張桂春

[摘要] 目的 對MP1干式分析儀與日立7100全自動生化分析儀檢測同型半胱氨酸（HCY）結(jié)果進行比對分析及偏倚進行評估。方法 參考美國國家臨床實驗室標準委員會（CLSI）EP9-A2文件規(guī)定，以大型生化分析儀的檢測結(jié)果為比較方法（X），MP1干式分析儀及配套的試劑盤的檢測結(jié)果為實驗方法（Y），計算X和Y之間預期偏差的可信區(qū)間，以行業(yè)標準規(guī)定的15%的偏差要求為標準，并對其進行偏倚評估。結(jié)果 HCY在醫(yī)學決定水平處的預期偏倚低于行業(yè)標準的允許誤差范圍，線性回歸方程級相關(guān)性良好（r2>0.95）。結(jié)論 MP1干式分析儀檢測HCY臨床可接受，可以保證檢驗結(jié)果的可靠性。

[關(guān)鍵詞] MP1;比對研究;偏倚評估

[中圖分類號] R392 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-5654（2018）08（b）-0176-04

即時檢驗（point-of-care testing，POCT）是檢驗醫(yī)學發(fā)展的新領(lǐng)域，它具有操作簡便、高效快捷、試劑穩(wěn)定，容易使用和小型化，順應了現(xiàn)代臨床醫(yī)學快節(jié)奏的工作方式，使患者得到及時的診斷和治療。當診斷技術(shù)與其他技術(shù)全面發(fā)展之后，人們治療與認識疾病的水平也有序提升，POCT使用范圍不斷拓展，技術(shù)應用得到突飛猛進的發(fā)展，關(guān)注度不斷提升[1]。

微流控芯片技術(shù)是新世紀主要的現(xiàn)代化技術(shù)，其將化學與生物領(lǐng)域中涉及的細胞裂解、分選、培養(yǎng)，樣品檢測、分離、反應、制備等過程匯集到便捷化的小芯片中[2]。微流控檢測芯片一般具有樣品消耗少、檢測速度快、操作簡便、多功能集成、體小和便于攜帶等優(yōu)點，因此特別適合發(fā)展POCT診斷，具有簡化診斷流程、提高醫(yī)療結(jié)果的巨大潛力。寧波美康保生生物醫(yī)學工程有限公司研究發(fā)明的MP1干式分析儀屬于以微流控芯片技術(shù)為基礎(chǔ)的現(xiàn)代化POCT設(shè)備，其主要優(yōu)點是成本低、檢測不需要使用很多試劑、需血量少、精準度高，在我國這種使用試劑量大、醫(yī)療系統(tǒng)龐大的國家中適合廣泛應用。

該研究依據(jù)美國臨床和實驗室標準協(xié)會（CLSI）文件NCCLS EP9-A2提出的各項基本要求，針對MP1干式分析儀和相應試劑盤中HCY項目的分析結(jié)果，實施有效評價，明確其能夠在臨床中廣泛應用。

1? 材料與方法

1.1? 樣本

參照文件[3]，收集寧波美康盛德醫(yī)學檢驗所血清，選擇HCY項目中濃度不同的、沒有溶血血清的、新鮮的樣本，一共40例，在4℃的冰箱中保存，供之后使用。

1.2? 儀器與試劑

MP1干式分析儀和相應的試劑：寧波美康保生生物醫(yī)學工程有限公司研究并生產(chǎn)的MP1干式分析儀和相應的試劑盤片，其中，所以試劑盤片都只能單次、單人使用。

規(guī)模較大的生化分析儀和試劑：日立7100全自動生化分析儀，美康生物科技股份有限公司提供了相應的HCY檢測試劑盒（批號為：17031505）。

1.3? 方法

1.3.1 測定樣本? 結(jié)合EP9-A2文件的基本要求，每天將不同濃度的、滿足要求的血清樣本收集起來，數(shù)量為8份，連續(xù)收集5 d。用兩種方法每天測定8個樣本，每個樣本重復測定2次，共測定5 d。每個樣本重復測定2次，確定第1次測定順序，第2次反序測定。

