郭咚 張鋼 蔣義 陳靜 彭文雯

[摘要] 目的 通過(guò)對(duì)測(cè)量不確定度分析，更好地保證速率法測(cè)定無(wú)償獻(xiàn)血者血清中ALT的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。方法? 利用實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展的室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，以及2016年能力驗(yàn)證檢測(cè)的室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)，來(lái)計(jì)算評(píng)估實(shí)驗(yàn)室無(wú)償獻(xiàn)血標(biāo)本ALT項(xiàng)目的測(cè)量合成不確定度及擴(kuò)展不確定。結(jié)果 包含因子k=2時(shí)，包含概率P=95.45%，ALT=36 U/L時(shí)，擴(kuò)展不確定度為16.38%，ALT=123 U/L時(shí)，擴(kuò)展不確定度為13.46%。結(jié)論 該實(shí)驗(yàn)室利用ALT室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)得出的擴(kuò)展不確定度在可控范圍內(nèi)。ALT室間質(zhì)評(píng)回報(bào)數(shù)據(jù)結(jié)果，適用于血站實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)ALT檢測(cè)測(cè)量不確定度分析。

[關(guān)鍵詞] ALT檢測(cè);血站;室間質(zhì)評(píng);測(cè)量不確定度

[中圖分類號(hào)] R446.11 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1672-5654（2018）08（b）-0003-03

測(cè)量不確定度是表征合理地賦予被測(cè)量之值的分散性與測(cè)量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)， 可用來(lái)表示檢測(cè)結(jié)果是否可靠[1]。血站實(shí)驗(yàn)室ALT檢測(cè)的主要任務(wù)就是對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血標(biāo)本的特性進(jìn)行賦值。所賦的值，其準(zhǔn)確性、可靠性以及其分散性都會(huì)直接影響到對(duì)獻(xiàn)血者的篩查[2]。ISO15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量與能力的專用要求》指出“與實(shí)際測(cè)量過(guò)程相關(guān)聯(lián)的不確定度分量從接收樣本品啟動(dòng)測(cè)量程序開(kāi)始，至輸出測(cè)量結(jié)果終止”[3]。而室間質(zhì)評(píng)回報(bào)結(jié)果綜合了檢測(cè)方法和程序、設(shè)備因素等，對(duì)測(cè)量不確定度的影響。因此，可以利用室間質(zhì)評(píng)的回報(bào)數(shù)據(jù)，評(píng)估血站實(shí)驗(yàn)室ALT檢測(cè)項(xiàng)目的測(cè)量不確定度。

1? 材料與方法

1.1? 儀器

OLYMPUS? AU640全自動(dòng)生化分析儀。

1.2? 試劑

深圳邁瑞生物醫(yī)療丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）檢測(cè)試劑、校準(zhǔn)品，英國(guó)朗道實(shí)驗(yàn)診斷有限公司常規(guī)生化質(zhì)控血清。

1.3? 樣本

湖南省血液中心無(wú)償獻(xiàn)血血篩標(biāo)本。

1.4? 方法

采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法檢測(cè)ALT。

1.5? 測(cè)量不確定度的引入

該中心實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)構(gòu)成測(cè)量不確定度的主要分量為：與偏倚相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)復(fù)現(xiàn)條件下引入的不確定度分量。

①通過(guò)室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)評(píng)定由偏移引入的測(cè)量不確定度ucrel（bias）偏移引入的測(cè)量不確定度包括方法和實(shí)驗(yàn)室相對(duì)偏移RMSrel（bias），及多次測(cè)量復(fù)現(xiàn)性引入的相對(duì)測(cè)量不確定度urel（Cref）。根據(jù)2016年衛(wèi)生部臨檢中心實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)ALT回報(bào)數(shù)據(jù)，計(jì)算方法和實(shí)驗(yàn)室相對(duì)偏移。公式：

式中birel為該實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)ALT樣本檢測(cè)結(jié)果與靶值的相對(duì)偏移，n為室間質(zhì)評(píng)次數(shù)。而多次測(cè)量復(fù)現(xiàn)性引入的相對(duì)測(cè)量不確定度，可將此值看成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（CRM）方法評(píng)定偏移引入的測(cè)量不確定中的重復(fù)測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測(cè)量不確定度[4]。該次將室間質(zhì)評(píng)每個(gè)樣本檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分組，±3SD剔除以外的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)，計(jì)算每個(gè)室間質(zhì)評(píng)樣本的測(cè)量復(fù)現(xiàn)性引入的相對(duì)測(cè)量不確定度urel（cons，i）。依據(jù)公式：

