李文海，李秀云，藺大偉，孫紅雷，邵 凱

(山東省泰安市公安局刑警支隊(duì)，山東 泰安 271000)

血液中鎮(zhèn)靜安眠類藥物的篩選分析一般采用液液萃取、固相萃取、快速溶劑萃取等方法. 但這些方法存在溶劑消耗多、萃取時(shí)間長、儀器購置率低等缺點(diǎn)，具有一定的局限性[1-4]. 固相支撐液液萃取(SLE)以比表面積高、化學(xué)惰性好的多孔硅藻土為液液分配載體，充分發(fā)揮硅藻土多孔性、大比表面、低表面活性等特點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)微觀液液萃取，適合由生物體液內(nèi)萃取非極性和中等極性目標(biāo)物，可極大去除內(nèi)源性干擾物質(zhì)，并可實(shí)現(xiàn)高通量樣品操作，是分析實(shí)驗(yàn)室的一種高效樣品前處理工具. SLE使用相應(yīng)的萃取柱，僅需上樣和洗脫兩步，即可從水相中萃取目標(biāo)化合物[5-7]. 本試驗(yàn)采用固相支撐液液萃取柱對血液樣品中阿米替林、舒樂安定、咪達(dá)唑侖、異丙嗪和氯丙嗪5種鎮(zhèn)靜安眠類藥物進(jìn)行萃取，用公安行業(yè)基層實(shí)驗(yàn)室配備較多的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行測定，具有操作簡單、快速等優(yōu)點(diǎn)，為基層實(shí)驗(yàn)室開展該類藥物的測定提供了新的檢驗(yàn)思路.

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Thermo Fisher TSQ8 EVO氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Thermo Fisher Scientific)；Biotage固相支撐液液萃取柱(瑞典Biotage);電子天平(瑞士梅特勒).

試劑：甲醇、氨水、環(huán)己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷均為分析純；阿米替林、舒樂安定、咪達(dá)唑侖、異丙嗪、氯丙嗪均購自公安部物證鑒定中心.

1.2 標(biāo)準(zhǔn)樣品制備

用電子天平準(zhǔn)確稱取上述5種藥物各10 mg, 用色譜純甲醇定容至10 mL,配制成1.0 mg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，冰箱保存，使用時(shí)根據(jù)需要配置不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液. 空白血樣來源于不含上述混合樣的健康人血.

1.3 血液樣品處理

取血樣2.0 mL于離心管中，分別加入100 μL質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液后混勻. 取400 μL混勻后的血樣于離心管中，再加入400 μL氨水緩沖溶液，將混勻后的溶液加入固相支撐液液萃取柱進(jìn)行上樣，樣品在填料的表面擴(kuò)散并被吸收，直至整個(gè)樣品被填料吸收，并且沒有液體流出. 5 min后，根據(jù)試驗(yàn)條件選取洗脫劑，以1 mL/min的流速洗脫藥物，收集洗脫液于試管中，氮吹儀濃縮至干，加200 μL甲醇溶解，待測.

1.4 儀器分析條件

氣相色譜：VF-5 MS 色譜柱( 30 m×0.25 mm×0.25 μm)；載氣為高純氦氣(純度 99.999%)，流量為1.0 mL/min，汽化室溫度為260 ℃；分流比為10∶1；進(jìn)樣量為1.0 μL. 程序升溫：初始柱溫 80 ℃，保持1 min，以10 ℃/min升至180 ℃，再以40 ℃/min速率升至280 ℃，保持12 min.

質(zhì)譜：傳輸線溫度為280 ℃；離子源溫度為200 ℃；電子轟擊離子源；電離能量為70 eV；溶劑延遲時(shí)間為3 min.

2 結(jié)果與討論

2.1 萃取條件優(yōu)化

2.1.1 緩沖溶液pH的選擇

加入氨水緩沖溶液的目的是降低樣品粘度，獲得平順的流速. 對于在水溶液中可離解的分析物，可應(yīng)用pH 控制緩沖液抑制其離解，增強(qiáng)提取效率. 分別取pH為8、10、12的氨水緩沖溶液加入3份已加入藥物的混合血樣中，按照1.3方法在同一條件下進(jìn)行萃取，比較不同pH緩沖溶液下萃取回收率，試驗(yàn)結(jié)果如表1所列. 由表1可見，pH為10時(shí)的萃取效果最佳.

