吳文安，趙 金，廖 娟，楊怡萍，李 勤，梁 晶

陜西省腫瘤醫(yī)院 (西安 710061)

PROX1在原發(fā)胃癌中的表達(dá)及其意義

吳文安，趙 金，廖 娟，楊怡萍，李 勤，梁 晶△

陜西省腫瘤醫(yī)院 (西安 710061)

△通訊作者

目的: 檢測PROX1在原發(fā)性胃癌中的表達(dá)，探討其與病理分級與臨床分期的關(guān)系。方法：采用免疫組化SABC法檢測70例胃癌組織中PROX1表達(dá)水平，分析其與病理分級及臨床分期之間的關(guān)系。結(jié)果：胃癌及正常組織中均有PROX1表達(dá)，但胃癌組織中的表達(dá)含量明顯高于正常組織的表達(dá)含量，且與病理分級及臨床分期有關(guān)。依據(jù)病理分級，PROX1表達(dá)水平由高到低分別為Ⅲ級>Ⅱ級>Ⅰ級,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；依據(jù)臨床分期，PROX1表達(dá)水平由高到低分別為Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅱ期 >Ⅰ期,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，不同性別患者PROX1表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.40)。結(jié)論：PROX1在胃癌組織存在高表達(dá)，且與其病理分級及臨床分期有關(guān)。

同源異型蛋白PROX1(Prospero-related homeobox)是果蠅蛋白在脊椎動物中的同源物，人類沿基因在1996年被首次分離，位于人類染色體1q32.2-q32.3[1-2]，近年來研究證實(shí)，PROX1蛋白可調(diào)控細(xì)胞分化，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、晶狀體、視網(wǎng)膜、肝臟、胰腺及淋巴管等多種組織器官胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用[3-4]。一方面，在神經(jīng)膠質(zhì)瘤、結(jié)直腸癌、肝癌中PROX1呈高水平表達(dá)，且PROX1可增強(qiáng)細(xì)胞遷移能力而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移；另一方面，在胰腺癌、乳腺癌、白血病等腫瘤中由于DNA甲基化作用引起、PROX1表達(dá)下調(diào)，且PROX1表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞的分化程度呈正相關(guān)，PROX1表達(dá)水平高的患者預(yù)后良好[5-6]。正如在胚胎發(fā)育過程中PROX1作用的發(fā)揮具有組織特異性一樣，在不同類型的腫瘤中，PROX1即可表現(xiàn)出促進(jìn)腫瘤侵襲的作用亦可扮演抑制腫瘤進(jìn)展的角色。目前國內(nèi)外有關(guān)胃癌PROX1表達(dá)含量與病理分級及臨床分期的關(guān)系的研究尚未見報(bào)道。本研究通過免疫組織化學(xué)檢測PROX1在胃癌中的表達(dá)情況，探討PROX1表達(dá)含量與病理分級及臨床分期

材料和方法

1 材 料 收集我院2010-2015年手術(shù)切除的胃癌標(biāo)本70例，男45例，女25例，年齡36～83歲，中位年齡62歲；所有病例經(jīng)HE染色均證實(shí)為原發(fā)胃癌，且病理類型均為腺癌；病理分級：I級20例，II級28例，III級22例。臨床分期：Ⅰ期5例,Ⅱ例13例,Ⅲ35例,Ⅳ期17例。

2 研究方法

2.1 PROX1免疫組化染色：PROX1單克隆抗體為上海博研生物科技有限公司產(chǎn)品，按1∶100稀釋后作為I抗，相應(yīng)II抗及SABC染色試劑盒購自武漢博士德生物公司。采用免疫組化SABC法，染色步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。以已知陽性反應(yīng)片作為陽性對照，以PBS代替I抗作為陰性對照。