得出所有組相對(duì)測(cè)量不確定度，其中m為參加測(cè)量的實(shí)驗(yàn)室數(shù)。此時(shí)，可以計(jì)算多次測(cè)量復(fù)現(xiàn)性引入的相對(duì)測(cè)量不確定度urel（Cref）。公式：

式中，n為室間質(zhì)評(píng)樣本的個(gè)數(shù)。合成計(jì)算由偏移引入的測(cè)量不確定度

②通過(guò)室內(nèi)質(zhì)控引入的不確定度分量uprec 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)復(fù)現(xiàn)性不確定度主要是由精密度引入的。本實(shí)驗(yàn)室用高、低濃度2種質(zhì)控品（批號(hào)為944 UE，濃度為123 U/L、697 UE，濃度為36 U/L），每天隨獻(xiàn)血者標(biāo)本一同檢測(cè)，其檢測(cè)的結(jié)果作為當(dāng)天室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果。該實(shí)驗(yàn)室采取對(duì)2016年4—12月共計(jì)10個(gè)月的室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，分別計(jì)算兩個(gè)濃度質(zhì)控品的變異系數(shù)CV。由于質(zhì)控品隨獻(xiàn)血者標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)，并有著完整的檢測(cè)過(guò)程，故從室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)計(jì)算出來(lái)的變異系數(shù)就是實(shí)驗(yàn)室復(fù)現(xiàn)性不確定度分量uprec。

③計(jì)算合成不確定度（uc）的計(jì)算公式：

④加上擴(kuò)展不確定度（U）的計(jì)算公式：取95%的置信區(qū)間k=2，U=kuc。

2? 結(jié)果

2.1? 計(jì)算RMSrel（bias）

2016年該實(shí)驗(yàn)室參加衛(wèi)生部臨檢中心ALT室間質(zhì)評(píng)3次，每次檢測(cè)樣本5個(gè)，共計(jì)檢測(cè)樣本15個(gè)。取相對(duì)偏移絕對(duì)值的平方代入公式計(jì)算，

2.2? 計(jì)算urel（Cref）

查詢2016年國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委室間質(zhì)評(píng)原始數(shù)據(jù)，剔除離群值，計(jì)算每個(gè)樣本的所屬組變異系數(shù)的平方根代入公式計(jì)算，urel（Cref）=46.25/15=3.08%，見(jiàn)表2。

2.3? 計(jì)算擴(kuò)展不確定度

通過(guò)室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)、室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)計(jì)算出RMSrel（bias）、urel（Cref）各值（表3），最終合成相對(duì)測(cè)量不確定度、合成不確定度和擴(kuò)展不確定度（表4）。

3? 討論

測(cè)量不確定度可以使用自上而下的Nordtest準(zhǔn)則和自下而上的GUM模型兩種方法評(píng)定檢測(cè)結(jié)果的測(cè)量不確定度[5]。GUM模型是基于在全面而系統(tǒng)的測(cè)量分析之后，去識(shí)別并估計(jì)每種可能來(lái)源的不確定度。Nordtest準(zhǔn)則是基于不確定度來(lái)源的控制程序下，對(duì)測(cè)量不確定度的評(píng)價(jià)，并直接利用統(tǒng)計(jì)原理評(píng)估一個(gè)特定的測(cè)量系統(tǒng)受控結(jié)果的測(cè)量不確定度[5-6]。依據(jù)特定的正確度評(píng)估的試驗(yàn)數(shù)據(jù)、實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)定，正確度和精密度是兩個(gè)主要的分量。醫(yī)學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常將這兩者與誤差相聯(lián)系。

