趙洪濤，張占云，范立壯

保定市第二醫(yī)院普通外科，河北 保定0710510

胃鱗狀細胞癌的腫瘤細胞進行增殖和表達后，其產(chǎn)生的遺傳物質(zhì)和代謝產(chǎn)物可以使血液中腫瘤細胞因子指標如hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2等的水平明顯升高；通過指標升高的趨勢，可以預測患者發(fā)生胃鱗狀細胞癌的風險[1]。胃鏡或手術(shù)切除標本的病理學檢查是診斷胃鱗狀細胞癌的金標準。癌細胞的分化程度和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況是預測生存期的最重要的影響因素[2]，但大多數(shù)患者被發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)被診斷為晚期胃鱗狀細胞癌，失去了最佳的治療時機，生存期較短。在晚期胃鱗狀細胞癌中hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的表達較高；而在早期，則表達較低[3]。由于胃鱗狀細胞癌患者的免疫力下降，加之放化療、手術(shù)和侵入性操作的實施，導致胃部感染，成為致死原因之一[4]。hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2等腫瘤細胞因子與傳統(tǒng)炎性因子比較，特異度較高，當發(fā)生胃鱗狀細胞癌時其含量明顯增多[5]。本研究探討了胃鱗狀細胞癌患者hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的表達及其臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2011年8月至2016年10月在保定市第二醫(yī)院接受治療的80例胃鱗狀細胞癌患者（觀察組）和80例胃炎患者（對照組）的臨床資料。觀察組患者的納入標準：①年齡≥18歲；②病理診斷為胃鱗狀細胞癌；③無其他嚴重疾病。排除標準：①無完整臨床資料；②合并其他部位原發(fā)腫瘤。對照組患者的納入標準：①年齡≥18歲；②臨床診斷為胃炎；③無其他嚴重疾病。排除標準：有原發(fā)腫瘤。觀察組80例患者中，男45例，女35例；年齡為50～72歲，平均為（65.32±3.15）歲；高分化者48例，中低分化者32例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者27例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者53例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期有25例，Ⅲ～Ⅳ期有55例。對照組80例患者中，男40例，女40例；年齡為48～70歲，平均為（65.25±3.08）歲；淺表性胃炎55例，萎縮性胃炎25例。兩組患者的年齡和性別等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 實驗方法

抽取兩組患者的清晨空腹靜脈血，以3500 r/min的速度離心30 min，取血清，置于‐20℃冰箱保存待測。采用腫瘤標志物細胞因子分析儀檢測hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2水平。取凍存的血清保存液體，每1 ml的TRⅠZOL試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的氯仿，進行裂解操作；4℃冰上采用無酶的RNA沖洗液進行洗滌，以10 000 r/min的速度離心5 min，得到3種標志物表達后的RNA。混合液在加入逆轉(zhuǎn)錄酶之前先70℃干浴3 min，取出后立即冰水浴至離心管內(nèi)外溫度一致，然后加逆轉(zhuǎn)錄酶0.5 μl，37℃水浴60 min，室溫放置5 min，使其完全溶解，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以β‐actin為模版，將3種標志物分別進行翻譯后，采用免疫組化法進行檢測。

1.3 評價指標

觀察兩組患者hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽性表達情況，比較不同臨床病理特征胃鱗狀細胞癌患者hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽性表達率的差異，分析影響胃鱗狀細胞癌患者hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽性表達的因素。hTERT的染色主要出現(xiàn)在細胞質(zhì)中，細胞核中也有染色。GLⅠ1、GLⅠ2在細胞質(zhì)和細胞核中均有陽性染色出現(xiàn)。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 11.5軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示；計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗。采用Logistic回歸分析法分析胃鱗狀細胞癌中hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2陽性表達的影響因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 hTERT、GLI 1、GLI 2的陽性表達率

觀察組患者的hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的陽性表達率均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 兩組患者hTERT、GLⅠ 1、GLⅠ 2陽性表達率比較[ n（%）]

2.2 臨床特征與hTERT、GLI 1、GLI 2陽性表達率

觀察組患者中，中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Ⅲ～Ⅳ期患者的hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽性表達率分別明顯高于高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Ⅰ～Ⅱ期患者（P＜0.01），而不同年齡、性別和腫瘤部位患者hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽性表達率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（表2）

表2 觀察組患者臨床特征與hTERT、GLⅠ 1、GLⅠ 2陽性表達率的關(guān)系

2.3 h TERT、GLI 1、GLI 2陽性表達的影響因素

將單因素分析有意義的分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期作為自變量，將胃鱗狀細胞癌患者hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽性表達作為因變量，進行回歸分析，結(jié)果顯示分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進入回歸方程，hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽性表達與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有密切的關(guān)系。（表3～5）