2.2 結(jié)果判定：PROX1主要定位于細(xì)胞核，呈散在分布的淡黃色或棕褐色顆粒。鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，觀察并計(jì)算視野中的陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算總細(xì)胞數(shù)不少于1000個(gè)，以陽性細(xì)胞數(shù)>25%為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)。每例標(biāo)本在光鏡下隨機(jī)選擇3個(gè)高倍視野，采用北航多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)，對每個(gè)視野進(jìn)行灰度測量，計(jì)算平均灰度值。

結(jié) 果

1 免疫組化檢測結(jié)果 PROX1主要定位于細(xì)胞核，偶見細(xì)胞膜染色，陽性細(xì)胞呈散在或片狀分布的棕褐色顆粒(圖1)，陰性對照片未見棕黃色顆粒(圖2)。不同年齡、性別、病理分型、分級的胃癌患者的表達(dá)情況,見表1。

圖1 PROX1在胃癌組織中的陽性表達(dá) (SABC×400) 圖2 PROX1癌旁正常組織中的陰性表達(dá)(SABC×400)

臨床特征 nPROX1+-陽性率(%)年齡(歲)≤603930976.9 >603125680.6性 別 男45341175.6 女2521484病理分級Ⅰ20101050 Ⅱ2824485.7 Ⅲ2221195.5臨床分期Ⅰ51420 Ⅱ139469.2 Ⅲ3529682.9 Ⅳ1716194.1合 計(jì) 70551578.6

表2 胃癌組織PROX1表達(dá)的半定量分析

2 病理圖像分析結(jié)果 利用圖像分析法半定量檢測胃癌組織中PROX1表達(dá)水平，通過方差分析和q檢驗(yàn)比較對不同病理分級，不同臨床分期的胃癌組織PROX1表達(dá)的差異，結(jié)果顯示：PROX1的表達(dá)水平與胃癌的病理分級及臨床分期有關(guān)且有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P值均小于0.05；此外，依據(jù)性別分組，男、女胃癌患者PROX1表達(dá)水平無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見表2。

討 論

我國是胃癌的高發(fā)區(qū)，胃癌年患病率和病死率均是世界平均水平的2倍多，特別是西北地區(qū)。胃癌的發(fā)生是一個(gè)多階段、多因素作用的結(jié)果，與基因的表達(dá)和改變密不可分[7-10]。同源異型蛋白PROX1(Prospero-related homeobox)是果蠅蛋白在脊椎動物中的同源物，人類沿基因在1996年被首次分離，位于人類染色體1q32.2-q32.3，在許多腫瘤組織中表達(dá)異常。有研究證實(shí)[11]，在不同類型的腫瘤中，PROX1即可表現(xiàn)出促進(jìn)腫瘤侵襲的作用亦可扮演抑制腫瘤進(jìn)展的角色。在肝細(xì)胞癌中的研究顯示在肝癌細(xì)胞上過表達(dá)PROX1則促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲，并研究發(fā)現(xiàn)，PROX1主要通過上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1α的轉(zhuǎn)錄水平和招募組蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)阻止HIF-1α的乙?；瘉肀Ｗo(hù)HIF-1α蛋白的穩(wěn)定性來實(shí)現(xiàn)其促轉(zhuǎn)移活性，它最終導(dǎo)致肝癌細(xì)胞發(fā)-生上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)[12]。

本研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)胃癌組織中PROX1表達(dá)明顯高于正常組織，隨著病理分級及臨床分期的增加，PROX1陽性表達(dá)率顯著增高，此結(jié)果提示，胃癌組織的病理分級及臨床分期與PROX1的表達(dá)水平呈正相關(guān)， PROX1的表達(dá)可能與胃癌的預(yù)后相關(guān)，臨床可以應(yīng)用于判斷患者的預(yù)后。流行病學(xué)調(diào)查及臨床資料顯示，胃癌的發(fā)病率在兩性之間存在著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，女性明顯少于男性，且隨著年齡的增長,胃癌癌發(fā)病率增加。本研究發(fā)現(xiàn)PROX1的表達(dá)與性別沒有相關(guān)性。

綜上所述，PROX1與胃癌的病理分級及臨床分期有想關(guān)系，其高表達(dá)可能預(yù)示患者預(yù)后差，生存期短，將有望成為臨床判斷患者預(yù)后的重要指標(biāo)。

[1] Elsir T,Eriksson A,Orrego A.Expression of PROX1 Is a common feature of high-grade malignant astrocytic gliomas[J].Journal of Neuropathology and Experimental Neurology,2010,69(2):129-138.

