郭興蕾，徐海星，許沛虎，林世和

(1.武漢理工大學(xué)化學(xué)化工與生命科學(xué)學(xué)院，湖北 武漢　430070； 2.武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥學(xué)部，湖北 武漢　430022)

*碩士研究生。研究方向:中藥藥物制劑、生物材料。E-mail:904217413@qq.com

#通信作者：主任藥師。研究方向：中藥材及中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail:1614407172@qq.com

大黃具有止血的作用，《傷寒論》中“血自下，下者愈”及《血證論》中“大黃一味，是氣藥，又是血藥，止血而不留瘀，尤為妙藥”為大黃止血?jiǎng)?chuàng)立了理論基礎(chǔ)[1]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明[2]，沒食子酸為大黃收斂止血作用的主要有效成分。依據(jù)“炒炭存性”，將大黃制成大黃炭，使其瀉下作用減弱，而止血作用增強(qiáng)[3]。臨床采用大黃炭治療慢性腎衰竭、消化性潰瘍出血，療效顯著[4]。但是，對(duì)于大黃“炒炭存性”一直依靠傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)判斷[5]，龍全江等[6]通過顯微鏡觀察大黃炮制前后的導(dǎo)管、簇晶、淀粉粒和木栓細(xì)胞等，發(fā)現(xiàn)變化明顯，初步探索了“炒炭存性”的機(jī)制，然而并未建立詳細(xì)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版)大黃炭項(xiàng)下炒炭法的“炒至表面焦黑色、內(nèi)部焦褐色”[7]仍然不夠客觀，在炮制過程中，每批樣品間的差異較大。因此，本研究根據(jù)中醫(yī)藥老專家余南才的傳統(tǒng)炮制經(jīng)驗(yàn)，檢測(cè)了不同炮制時(shí)間大黃炭的紅外指紋圖譜，為大黃炭炮制工藝和飲片質(zhì)量控制提供參考[8]。

1　材料

1.1　儀器

Nicolet6700型傅里葉紅外光譜儀(Thermo Electron Scientific Instruments)；十萬分之一電子天平(Sartorius)；電爐；鐵鍋。

1.2　藥品與試劑

大黃(湖北天濟(jì)中藥飲片有限公司，批號(hào)：20151191)，經(jīng)余南才主任藥師鑒定為甘肅唐古特大黃(RheumtanguticumMaxim.ex Balf.)的干燥根和根莖；溴化鉀(光譜純，上海國(guó)藥集團(tuán)公司)；甲醇為色譜純，水為雙重蒸餾水，其他所用試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1　大黃炭的制備

將生大黃飲片錘碎成質(zhì)量4～6 g的均勻小塊，稱質(zhì)量，每份100 g?？刂苹鹆σ恢?，分別按照《中華人民共和國(guó)藥典》炒炭法，炒0、12、15、18、20、22、24、30和35 min，得到樣品1—9[9]。

2.2　供試品的制備

取樣品于60 ℃下干燥至恒質(zhì)量，粉碎過160目篩，備用。分取各樣品粉末約2 mg，壓成溴化鉀片[10]。

2.3　光譜條件

采用傅里葉紅外光譜儀，波數(shù)范圍：中紅外光區(qū)，波數(shù)4 000～400 cm-1；快速掃描：1次/s，最高分辨率為0.019 cm-1；紅外變溫附件(溫度范圍：室溫25 ℃～400 ℃)。

2.4　精密度試驗(yàn)

取同一供試品按“2.3”項(xiàng)下條件連續(xù)測(cè)定5次，所得紅外譜圖完全一致，RSD為1.5%，表明儀器精密度良好。

2.5　重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法平行制備5份，按“2.3”項(xiàng)下條件測(cè)定，所得紅外譜圖一致，RSD為1.2%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6　穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品放入真空干燥器內(nèi)保存，分別在0、1、2、3、4和5 h測(cè)定1次，記錄紅外譜圖。結(jié)果顯示，5 h內(nèi)所得譜圖基本一致，RSD為0.8%，表明供試品在5 h內(nèi)基本穩(wěn)定[10]。

2.7　聚類分析

通過Origin 8.0軟件及SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件等[11]對(duì)唐古特甘肅大黃進(jìn)行聚類分析[12-13]，結(jié)果見圖1、表1。

圖1　9種大黃炭紅外指紋圖譜Fig 1　IR fingerprint of 9 kinds of rhubarb charcoal

表19種大黃炭的特征吸收峰峰位
Tab1Infraredfingerprintcharacteristicabsorptionpeaklocationof9kindsofrhubarbcharcoal

樣品編號(hào)峰位值/cm-11341829271626151014481375131812681103105088282977966457751841523418292716251518145013721317126812411049867779864578519——334192926162515181449137213171265124211031050884779663576518—43421292716251519145113731317126812391165107610328657796635755185342129281624151914501371131612691238115710761026779663574518—634212928170716241518145013711316126912221157107610247806635735177342433492925162314501371131511581029780664578518————8342329251623145015161449137113151206115811041032884780665598578934263344292716221449136913151205115811051032889780667597517？

注：“—”表示該波段未出現(xiàn)明顯特征吸收峰

Note：“—” means no obvious characteristic absorption peak in this band.

