吳冬梅 吳艷霞 袁振興 王志強(qiáng) 郭潤民

1.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理診斷與研究中心，廣東湛江 524001；2.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究中心，廣東湛江 524001；3.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，廣東湛江 524001

肺癌是我國最常見的癌癥[1]，約15%的肺癌患者在初診時(shí)已存在胸腔積液， 約50%的患者在疾病進(jìn)展過程中出現(xiàn)胸腔積液[2]。目前，我國對(duì)于惡性胸腔積液的精確診斷技術(shù)尚未成熟， 鑒別良、惡性胸腔積液依然存在爭(zhēng)議[3]。近年來我院開展的胸水液基細(xì)胞學(xué)檢查在胸水標(biāo)本的制片質(zhì)量和制片滿意度方面優(yōu)于傳統(tǒng)涂片細(xì)胞學(xué)，對(duì)惡性胸腹水的診斷陽性率略高于傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)檢查，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[4]。為了解決這一問題，我院采用液基細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)合改良細(xì)胞蠟塊技術(shù)，并進(jìn)一步做免疫組化檢查，取得了理想結(jié)果[5-7]。為觀察細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化技術(shù)在提高肺癌胸水細(xì)胞學(xué)陽性檢出率以及提供分析診斷方面的應(yīng)用價(jià)值，我院進(jìn)行了相關(guān)研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

表1　兩種細(xì)胞學(xué)檢查對(duì)肺癌診斷的靈敏性和特異性比較

1　資料與方法

1.1　一般資料

收集我院2015年10月～2017年12月經(jīng)活檢確診肺癌患者胸水58例進(jìn)行研究。其中男41例，女17例，年齡28～88歲，平均（56.33±12.33）歲。

1.2　方法

1.2.1研究方法 所有胸水標(biāo)本分別進(jìn)行薄層液基細(xì)胞學(xué)沉降式制片和制備成細(xì)胞蠟塊后結(jié)合免疫組織化學(xué)染色兩種方法進(jìn)行檢查。

薄層液基細(xì)胞學(xué)沉降式制片：取新鮮胸水標(biāo)本100mL放置到保存液中，搖勻，取50mL使用1500r/min的離心機(jī)離心5min，棄掉上清液，加入5mL細(xì)胞固定液，搖勻，以1500r/min速度離心5min，棄掉上清液，加入1mL緩沖液，搖勻，取其中800μL在沉降倉內(nèi)靜置20min，棄除沉降液，加1mL沖洗液沖洗2次，1mL緩沖液2次，使用蘇木素染液1mL染色，放置90s，倒掉，再次使用1mL沖洗液和1mL緩沖液沖洗2次，使用伊紅染液1mL染色10s，再次沖洗2次，取出玻片，使用無水乙醇2min，二甲苯2min后封片。

制備細(xì)胞蠟塊并使用免疫組化染色法：薄層液基細(xì)胞學(xué)沉降式制片后剩余胸水樣本加入保存液，在4℃冰箱靜置至細(xì)胞完全沉淀，棄除上清液，以2000r/min速度離心5min，取沉淀加入5mL福爾馬林溶液震蕩后以2000r/min速度離心5min，取沉淀，加入10mL 95%乙醇脫水，以2000r/min離心5min，在擦鏡紙包裹下放入取材盒，脫水3h后常規(guī)包埋，切片。使用MaxVision二步法對(duì)細(xì)胞蠟塊進(jìn)行免疫組化染色。將蠟塊切成厚度為3μm的蠟片，防脫玻片裱片，使用二甲苯進(jìn)行脫蠟，常規(guī)梯度乙醇至水，高壓修復(fù)，以3%H2O2室溫下放置10min，一抗37℃孵育60min，二抗37℃15min，使用DAB顯色。

1.2.2分析指標(biāo)[3]以活檢標(biāo)本病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，觀察兩種制片方法診斷的靈敏度和特異度。以及比較制片染色效果情況，觀察細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化結(jié)果對(duì)于肺癌分析診斷的準(zhǔn)確率。靈敏度=真陽性人數(shù)/（真陽性人數(shù)+假陰性人數(shù)）×100%。特異度=真陰性人數(shù)/（真陰性人數(shù)+假陽性人數(shù)）×100%。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0版對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1　兩種細(xì)胞學(xué)檢查對(duì)肺癌診斷的靈敏性和特異性比較

