張東偉，藍(lán)冰

(柳州市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣西 柳州 545000)

支氣管哮喘是在遺傳易感性和環(huán)境因素共同作用下，由多種細(xì)胞(如嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞等)和細(xì)胞組分參與的，以氣道高反應(yīng)性為主要特征的，氣道慢性炎癥性疾病[1]。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚未完全清楚。已知多種細(xì)胞因子參與其發(fā)生發(fā)展過程。白細(xì)胞介素-32(IL-32)是新近發(fā)現(xiàn)的炎性細(xì)胞因子，可以誘導(dǎo)IL-8、腫瘤壞死因子α、IL-6等多種細(xì)胞因子的表達(dá)[2-3]，亦可誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，與胰腺炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等多種炎癥性疾病和自身免疫性疾病的發(fā)病密切相關(guān)[3-4]。IL-32也參與濕疹患者由Th1所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程[5]，同時(shí)與哮喘也有一定關(guān)系。目前，關(guān)于IL-32與哮喘關(guān)系的研究多以小鼠為哮喘模型，少見有關(guān)以哮喘患者為對象的報(bào)道。本研究通過檢測血清中IL32的水平，探討其在正常人群與不同分期哮喘患者血清中表達(dá)量的差異及其與患者肺功能指標(biāo)、哮喘癥狀控制評分的關(guān)系，以期為IL32與哮喘患者癥狀控制情況的關(guān)系提供直接的臨床證據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

哮喘組：參照中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組支氣管哮喘防治指南[6]的標(biāo)準(zhǔn)，選取2013年5月至2015年6月就診于柳州市人民醫(yī)院呼吸科的165例哮喘患者進(jìn)行研究。入選患者無其他嚴(yán)重疾病。其中急性發(fā)作期組65例，慢性持續(xù)期組42例，穩(wěn)定期組58例。其中男性83例，女性82例，平均年齡(30.06±7.83)歲。

對照組：選取50例柳州市人民醫(yī)院門診健康體檢者作為對照組，男性27例，女性23例，平均年齡(30.28±7.07)歲。兩組及各分期哮喘患者之間比較性別、年齡差異無有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1，2。此外，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有研究對象均簽署知情同意書。

表1 對照組與哮喘組一般資料比較

表2 不同分期哮喘患者一般資料比較

1.2 研究方法

1.2.1血清IL-32含量測定 清晨空腹抽取靜脈血5 mL，3 500 r·min-1，離心20 min收集上清液，標(biāo)記日期及編號，放入-80 ℃冰箱保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測血清中IL-32水平。試劑盒購于成都西歐思生物科技有限公司。

1.2.2肺功能測定 采用肺功能儀，受試者取坐位，由專業(yè)人員進(jìn)行測定。測定內(nèi)容包括第一秒用力呼氣量(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC及最大呼氣峰流速指數(shù)(PEF)。其數(shù)值越高表示肺部功能越好。

1.2.3外周血嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)計(jì)數(shù)和血清嗜酸性細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)水平的測定[7]使用全自動血細(xì)胞分析儀(Sysmex XE-2100)測定患者治療前后EOS數(shù)；使用熒光酶免分析儀(Pharmacia UniCAP1000)和ECP檢測試劑盒(Pharmacia)通過熒光酶聯(lián)免疫法測定ECP含量，其數(shù)值降低提示引發(fā)哮喘的炎性癥狀得到緩解。

1.2.4哮喘控制測試(ACT)評分[8]主要包括哮喘對日常生活、睡眠的影響，呼吸困難出現(xiàn)的情況，使用急救藥物的情況和哮喘控制情況。每個(gè)問題1～5分，滿分25分；25分為完全控制，20～24分為較好控制，<20分為未控制。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 血清中IL-32的含量比較

哮喘組患者血清中IL32高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。隨著病情從急漸緩，IL-32水平也逐漸下降，不同分期組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3，4。

表3 對照組與哮喘組患者血清中IL-32含量的表達(dá)

表4 IL-32在不同分期哮喘患者血清中的表達(dá)

2.2 肺功能比較

哮喘組患者與對照組肺功能各指標(biāo)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，不同分期組肺功能各指標(biāo)組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，F(xiàn)EV1、FEV1/FVC和PEF均隨病情的緩解而升高。見表5，6。

表5 對照組與哮喘組患者肺功能比較

表6 不同分期哮喘患者肺功能比較

2.3 EOS、ECP及ACT評分比較

哮喘組患者與對照組EOS及ECP比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，不同分期組EOS、ECP及ACT評分組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。隨著病情的穩(wěn)定、緩解，EOS和ECP均呈下降趨勢，ACT評分越來越高。見表7，8。