2.8　紅外光譜圖分析

參考相關(guān)文獻(xiàn)[14-15]，并結(jié)合圖1、表1—2分析，大黃炒炭后各炮制品紅外圖譜波譜出現(xiàn)的位置基本相同，主要波峰出現(xiàn)在3 418、2 927、1 625、1 518、1 450、1 372、1 317、1 268、1 238、1 157、1 050、880、779、663、576和518 cm-1附近。大黃主要成分為蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚、大黃酚及大黃酸等。分析3 418 cm-1處的寬峰為大黃酸的羥基峰；2 927 cm-1為烴類C-H的伸縮振動(dòng)峰；1 625 cm-1為C=C的伸縮振動(dòng)峰；1 450 cm-1為苯環(huán)的骨架伸縮振動(dòng)；1 372 cm-1為烷烴的C-H彎曲振動(dòng)；1 317 cm-1為烯烴的C-H面內(nèi)彎曲振動(dòng)；1 268、1 238 cm、1 157和1 050 cm-1均屬于苯環(huán)C-H面內(nèi)彎曲振動(dòng)峰，屬于苯指峰；880、779和663 cm-1為芳環(huán)C-H面外彎曲振動(dòng)。各類紅外圖譜分析發(fā)現(xiàn)，炮制12 min與生品(炮制時(shí)間0 min)相比，開始出現(xiàn)1 241 cm-1左右的峰；炮制24 min時(shí)，1 241 cm-1峰消失，1250～950 cm-1范圍內(nèi)的峰為苯環(huán)的C-H面內(nèi)彎曲振動(dòng)峰，為苯指區(qū)，該區(qū)干擾大，應(yīng)用價(jià)值小；炮制20～24 min時(shí)，880 cm-1左右的峰消失，900～650 cm-1區(qū)間的峰為苯環(huán)的C-H面外彎曲振動(dòng)，其可判斷苯環(huán)上取代基的相關(guān)位置，可能是大黃其中的成分發(fā)生了取代基位置的改變；炮制22 min時(shí)出現(xiàn)了新的1 707 cm-1峰信號(hào)，是酯類化合物特征峰，表明出現(xiàn)了新的含酯基的化合物；炮制24 min后在3 349 cm-1左右出現(xiàn)了新的峰信號(hào)，而3 349 cm-1峰為羧基特征信號(hào)峰，說明大黃酸的含量發(fā)生了一定變化。由紅外光譜變化初步表明，炮制20～22 min左右，大黃成分開始發(fā)生顯著變化，出現(xiàn)的新生峰表示出現(xiàn)了新生的未知物質(zhì)。

2.9　相似度分析

比較9種樣品的相似度，樣品1—6的相似度很高，均>0.99；樣品7—9與前6組的相似度均在0.93左右，初步說明樣品6開始，即炮制時(shí)間在22 min后，大黃成分發(fā)生較大的變化，見表2。

2.10　大黃炭的質(zhì)量評(píng)定

中醫(yī)藥老專家經(jīng)驗(yàn)判斷樣品6(炮制22 min)達(dá)到“炒炭存性”要求，此時(shí)大黃炭飲片質(zhì)量最好，而樣品7—9則炮制太過。與紅外指紋圖譜所得結(jié)果吻合，即大黃在武火炒制22 min后，紅外圖譜和相似度發(fā)生了較大變化。

3　討論

本研究對(duì)象為不同炮制時(shí)間的同種中藥，根據(jù)化學(xué)分類學(xué)的觀點(diǎn)，其所含化學(xué)成分具有一定的相似性，因而紅外光譜圖具有很大的相似性，本研究中圖1已明顯體現(xiàn)。但隨著炮制時(shí)間和炮制程度的不同，大黃的化學(xué)成分發(fā)生了較大的變化?！俺刺看嫘浴钡膫鹘y(tǒng)經(jīng)驗(yàn)具有簡(jiǎn)便、易操作的優(yōu)點(diǎn)，但客觀量化指標(biāo)性不強(qiáng)，特別是老一輩藥工越來越少，對(duì)傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)的繼承與學(xué)習(xí)越來越難。紅外光譜技術(shù)已廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，技術(shù)成熟，易操作，重復(fù)性、穩(wěn)定性好，紅外指紋圖譜作為現(xiàn)代手段繼承發(fā)揚(yáng)傳統(tǒng)的“炒炭存性”具有較高的科學(xué)性和可操作性，可用于不同炮制時(shí)間大黃炭質(zhì)量控制的方法。

表2　9種大黃炭的相似度分析Tab 2　Similarity analysis of 9 kinds of rhubarb charcoal

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