薄層液基細(xì)胞學(xué)沉降式制片對(duì)58例肺癌患者胸水診斷的靈敏度和特異度分別為81.25%、60.00%，明顯低于細(xì)胞蠟塊聯(lián)合免疫組化染色法的95.83%、90.00%，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。薄層液基細(xì)胞學(xué)沉降式制片得到的圖像對(duì)比清晰，細(xì)胞分別均勻，具有較好的細(xì)胞形態(tài)，但是對(duì)于成團(tuán)、腺樣等結(jié)構(gòu)顯示的較少，見圖1。細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化染色法得到的涂片染色對(duì)比清晰，細(xì)胞數(shù)目更為富集，均勻，細(xì)胞排列方式和結(jié)構(gòu)在多數(shù)涂片中均能清楚顯示，見圖2。

2.2　細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化結(jié)果對(duì)于肺癌分析診斷的準(zhǔn)確率觀察

圖1　薄層液基細(xì)胞學(xué)沉降式制片（HE×400）

圖2　細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化染色法（HE×400）

48例經(jīng)病理檢查確診為肺癌的患者，細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化染色法檢查總準(zhǔn)確率為95.83%，其中腺癌的準(zhǔn)確率最高，為94.12%。未分化癌檢查的準(zhǔn)確率最低，2例均未檢測(cè)，4例標(biāo)本細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化染色法確診為肺癌，但是無法分型。見表2。

表2　細(xì)胞蠟塊聯(lián)合免疫組化結(jié)果對(duì)于肺癌分析診斷的準(zhǔn)確率觀察

3　討論

晚期肺癌患者的主要癥狀表現(xiàn)包括胸腔積液，對(duì)于惡性腫瘤引起的漿膜腔積液，影像學(xué)檢查由于受積液干擾一般無法準(zhǔn)確觀察原發(fā)灶，也無法通過內(nèi)鏡活檢、體外穿刺及手術(shù)切除獲得組織標(biāo)本，只能依靠漿膜腔積液細(xì)胞病理學(xué)檢測(cè)尋找惡性證據(jù)[8]。因此漿膜腔積液細(xì)胞病理學(xué)診斷可能是這類患者唯一能起到確診作用的選擇[9]。液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于臨床有100余年的歷史，在婦科標(biāo)本的檢測(cè)中得到廣泛應(yīng)用[10]，并逐漸推廣用于漿膜腔積液[10]和尿液[11]脫落細(xì)胞學(xué)檢查。其與普通涂片相比，均勻薄層，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，背景干凈，能清晰的觀察細(xì)胞三維結(jié)構(gòu)，肺癌診斷率較高，但敏感性和特異性不高[4]。因?yàn)榻?jīng)過此種技術(shù)制備的細(xì)胞失去細(xì)胞排列方式和背景細(xì)胞，因此對(duì)于未分化癌、反應(yīng)性間皮細(xì)胞癌等鑒別準(zhǔn)確性較低，也存在免疫組化染色率低，標(biāo)本不易長期保持等問題[6，12]。而改良的細(xì)胞蠟塊技術(shù)是離心富集標(biāo)本去除血細(xì)胞后，經(jīng)過福爾馬林和95%乙醇先后固定，再進(jìn)行脫水、石蠟包埋進(jìn)行制片[5，13]。從本次研究中看，液基細(xì)胞學(xué)對(duì)58例疑似肺癌患者診斷的靈敏度和特異度分別為81.25%、60.00%，明顯低于細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化染色法的95.83%、90.00%，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而且細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化染色法能夠更好的檢查出細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，解決了傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)檢查的缺陷。48例經(jīng)病理檢查確診為肺癌的患者，細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化染色法檢查總準(zhǔn)確率（95.83%），其中腺癌的準(zhǔn)確率最高（94.12%），未分化癌檢查的準(zhǔn)確率最低，2例均未檢測(cè)[5,9,14]。

