≥20%；四烯酸誘導(dǎo)的PAR≥20%且二磷酸腺苷誘導(dǎo)的PAR≥50%定義為AR。

2.2 流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）[6]

采集靜脈血約5 ml，分別采用Fiecoll和尼龍毛柱獲得Treg細(xì)胞，使用BD多色流式細(xì)胞儀，檢測(cè)各組中CD4+CD25+Treg所占T細(xì)胞總數(shù)的百分比，并使用固定穿透劑對(duì)胞內(nèi)TGF-β1及IL-10進(jìn)行染色，之后用雙激光光源對(duì)其所占的百分含量進(jìn)行檢測(cè)。

2.3 藥物干預(yù)方法

將CHD（AR）根據(jù)患者自愿原則分為氯吡格雷組、復(fù)方丹參滴丸組，每組各45例。氯吡格雷組給予硫酸氫氯吡格雷片（生產(chǎn)廠家：深圳信立泰藥業(yè)生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H20000542，規(guī)格：25 mg*20片），睡前服用，每次75 mg；復(fù)方丹參滴丸組給予復(fù)方丹參滴丸（生產(chǎn)廠家：天士力制藥集團(tuán)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：Z10950111，規(guī)格：27 mg*180丸），270 mg（10粒）口服，1日3次。兩組均連服1月復(fù)查指標(biāo)。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以“x±s”表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%），例（n）表示，采用x2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 兩組年齡、病程、基線數(shù)據(jù)分布比較

兩組患者間年齡分布比較，經(jīng)Ridit統(tǒng)計(jì)，年齡分布無(wú)顯著性差異（P>0.05），具有可比性。兩組患者間病程分布比較經(jīng)秩和檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，兩組病程分布無(wú)顯著性差異（P>0.05），具有可比性。經(jīng)t檢驗(yàn)，兩組基線特征比較，體溫、心率、呼吸次數(shù)、收縮壓、舒張壓均無(wú)顯著性差異（P>0.05），有可比性。

3.2 兩組Treg、TGF-β1、IL-10、AA-PAR、FDP-PAR比較（見(jiàn)表1）

3.3 氯吡格雷、復(fù)方丹參滴丸組服藥前后Treg、TGF-β1、IL-10、AA-PAR、FDP-PAR比較（見(jiàn)表2）

3.4 相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析顯示：Treg、TGF-β1、IL-10與AA-PAR、FDP-PAR呈負(fù)相關(guān)性，其中Treg與FDP-PAR在相互比較中出現(xiàn)最強(qiáng)相關(guān)性。（見(jiàn)表3）

3.5 不良反應(yīng)比較

氯吡格雷組、復(fù)方丹參滴丸組患者治療后均未發(fā)生藥物不良事件。

4 討 論

阿司匹林是通過(guò)抑制環(huán)氧化酶，減少TXA2的合成而起到藥理作用，臨床應(yīng)用證實(shí)其能顯著降低冠心病、腦卒中病等心、腦及外周血管疾病的死率。臨床發(fā)現(xiàn)10%-45%CHD患者服用有效劑量阿司匹林后，仍然發(fā)生了心肌梗死、腦卒中等從而引出“阿司匹林抵抗”事件。

目前對(duì)CHD AR發(fā)生機(jī)制已作了很多研究，但仍有待探索。其中CHD AR與外周血CD4+CD25+Treg相關(guān)性是發(fā)生的機(jī)制之一。CD4+CD25+Treg細(xì)胞在健康人體內(nèi)約占5～10%，而CHD患者CD4+CD25+調(diào)節(jié)性Treg細(xì)胞比例下降，繼而影響調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群和效應(yīng)T細(xì)胞亞群的平衡。這種平衡狀態(tài)的打破，可能使得機(jī)體在維持外周自身免疫應(yīng)答穩(wěn)態(tài)狀態(tài)下參與動(dòng)脈硬化的發(fā)生與發(fā)展。徐林杰[7]等發(fā)現(xiàn)隨著

心功能的改變，CD4+CD25+Treg水平也呈現(xiàn)規(guī)律的變化。

本研究發(fā)現(xiàn)CHD（AR）患者Treg、TGF-β1、IL-10明顯低于CHD（AS）患者，初步提示T及其細(xì)胞因子可能參與CHD（AR）的過(guò)程。CHD患者AA-PAR、FDP-PAR均顯著高于健康組，進(jìn)一步提示T及其細(xì)胞因子可能與PAR相關(guān)。AR患者Treg、TGF-β1、IL-10升高，從而提高阿司匹林的敏感性。本研究發(fā)現(xiàn)氯吡格雷可能提高Treg的活性，而增強(qiáng)阿司匹林的敏感性。氯吡格雷一種ADF受體的阻滯劑，可結(jié)合血小板膜表面ADP受體，使纖維蛋白原無(wú)法與糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受體結(jié)合，抑制血小板相互聚集，從而打破阿司匹林耐受及抵抗的失衡狀態(tài)。復(fù)方丹參滴丸新型純中藥制劑，主要由丹參、三七、冰片組成，具有活血化瘀、理氣止痛之功效。李鋒[8]等通過(guò)臨床觀察提示該復(fù)方丹參滴丸有明顯改善冠脈微循環(huán)或協(xié)同西藥擴(kuò)張冠脈作用；有效恢復(fù)冠脈血供并改善缺血心肌局部微循環(huán)及代謝，加強(qiáng)和改進(jìn)了心主血脈（自身血脈）功能。黃琨[9]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)用復(fù)方丹參滴丸輔助治療急性心肌梗死患者，可以降低CD3+、CD4+T細(xì)胞水平，提高CD8+T細(xì)胞水平，恢復(fù)CD4+、CD8+T細(xì)胞

平衡，改善機(jī)體免疫炎癥反應(yīng)，緩解病情，改善預(yù)后。

本研究發(fā)現(xiàn)復(fù)方丹參滴丸不僅可以減少心肌耗氧，改善能量代謝，還可以通過(guò)調(diào)節(jié)T細(xì)胞平衡改善CHD預(yù)后。故可將CD4+CD25+Treg作為CHD診斷、預(yù)后、治療和調(diào)控判斷的重要靶向指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

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本文編輯：李 豆