表3 觀察組hTERT陽性表達率的影響因素分析

表4 觀察組GLⅠ 1陽性表達率的影響因素分析

表5 觀察組GLⅠ 2陽性表達率的影響因素分析

3 討論

胃通過消化道與外界直接相通，胃鱗狀細胞癌患者更易受到外界不良刺激的影響[6]。胃鱗狀細胞癌患者血清腫瘤因子hTERT是由細胞核中遺傳物質(zhì)逆轉(zhuǎn)錄后合成，繼而傳遞到細胞質(zhì)中合成新生腫瘤細胞，是血漿中含量最高且可以參與外圍腫瘤標志物細胞因子功能的一類腫瘤細胞因子，較易受感染或炎性反應的影響，可以參與腫瘤細胞的生長、黏附、轉(zhuǎn)移及血液凝固。由hTERT活化、代謝而形成的纖維聚合體，在腫瘤細胞質(zhì)相連的網(wǎng)狀物中可見，是造成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)因子[7]。當血液中hTERT水平較高時，腫瘤處于高度惡性狀態(tài)，易造成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，多臟器受累，減弱胃的消化功能，增加患者發(fā)生惡病質(zhì)的風險。hTERT可以在腫瘤細胞表面形成一個保護層，抵抗化療，對胃鱗狀細胞癌核心腫瘤細胞的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移提供支持，導致不良預后的發(fā)生[8]。

GLⅠ1和GLⅠ2的生理特征包括促進腫瘤細胞的分化、增殖和進行淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，可與hTERT同期進行淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[9]。在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中，GLⅠ1和GLⅠ2的主要生理反應是可以同時作為“第一應激反應者”的角色。胃鱗狀細胞癌患者的癌細胞和正常細胞之間存在結(jié)構(gòu)和成分的差異，GLⅠ1和GLⅠ2可以被腫瘤細胞表達的受體激活。一旦激活GLⅠ1和GLⅠ2，其形狀和生長因子發(fā)生改變，釋放血液中生物活性脂質(zhì)，使腫瘤增殖和遺傳能力增強，造成惡病質(zhì)。胃鱗狀細胞癌患者的癌細胞可以觸發(fā)GLⅠ1和GLⅠ2激活系統(tǒng)，其調(diào)控可被癌細胞表面受體、細胞產(chǎn)物、細胞外因子和免疫細胞放大，進而增加惡性轉(zhuǎn)移率[10]。在胃鱗狀細胞癌發(fā)生、發(fā)展中GLⅠ1和GLⅠ2均有其特異性[11]。GLⅠ1是一種外圍腫瘤細胞依賴性蛋白酶，在某些類型的癌癥中，特別是胃鱗狀細胞癌的癌細胞中，存在高度特異性[12]。GLⅠ1是胃鱗狀細胞癌腫瘤標志物細胞因子中的重要成分，可以作為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標志。腫瘤細胞具有催化GLⅠ1凝集后高表達的作用，并可以促進淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床可以作為一種有效的腫瘤標志物指示因子；當其含量顯著增多時，應警惕胃鱗狀細胞癌已經(jīng)發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，增加了胃鱗狀細胞癌患者惡變的風險[13]。GLⅠ2可以直接或間接激活胃鱗狀細胞癌其他相關(guān)因子的表達如Pl、zFHxlB、ZEB2等，并在細胞膜上表達，此時，白細胞也被激活，釋放蛋白酶和氧自由基，促進GLⅠ2表達。表達后的GLⅠ2，可以激發(fā)誘導黏附分子、白細胞和血管內(nèi)皮細胞作為腫瘤合成的基質(zhì)，為胃鱗狀細胞癌患者的癌細胞增殖和分化提供基礎(chǔ)[14]。本研究中，觀察組患者的3種腫瘤標志物細胞因子陽性表達率較高，說明胃鱗狀細胞癌患者的腫瘤細胞增殖、分化后可以使血清中腫瘤標志物因子明顯增多；處于晚期的患者，3種腫瘤標志物的陽性表達率較高，說明病理分期越高，惡性程度越高，血清腫瘤因子的表達越高；hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽性表達率與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，說明惡性程度越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越高，血清腫瘤標志物含量越多，陽性表達特征越明顯。本研究檢測胃鱗狀細胞癌患者的hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的陽性表達率，發(fā)現(xiàn)患者的惡性程度和轉(zhuǎn)移率越高，這3種腫瘤標志物的表達率越高。通過這種方法，可以有效地檢測胃鱗狀細胞癌的病理分期，及時治療。綜上所述，胃鱗狀細胞癌患者的hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的陽性表達率較高，且與分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有密切的關(guān)系。

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