王海瑞 ,陳少波 ,徐振東

(1. 蘇州出入境檢驗(yàn)檢疫局 檢驗(yàn)檢疫綜合技術(shù)中心，江蘇 蘇州 215104；2. 蘇州世標(biāo)檢測(cè)技術(shù)有限公司，江蘇 蘇州 215104)

隨著社會(huì)生活水平的不斷提高,人們開始注重自己的儀容儀表，染發(fā)作為美容的方式之一,染發(fā)人數(shù)逐年增多,同時(shí)中老年人群中染發(fā)者比例也呈上升趨勢(shì). 永久性染發(fā)劑多為氧化型染發(fā)劑，是由多種芳香族類化合物組成，而這些芳香族化合物的一些衍生物或者異構(gòu)體具有一定的致敏性和致突變性[1]. 近年來(lái)因使用染發(fā)劑后出現(xiàn)接觸性皮炎的報(bào)道越來(lái)越多,癥狀包括:頭皮瘙癢、水腫、糜爛、低熱、腹部腫大,甚至全身毛發(fā)脫落，其潛在的健康效應(yīng)日益受到人們的關(guān)注. 我國(guó)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)對(duì)染發(fā)劑中多種染料的使用進(jìn)行了嚴(yán)格的規(guī)定.

目前染料的測(cè)定方法包括氣相色譜法[2-3]、液相色譜法[4-7]、氣相色譜-質(zhì)譜法[8-9]、液相色譜-質(zhì)譜法[10-11]和薄層色譜法等. 這些方法中，能夠同時(shí)對(duì)多種組分進(jìn)行定性定量分析，且具有較好分離效果的較少. 歐盟指令82/434/EEC推薦的薄層色譜法雖能較好的分離和鑒別各組分，但對(duì)其進(jìn)行準(zhǔn)確的定量分析具有一定的難度. 我國(guó)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015版)7.2中采用高效液相色譜法檢測(cè)了對(duì)苯二胺等32種組分，此方法使用不同的流動(dòng)相，分為三組進(jìn)行測(cè)定. 7.1 中采用高效液相色譜法檢測(cè)對(duì)苯二胺等8種組分，此法分離效果不佳，存在峰型差等問(wèn)題. SN/T 3829-2014 標(biāo)準(zhǔn)方法僅對(duì)2-硝基-p-苯二胺及其鹽單一物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定. 與其它儀器方法比較，采用氣相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定時(shí)，對(duì)毛細(xì)管柱和儀器的污染比較嚴(yán)重，采用液相色譜-質(zhì)譜法的儀器成本較高，不具備普遍推廣意義. 因此，有必要開發(fā)一種新的檢測(cè)方法，既能滿足多種染料組分的同時(shí)測(cè)定及定性、定量分析，且兼顧檢測(cè)成本和普遍使用等要求.

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀(Agilent 1260)，配有DAD檢測(cè)器(美國(guó)安捷倫公司).

乙腈(色譜純，安普)，無(wú)水乙醇(優(yōu)級(jí)純，滬試)，亞硫酸氫鈉(分析純,國(guó)藥)，乙酸銨(分析純，滬試)，標(biāo)準(zhǔn)品物質(zhì)(Dr. Ehrenstorfer GmbH)

1.2 試樣前處理

稱取試樣0.500 g于25 mL容量瓶中，加入無(wú)水乙醇和水(體積比為1∶1)并定容至刻度，渦旋，超聲提取15 min(超聲溫度控制在20 ℃以下，減少染發(fā)劑中測(cè)定各染料組分的氧化)，取10 mL溶液于5 000 r/min條件下離心5 min，取上層清液，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，濾液經(jīng)液相色譜儀分析測(cè)定.

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別稱取100.00 mg標(biāo)準(zhǔn)品物質(zhì)于10 mL容量瓶中，用2 g/L亞硫酸氫鈉和無(wú)水乙醇(體積比為1∶1)溶解并定容，搖勻，配置成質(zhì)量濃度為10 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用無(wú)水乙醇配置成質(zhì)量濃度為0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.50 mg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液.

1.4 色譜條件

色譜柱：Poroshell 120 Bonus-RP(100 mm×3.0 mm×2.7 μm)；流動(dòng)相: 10 mmol/L乙酸銨-乙腈(洗脫條件如表1所列)；流速：0.5 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；進(jìn)樣量：5 μL；柱溫：25 ℃.

表1 洗脫條件Table 1 Elution conditions

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱的選擇

《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015版中,染發(fā)劑的兩種檢驗(yàn)方法分別使用了C18 柱(250 mm×4.6 mm×10 μm)和RP-AMIDE C16 柱(250 mm×4.6 mm×5 μm)及保護(hù)柱： RP-AMIDE CAMIDE C16 (20 mm×4 mm×5 μm). 使用C18 柱測(cè)定對(duì)苯二胺等8種組分時(shí)，存在峰型有拖尾和分離效果差等現(xiàn)象；RP-AMIDE C16 柱對(duì)苯二胺等32種組分測(cè)定過(guò)程中，將32種組分分成了3組，使用不同的檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)定，對(duì)一個(gè)樣品進(jìn)行不同組別的組分進(jìn)行測(cè)定時(shí)，要使用不同的檢測(cè)方法分開測(cè)定，大大增加了檢測(cè)周期和檢測(cè)成本. 色譜柱Poroshell 120 Bonus-RP具有較強(qiáng)的耐水性，可直接用水相進(jìn)行沖洗，測(cè)定染發(fā)劑中多種染料組分，具有峰型、分離效果好的特點(diǎn)，而且可以一次完成多種組分的同時(shí)測(cè)定.