表1 不同pH氨水緩沖溶液對血液中鎮(zhèn)靜催眠藥物提取回收率的比較Table 1 Recovery rates of sedative hypnotic drugs by different pH ammonia buffer solutions

2.1.2 萃取溶劑的選擇

取3份加入藥物的血樣,按照1.3方法進(jìn)行處理，選擇乙酸乙酯、環(huán)己烷和二氯甲烷3種有機(jī)溶劑進(jìn)行洗脫，測定回收率，試驗(yàn)結(jié)果如表2所列. 由表2可見，洗脫劑為乙酸乙酯時(shí)血樣中安眠鎮(zhèn)靜類藥物的回收率最高，其次是環(huán)己烷、二氯甲烷. 故選用乙酸乙酯作為洗脫溶劑.

表2 不同洗脫劑對血液中鎮(zhèn)靜催眠藥物提取回收率的比較Table 2 Recovery rates of sedative hypnotic drugs by different eluents

2.1.3 洗脫劑用量的選擇

洗脫劑的用量對萃取效果的影響較大，分別使用2.0、5.0、7.0 mL乙酸乙酯作為洗脫溶劑，取3份已加入藥物的混合血樣按照1.3方法操作步驟進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果如表3所列. 由表3可見，2.0 mL乙酸乙酯能夠把樣品組分洗脫出來，5.0 mL時(shí)效果最好，故選用5.0 mL乙酸乙酯作為洗脫溶劑.

表3 不同洗脫劑用量對血液中鎮(zhèn)靜催眠藥物提取回收率的比較Table 3 Recovery rates of sedative hypnotic sedative drugs by different dosages of eluent

2.2 回收率試驗(yàn)

采用空白血樣加標(biāo)的方式進(jìn)行回收率試驗(yàn)，分別添加3個(gè)水平，每個(gè)水平單獨(dú)測定5次，其總離子流圖如圖1所示，回收率和精密度結(jié)果如表4所列. 由表4可見，5種安眠鎮(zhèn)靜類藥物在血液中的添加回收率在70.1%～90.8%之間，變異系數(shù)均小于5.3%，可知該方法的準(zhǔn)確度較高，精密度較好，能夠滿足實(shí)際辦案工作中安眠藥檢驗(yàn)的需要.

2.2 工作曲線和檢出限

取1.0 mg/mL 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配制 0.5、2. 0、5.0、10.0、20.0 μg /mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按本文方法進(jìn)行 GC/MS 檢測，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并按信噪比(S/N = 3)計(jì)算檢出限，得到5種藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)(r)和檢出限，如表5所列. 結(jié)果表明，5 種鎮(zhèn)靜安眠類藥物濃度在0.5～20 μg /mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.

3 實(shí)際樣品檢測

2017年8月，我市某刑偵大隊(duì)送檢了張某涉嫌故意傷害案的受害人李某某的血液檢材. 取1 mL檢材，通過上述方法用固相支撐液液萃取前處理后，進(jìn)GC/MS分析，檢出咪達(dá)唑侖，其質(zhì)量濃度為12.8 μg/mL，為該案件定性提供依據(jù).

圖1 優(yōu)化條件下血液中鎮(zhèn)靜安眠類藥物的總離子流圖(TIC)Fig.1 TIC of sedative hypnotic drugs in blood under optimized conditions注：從左至右依次為阿米替林(18.47 min)、異丙嗪(19.25 min)、氯丙嗪(21.16 min)、咪噠唑侖(21.99 min)、舒樂安定(25.98 min)

藥物名稱原質(zhì)量濃度/(μg/mL)添加質(zhì)量濃度/(μg/mL)測得質(zhì)量濃度/(μg/mL)回收率±標(biāo)準(zhǔn)偏差(X±SD)精密度(RSD/%)阿米替林(58)05.04.080.7±4.35.310.07.373.4±1.52.020.016.683.4±3.13.7舒樂安定(259)05.03.570.5±2.13.010.07.575.4±3.04.020.015.175.4±3.04.0咪達(dá)唑侖(310)05.03.570.1±3.55.010.07.272.2±3.34.620.014.874.0±2.93.9異丙嗪(72)05.04.386.9±4.14.710.08.887.6±1.31.520.018.290.8±3.13.4氯丙嗪(58)05.04.181.9±3.34.010.08.988.7±2.52.820.016.883.8±2.83.3

注：藥物名稱后括號內(nèi)數(shù)字為該藥物定量離子.

表5 5種安眠鎮(zhèn)靜類藥物的線性方程和相關(guān)系數(shù)Table 5 Linear equations and correlation coefficients of five sedatives

4 結(jié)論

應(yīng)用樣品的前處理新技術(shù)固相支撐液液萃取，結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，建立了5種鎮(zhèn)靜安眠類藥物同時(shí)提取測定的分析方法. 通過對實(shí)際樣品的檢測，表明該方法具有檢材用量少、前處理簡單、回收率好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，可用于實(shí)際案例血液中鎮(zhèn)靜安眠類藥物的提取檢驗(yàn)鑒定.

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