[2] Liu Y,Ye X,Zhang JB,etal.PROX1 promotes hepatocellular carcinoma proliferation and sorafenib resistance by enhancing β-catenin expression and nuclear translocation[J].Oncogene,2015,34(44):5524-5535.

[3] Elsir T,Aorrego E.Expression of PROX1 Is a common feature of high-grade malignant astrocytic gliomas[J].Journal of Neuropathology and Experimental Neurology,2010,69(2):129-138.

[4] Maria FSD, Rodrigues C, de Oliveira R,etal. PROX1 gene is differentially expressed in oral cancer and reduces cellular proliferation[J].Medicine,2014,93(28):e192.

[5] Le Huu AR,Jokinen CH,Ruben BP,etal.Expression of prox1, lymphatic endothelial nuclear transcription factor, in Kaposiform hemangioendothelioma and tufted angioma[J].American Journal of Surgical Pathology,2010,34(11):1563-1573.

[6] Ragusa S,Cheng J,Ivanov KI,etal.PROX1 promotes metabolic adaptation and fuels outgrowth of Wnt(high) metastatic colon cancer cells[J].Cell Reports,2014,8(6):1957-1973.

[7] Wiener Z, Band A,Kallio P,etal.Prox1 promotes expansion of the colorectal cancer stem cell population to fuel tumor growth and ischemia resistance[J].Cell Reports,2014,8(6):1943-1956.

[8] Shi XL,Guo ZJ,Wang XL,etal.SET8 expression is associated with overall survival in gastric cancer[J].Genetics and Molecular Research : GMR,2015,14(4):15609-156015.

[9] Yoshiyuki B, Fujiwara C,Takeshi D,etal.A Multidisciplinary approach for advanced gastric cancer with paraaortic lymph Node metastasis[J].Anticancer Research,2015,35(12):6739-6745.

[10] 田 明，張?jiān)其h，杜 寧，等.PTEN和bcl-2在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志, 2011, 40(2):148-151.

[11] Takuya C, Matsumoto D,Daisuke MK,etal. One-stage procedure for concomitant abdominal aortic aneurysm and gastric cancer[J].Anticancer Research,2015,35(12):6909-1692.

[12] Chang TM, Hung WC. The homeobox transcription factor Prox1 inhibits proliferation of hepatocellular carcinoma cells by inducing p53-dependent senescence-like phenotype[J]. Cancer Biology & Therapy,2013,14(3):222-229.

(收稿：2017-02-04)

ExpressionandsignificanceofPROX1ingastriccancer

Wu Wen’an,Zao Jin , Liao Juan,et al.

The Tumor Hospital of Shaanxi Province ( Xi’an 710061)

Objective: To detect expression of PROX1, and investigate its significance in Gastric cancer.Methods: 70 patients with gastric cancer entered this study. Immunohistochemistry(SABC assay) and image analysis was used to semiquantitatively detect the expression of PROX1 protein. Results: Positive expression rate of PROX1 was higher in gastric cancer than in normal .As cancer pathologic and clinical grading advanced, expression of PROX1 increased with statistical deviation(P<0.05). PROX1 expression level showed no statistical deviation between male and female(P=0.40). Conclusion: PROX1 is overexpressed in gastric cancer and is relation with cancer pathologic and clinical grading advanced.

Stomach neoplasms/pathology @PROX1 proteins Immunohistochemistry

胃腫瘤/病理學(xué) @PROX1蛋白 免疫組織化學(xué)

R392.3

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2018.03.002