劉 威

（營口市老邊區(qū)疾病預(yù)防控制中心微生物檢驗，遼寧 營口 115005）

真菌是臨床常見的致病菌之一，隨著廣譜抗生素的不斷更新?lián)Q代和免疫抑制劑藥物的不斷應(yīng)用及支持治療手段的不斷進步，臨床真菌感染的患者越發(fā)增多，目前實驗室傳統(tǒng)的真菌鏡檢和培養(yǎng)是鑒定真菌常用的方法，但是由于其培養(yǎng)時間過長、操作過于繁瑣、檢驗人員的水平參差不齊對真菌的鑒定工作造成了一定的影響，延誤了臨床醫(yī)師對疾病的治療錯過了疾病的最佳監(jiān)控時間[1]?；|(zhì)輔助激光解析電離飛行時間譜檢測（matrix assisted laser desorption ionization time of flight spectrum，MALDI-TOF），是一類新興的真菌檢測技術(shù)，近年來該技術(shù)被不斷地證實在細菌鑒定領(lǐng)域有著準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟的優(yōu)勢，被越來越多的醫(yī)院和防控中心所應(yīng)用，從一定程度上避免了病情的延誤，減輕了患者的經(jīng)濟負擔(dān)[2]。我疾控中心應(yīng)用不同的真菌檢測技術(shù)檢測真菌類型，旨在找出簡便易行、檢測率高的檢測方法，指導(dǎo)臨床治療和疾病的防控，報道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源：選自2015年4月至2016年4月于營口市疾控中心分離的真菌菌株100珠，采用信封法隨機分為試驗組和對照組，試驗組50例，對照組50例。

1.2 Vitek2全自動微生物鑒定系統(tǒng)鑒定：取真菌菌液轉(zhuǎn)移種植到沙堡弱培養(yǎng)基，將做好標(biāo)記，置于37 ℃的培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)2天后取出，將真菌于試管中調(diào)節(jié)濁度至2，應(yīng)用VITEK2全自動細菌鑒定設(shè)備對培養(yǎng)板的細菌進行鑒定。

1.3 基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間譜檢測：取真菌菌液轉(zhuǎn)移種植到沙堡弱培養(yǎng)基，將做好標(biāo)記，置于37 ℃的培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)2 d后取出，將真菌于試管中調(diào)節(jié)濁度至2，后將菌液涂抹靶點中心，加入VITEK MS-FA和VITEK MS-CHCA 基質(zhì)液待試劑干燥后應(yīng)用VITEKMS 儀器進行鑒定。當(dāng)試驗組和對照對真菌檢驗結(jié)果不一致時，將對真菌菌落應(yīng)用DNA序列分析：應(yīng)用真菌ITS2序列擴增和PCR產(chǎn)物測序的方法進一步分析真菌的種類[3]。

1.4 觀察指標(biāo)：觀察試驗組的真菌鑒定結(jié)果、對照組的真菌鑒定結(jié)果，計算兩種鑒定方法的準(zhǔn)確性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析：采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS19.0進行分析，計數(shù)資料采用（±s）表示，兩組間比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

試驗組（VTITEK MS檢測）發(fā)生鑒別錯誤的例數(shù)為4例，準(zhǔn)確率為92%，對照組（VITEK- 2機器檢測）發(fā)生鑒別錯誤的例數(shù)為5例，準(zhǔn)確率為90%，試驗組和實驗室的真菌檢測準(zhǔn)確率比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），說明兩組的真菌檢測準(zhǔn)確率相當(dāng)，見表1。

表1 兩組實驗結(jié)果

3 討 論

基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間譜檢測（matrix assisted laser desorption ionization time of flight spectrum，MALDI-TOF）可以對真菌做出迅速的檢測，具有操作容易、價格低廉、準(zhǔn)確率高、檢測快速等優(yōu)點。一般的真菌培養(yǎng)需要多種培養(yǎng)基和要求鑒定人員具有一定的工作經(jīng)驗才能做出準(zhǔn)確的判斷，并且一般培養(yǎng)干預(yù)鑒定結(jié)果的因素較多，并且耗時較長，對于少見的真菌檢定率極低[4]。近年來基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間譜檢測迅速發(fā)展，給臨床和疾病防控工作帶來了許多便捷。本文觀察了基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間譜檢測和VITEK 2機器檢測在真菌鑒定中的準(zhǔn)確性，結(jié)果表明試驗組（VTITEK MS檢測）發(fā)生鑒別錯誤的例數(shù)為4例，準(zhǔn)確率為92%，對照組（VITEK 2機器檢測）發(fā)生鑒別錯誤的例數(shù)為5例，準(zhǔn)確率為90%，兩組真菌檢測準(zhǔn)確率比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），說明兩組的真菌檢測真確率相當(dāng)。

[1] 張超,廖萬清.基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)在病原真菌檢驗中的應(yīng)用進展[J].中國真菌學(xué)雜志,2012 ,7(5):312-313.

[2] 何英,陸學(xué)東.基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)及其在臨床微生物鑒定中的應(yīng)用[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2011,34(10):881-888.

[3] 張明新,朱敏,王玫,等.應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒定常見細菌和酵母菌[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2011,34(11):988- 992.

[4] 姜長宏,龍軍,華夏.基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜儀在侵襲性真菌感染病原真菌鑒定中的應(yīng)用[J].實用醫(yī)學(xué)雜志,2015,31(17):2902.