2.2 流動(dòng)相的選擇

在選擇流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)避免很多標(biāo)準(zhǔn)方法中使用的相對(duì)復(fù)雜的磷酸鹽混合緩沖溶液. 通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用乙腈和水按一定比例作為流動(dòng)相分析時(shí)，流動(dòng)相配制過(guò)程雖然方便快捷，但在出峰時(shí)間上具有重疊效應(yīng)，分離效果相對(duì)較差，而采用乙腈+乙酸銨溶液作為流動(dòng)相，分析過(guò)程能達(dá)到好的分離效果，因此最終確認(rèn)采用乙腈和乙酸銨溶液梯度洗脫分析測(cè)定染發(fā)劑中染料組分.

2.3 色譜分析

根據(jù)對(duì)色譜柱和流動(dòng)相優(yōu)化后確定的儀器條件進(jìn)行染發(fā)劑中多種染料組分的分析測(cè)定，得到如圖1、2所示的液相色譜圖. 其中，圖1是根據(jù)每個(gè)單一標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和紫外光譜圖進(jìn)行定性分析，然后一一對(duì)應(yīng)記錄其編號(hào). 定量分析則依據(jù)光譜圖峰面積進(jìn)行. 從圖1、2可以看出，色譜圖中各組分具有較好的分離效果.

圖1 染料標(biāo)準(zhǔn)溶液液相色譜圖(1) 對(duì)苯二胺，(2) 間苯二酚，(3) 對(duì)氨基苯酚，(4) 間氨基苯酚，(5) 4-氨基間甲酚，(6) 氫醌，(7) 4-氨基-2-羥基甲苯，(8) 2-硝基對(duì)苯二胺，(9) 甲苯-2,5-二胺硫酸鹽，(10) 6-羥基吲哚Fig.1 Liquid chromatogram of dye standard soloution(1) p-phenylenediamine，(2) Resorcine，(3) p-Aminophenol，(4) m-Aminophenol，(5) 4-Amino-m-cresol，(6) Hydroquinone，(7) 4-Amino-2-hydroxytoluene，(8) p-Diamino-2-nitrobenzene, (9) 2,5-Diaminotoluene sulfate，(10) 6-Hydroxyindole

圖2 某樣品染發(fā)劑中液相色譜圖Fig.2 Liquid chromatogram of Some sample hair dye

2.4 線性關(guān)系與檢出限

以空白樣品基質(zhì)配制一系列不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.50 mg/mL),以染料組分的峰面積Y為縱坐標(biāo)，濃度值X為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸，結(jié)果表明各染料組分在10～0.5 mg/mL范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系和相關(guān)系數(shù)，同時(shí)，以實(shí)際檢測(cè)時(shí)的信噪比RSN≥3，得出方法檢出限，結(jié)果如表2所列.

表2 線性方程、相關(guān)系數(shù)與檢出限Table 2 Liner equations, correlation coefficients and detection limits

為檢驗(yàn)方法的穩(wěn)定性和重復(fù)性，對(duì)相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行10次重復(fù)進(jìn)樣，計(jì)算變異系數(shù)為0.65%～4.3%，表明本方法的重復(fù)性和穩(wěn)定性良好.

2.5 回收率

采用標(biāo)準(zhǔn)加入法，在已知染料組分含量的某品牌染發(fā)劑中進(jìn)行3水平(625.0、1 250.0、2 500.0 μg)6個(gè)平行的添加回收試驗(yàn),按上述樣品處理方法提取檢測(cè),計(jì)算各染料組分回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差. 在試驗(yàn)條件下，3個(gè)添加水平下各染料的平均回收率范圍為87.3%～119.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.87%～5.91%，如表3所列， 表明該方法回收率較高且穩(wěn)定.

表3 染發(fā)劑中染料3個(gè)添加水平下染料組分加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)Table 3 Spiked recoveries and RSDs of dye components in hair dye(n=6)

續(xù)表3

3 結(jié)論

試驗(yàn)表明,本文使用色譜柱Poroshell 120 Bonus-RP,通過(guò)液相色譜法可以同時(shí)測(cè)定染發(fā)劑中10種對(duì)苯二胺等染料組分，而且具有較好的分離效果和回收率.該法具有分析速度快、分析效果好等特點(diǎn)，可以快速完成大量大量的染料檢驗(yàn)工作，這對(duì)染發(fā)劑中染料的測(cè)定具有較好的應(yīng)用價(jià)值，對(duì)第三方檢測(cè)具有一定的指導(dǎo)作用.

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