表7 對照組與哮喘組患者EOS和ECP比較

表8 不同分期哮喘患者EOS和ECP及ACT評分比較

2.4 IL-32與肺功能、EOS和ECP、ACT評分間的關(guān)系

Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清中IL-32的含量與FEV1不存在相關(guān)性(P>0.05)；IL-32與FEV1/FVC、PEF、EOS、ECP和ACT存在相關(guān)性(P<0.05)，其中與EOS和ECP相關(guān)性最強(qiáng)。見表9。

表9 IL-32與臨床指標(biāo)相關(guān)性分析

3 討論

哮喘發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜，目前仍未完全闡明。炎性反應(yīng)是支氣管哮喘患者氣道損傷的病理生理基礎(chǔ)，主要以嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和T細(xì)胞浸潤為主以及細(xì)胞因子的作用[9-10]。IL-32是由Dahl等[11]在1992年從自然殺傷(NK)細(xì)胞中經(jīng)IL-18誘導(dǎo)克隆出的，當(dāng)時(shí)命名為NK4，但對其功能未知。Kim等[12]發(fā)現(xiàn)其有細(xì)胞因子樣特征并在炎癥中發(fā)揮關(guān)鍵作用，將其改名為IL-32。研究發(fā)現(xiàn)，無論在抗病原微生物還是在自身免疫性疾病的炎性反應(yīng)中，IL-32作為一種促炎因子，都發(fā)揮著重要作用。它能夠通過激活核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)和p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)途徑誘導(dǎo)其他促炎因子的表達(dá)[13]，如腫瘤壞死因子-α、IL-1β、IL-6、IL-8。還能夠使血管的滲透性增加，從而增強(qiáng)和擴(kuò)散血管炎癥。

本研究發(fā)現(xiàn)哮喘患者血清中IL-32水平顯著高于健康者，且隨著病情從急漸緩，IL-32水平也逐漸下降。說明哮喘患者血清IL-32水平和哮喘控制水平相關(guān)，IL-32在血清中的高表達(dá)提示患者處于急性發(fā)作期。Meyer等[14]在研究中發(fā)現(xiàn)哮喘患者IL-32水平高于健康人，這與本文研究結(jié)果一致。高偉霞等[15]的研究顯示經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)治療后哮喘患者IL-32含量降低，說明IL-32在血清中的含量可以反映患者的治療效果，猜測IL-32通過參與哮喘氣道重塑的過程發(fā)揮作用。

處于急性發(fā)作期患者FEV1、FEV1/FVC和PEF均較低，EOS及ECP較高，ACT評分較低。隨著病情的緩解FEV1、FEV1/FVC和PEF升高、EOS和ECP逐漸下降，患者ACT評分越來越高。通過相關(guān)系分析發(fā)現(xiàn)，血清中IL-32表達(dá)量與FEV1/FVC、PEF、EOS、ECP和ACT存在相關(guān)性，其中與EOS和ECP相關(guān)性最強(qiáng)。肺功能指標(biāo)、EOS和ECP以及ACT評分被廣泛用于哮喘評估，IL-32與上述指標(biāo)相關(guān)性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明IL-32可用于評估哮喘患者病情及癥狀控制情況。郭元等[16]的研究顯示IL32表達(dá)量與EOS呈正相關(guān)，認(rèn)為IL-32與哮喘的發(fā)生密切相關(guān)，與本文結(jié)果一致。IL-32可以通過活化NF-κβ、p38MAPK等信號通路誘導(dǎo)TNF-α、IL-6、IL-8等多種細(xì)胞因子[17]，而TNF-α、IL-6與哮喘發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[18]，因此IL-32與哮喘發(fā)生發(fā)展高度相關(guān)。血清中IL-32的含量與PEF存在相關(guān)性。PEF是氣道阻塞的評價(jià)指標(biāo)，是不同程度急性哮喘的判定依據(jù)，對急性發(fā)作期哮喘具有指導(dǎo)作用。

綜上所述，哮喘是一個(gè)復(fù)雜的免疫性疾病，眾多的細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)參與發(fā)病過程。本研究證實(shí)IL-32與哮喘的發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān)，但其對疾病的直接或間接作用機(jī)制尚不完全清楚。動態(tài)監(jiān)測患者血清中IL-32的含量可為患者的診斷、病情評估及治療提供幫助，我們將繼續(xù)研究IL-32在不同亞型支氣管哮喘患者血清中的含量，以期進(jìn)一步了解其在哮喘起病及進(jìn)展過程中的作用。

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