血站ALT檢測(cè)針對(duì)的是無(wú)償獻(xiàn)血者的血液樣本，影響其測(cè)量不確定度的因素包括獻(xiàn)血者樣本的采集與運(yùn)輸、處理與保存，檢測(cè)環(huán)境與人員，檢測(cè)方法與設(shè)備，檢測(cè)試劑與校準(zhǔn)品等。但是，在評(píng)估測(cè)量不確定度時(shí)考慮所有因素比較復(fù)雜且不切實(shí)際[7]。該文通過(guò)室間質(zhì)評(píng)結(jié)果數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，以Nordtest準(zhǔn)則計(jì)算測(cè)量不確定度。室間質(zhì)評(píng)結(jié)果數(shù)據(jù)反映了實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)系統(tǒng)的總體分析性能，而室內(nèi)質(zhì)控反映的是實(shí)驗(yàn)室日間檢測(cè)的變異情況，其包括了測(cè)量程序過(guò)程中盡可能多但又合理的常規(guī)變化，例如：儀器設(shè)備運(yùn)行狀況和定期維護(hù)、檢測(cè)環(huán)境條件、不同批次試劑、不同操作者等。

該次ALT測(cè)量不確定度評(píng)估結(jié)果顯示，濃度2（36 U/L）擴(kuò)展不確定U=16.38%，與《WS/T 403-2012臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量指標(biāo)》中ALT總誤差TE<16%相比，超出《指標(biāo)》要求，即測(cè)量結(jié)果=36 U/L，擴(kuò)增不確定度=16.38%×36=6 U/L，即測(cè)量結(jié)果=（36±6）U/L。通過(guò)對(duì)各測(cè)量不確定度分量的占比分析，其RMSrel（bias）占比最大。回顧該實(shí)驗(yàn)室2016年室間質(zhì)評(píng)檢測(cè)結(jié)果相對(duì)偏移，發(fā)現(xiàn)靶值在70 I/U以下的該實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果相對(duì)偏移較大，而靶值在70 I/U以上的檢測(cè)結(jié)果相對(duì)偏移較小。同時(shí)，通過(guò)對(duì)高、低兩種濃度ALT質(zhì)控品進(jìn)行擴(kuò)展不確定度（uprec：1.39%、4.87%，U：13.46%、16.38%）的評(píng)估。結(jié)果表明，高、低2種濃度下的樣品測(cè)量不確定度是有差異的，即測(cè)量的不確定度與質(zhì)控品濃度檢測(cè)值是有關(guān)聯(lián)的。值得注意的是，何成濤等[8]指出校準(zhǔn)品不確定度在ALT檢測(cè)合成不確定度中占的比重較大，在評(píng)估過(guò)程中應(yīng)充分考慮該因素的影響。而復(fù)溶校準(zhǔn)品所引入的不確定度很小，而實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)環(huán)境引入的不確定度和精密度較高移液槍引入的不確定度可忽略不計(jì)[9]。該實(shí)驗(yàn)室使用的校準(zhǔn)品靶值為98.9 U/L（邁瑞常規(guī)生化符合校驗(yàn)品，批號(hào)150115010），較2015版《血站技術(shù)操作規(guī)程》4.12.1血液檢測(cè)合格判定標(biāo)準(zhǔn)中ALT≤50 U/L的臨界值濃度高，也是導(dǎo)致低濃度擴(kuò)增不確定度不符合《標(biāo)準(zhǔn)》原因之一。因此，選擇校準(zhǔn)品同時(shí)應(yīng)考慮更接近臨界值的濃度。在血站實(shí)驗(yàn)室ALT結(jié)果判定過(guò)程中，應(yīng)充分考慮臨界值范圍的不確定度，可以保證血液ALT檢測(cè)的準(zhǔn)確性，避免造成檢測(cè)結(jié)果變化過(guò)大，避免血液的浪費(fèi)。

近幾年越來(lái)越多的血站檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)始開(kāi)展或準(zhǔn)備開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室15189能力認(rèn)可，ALT作為血站檢測(cè)項(xiàng)目中唯一的定量檢測(cè)項(xiàng)目，實(shí)驗(yàn)室對(duì)ALT檢測(cè)不確定度的評(píng)估是必不可少的，利用實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)和室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)對(duì)其進(jìn)行評(píng)估，既減輕實(shí)驗(yàn)室工作量，也節(jié)約了試驗(yàn)所需資源，而且可操作性強(qiáng)。

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（收稿日期：2018-05-12）