采用液基細(xì)胞學(xué)法與細(xì)胞蠟塊組織切片法相結(jié)合，兩者間相互補(bǔ)充能夠更好的提升診斷效果，還能夠達(dá)到組織學(xué)活檢的目的，能為腫瘤的組織學(xué)分型、來源以及個(gè)體化治療提供幫助[15]。晚期肺癌患者有時(shí)以體腔積液為首發(fā)癥狀，而傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)檢查僅提供惡性腫瘤的診斷，對(duì)于原發(fā)病灶的尋找并沒有幫助， 但細(xì)胞蠟塊組織切片具有可以反復(fù)連續(xù)切片的優(yōu)點(diǎn)，因此應(yīng)用細(xì)胞切片進(jìn)行的其他輔助檢查，可以為尋找原發(fā)病灶提供線索，同時(shí)能夠進(jìn)行組織分型及分子病理檢測(cè).有效指導(dǎo)腫瘤的分子靶向治療，該方法的應(yīng)用對(duì)于不易獲取組織標(biāo)本的晚期肺癌患者具有更重要的意義[16]。將液基細(xì)胞學(xué)法與細(xì)胞蠟塊組織切片法相結(jié)合后，作為一種改良的細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)，更能提高肺癌組織學(xué)分型的符合率。液基細(xì)胞學(xué)法聯(lián)合細(xì)胞蠟塊組織切片法對(duì)于難以取得組織活檢標(biāo)本的肺癌（如腫塊表面出血壞死、氣管鏡下看不到腫塊等情況）的病理組織分型診斷有著非常重大的意義。

綜上所述，細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化技術(shù)能夠明顯提高肺癌胸水細(xì)胞的陽性檢出率，且能夠?yàn)榘┌Y分型診斷提供可靠依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Chen WQ，Zuo TT，Zheng RS，et al.Lung cancer incidence and mortality in China in 2013[J].Zhonghua Zhong Liu Za Zhi，2017，39（10）：795-800.

[2] Tremblay A，Michaud G.Single-center experience with 250 tunnelled pleural catheter insertions for malignant pleural effusion[J].Chest，2006，129（2）：362-368.

[3] Xu CH，Zhan P，Yu LK，et al.Diagnostic value of pleural interleukin 17 and carcinoembryonic antigen in lung cancer patients with malignant pleural effusions[J].Tumour Biol，2014，35（2）：1599-1603.

[4] 王應(yīng)霞，趙珍，楊梅秋，等.液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)在良惡性胸腹水鑒別診斷中的應(yīng)用[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，37（4）：45-48.

[5] 廖志東，朱文標(biāo)，鄭少秋，等.細(xì)胞蠟塊及免疫組化在肺腺癌癌性胸水診斷中的應(yīng)用[J].海南醫(yī)學(xué)，2017（11）：1773-1775.

[6] 何立群.液基細(xì)胞學(xué)與細(xì)胞蠟塊對(duì)肺癌的診斷價(jià)值比較[J].浙江實(shí)用醫(yī)學(xué)，2015（1）：53-55.

[7] 楊新，王秋實(shí)，李艷青，等.細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化有效提高胸水細(xì)胞學(xué)陽性檢出率的臨床研究[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2014（12）：2894-2897.

[8] Canto A，F(xiàn)errer G，Romagosa V，et al.Lung cancer and pleural effusion. Clinical significance and study of pleural metastatic locations[J].Chest，1985，87（5）：649-652.

[9] Assawasaksakul T，Boonsarngsuk V，Incharoen P.A comparative study of conventional cytology and cell block method in the diagnosis of pleural effusion.[J].European Respiratory Journal, 2017，48（suppl 60）：5076.

[10] Rossi E，Bizzarro T，Martini M，et al.The Role of Liquid Based Cytology and Ancillary Techniques in the Peritoneal Washing Analysis：Our Institutional Experience[J].Plos one，2017，12（1）：e168625.

[11] 李紅全，唐顓.尿液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物對(duì)膀胱癌診斷價(jià)值的研究[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2014（35）：19-21.

[12] 魏麗.肺癌胸腔積液液基細(xì)胞學(xué)與沉渣包埋的對(duì)比研究[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2016（5）：31-32.

[13] 權(quán)春姬，金仁順.細(xì)胞蠟塊結(jié)合免疫組化在小細(xì)胞癌診斷中應(yīng)用價(jià)值[J].臨床肺科雜志，2017（6）：1009-1011.

[14] 羅麗花，張婉儀，劉惠娟，等.細(xì)胞塊聯(lián)合免疫組化在胸腔積液診斷中的應(yīng)用[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2015（8）：904-907.

[15] 張麗華，王雪晴，王國慶，等.細(xì)胞蠟塊在晚期腺癌診斷和肺腺癌個(gè)體化治療中的應(yīng)用價(jià)值[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2014，30（2）：166-170.

[16] 張小偉，黃必飛，陳艷，等.細(xì)胞塊技術(shù)在惡性漿膜腔積液組織來源及分子病理檢測(cè)中的應(yīng)用[J].浙江醫(yī)學(xué)，2015，37（23）：1891-1894.