1.3.2 檢驗離群值? 結(jié)合文件要求[3]，檢驗方法間與方法內(nèi)的離群值。雙份測定的相對差值比1/4大的平均值數(shù)據(jù)應該作為離群數(shù)據(jù)，將其刪除。

1.3.3 數(shù)據(jù)作圖? 圖1散點圖：實驗方法重復兩次測定所有樣本均值（Yi）對比較方法所有樣本2次重復測定均值（Xi），繪制散點圖;圖2散點圖：實驗方法重復兩次測定所有樣本的值（Yij）對比較方法所有樣本兩次重復測定均值（Xi），繪制散點圖;圖3偏倚圖：所有測定樣本的均值差（Yi-Xi）和（Yi+Xi）/2比較之后，繪制偏倚圖，其中心線水平是零;圖4偏倚圖：單次測定值和平均差值（Yij-Xi）和（Yi+Xi）/2比較之后，繪制偏倚圖，其中心線水平是零。

1.3.4 比較方法? （X）檢驗適合的范疇，分析回歸情況，計算各個系數(shù)，若結(jié)合數(shù)據(jù)資料，計算出r≥0.975（或r2≥0.95），則表示X的范圍比較合適，認為數(shù)據(jù)范疇能夠抵消X變量的存在的誤差，而且能夠通過回歸直線分析，來對截距與斜率進行預估。反之，需要增加樣本量再重新分析數(shù)據(jù)[4]。

1.3.5 線性回歸分析? 兩方法之間的線性回歸方程具體計算公式是：Y=a+bX。

1.3.6 可信區(qū)間與預期偏倚? 結(jié)合臨床研究的相關(guān)要求，明確醫(yī)學研究情況，通過回歸方程，得到95%可信區(qū)間與預期偏倚。因CLIA88未規(guī)定HCY的允許誤差范圍，故以行業(yè)標準（YY/T 1258-2015）要求的≤15%為偏差要求，比較預期偏差的可信區(qū)間，并進行判斷比較。

1.4? 統(tǒng)計方法

使用 Excel 軟件處理數(shù)據(jù)，并進行統(tǒng)計學研究。

2? 結(jié)果

2.1? 散點圖和偏倚圖分析

以MP1干式分析儀為實驗方法（X），日立7100全自動生化分析儀為比較方法（Y），經(jīng)組間與組內(nèi)檢驗離群值之后，繪制偏倚圖與散點圖。從散點圖中，能夠了解到，兩種儀器具有良好的線性關(guān)系，圖1、2為HCY在MP1干式分析儀和日立7100全自動生化分析儀研究結(jié)果的散點圖，能夠了解到，兩種儀器具有良好的關(guān)聯(lián)性，之間的關(guān)系是直線關(guān)系。圖3、4是檢查兩種儀器重復測定2次的均值間的差異和兩種儀器測定值間的差異，主要研究系統(tǒng)中是否會存在誤差，從圖片中表現(xiàn)的情況來分析，MP1干式分析儀和日立7100全自動生化分析儀測定的HCY的結(jié)果分布具有合理性，差值并不大。

2.2? 方法內(nèi)和方法間離群值檢驗

方法內(nèi)離群值檢驗，分別計算MP1干式分析儀和日立7100全自動生化分析儀重復測定的差值絕對值的均值，以4倍的平均絕對差值作為2種檢測系統(tǒng)重復測定絕對差值的可接受限。經(jīng)計算結(jié)果顯示：2種檢測系統(tǒng)均沒有超出控制限，故方法內(nèi)沒有離群值。見表1。

方法間離群值檢驗，計算MP1干式分析儀和日立7100全自動生化分析儀測定結(jié)果的絕對差值及平均值，相對差值及平均值，以4倍的差值作為可接受限。經(jīng)計算結(jié)果無雙份測定差值超過控制限的測定結(jié)果，故方法間沒有離群值。見表2。

2.3? X值合適范圍的檢驗及線性回歸分析

MP1干式分析儀測試到的各種數(shù)據(jù)，相對于日立7100全自動生化分析儀測試得到的各種數(shù)據(jù)，予以線性回歸方程分析，截距和斜率計算分別為b=1.006 7，a=0.187 9，結(jié)果見表3。兩臺儀器所測的HCY項目的相關(guān)系數(shù)r2為0.995 1。

2.4? 計算HCY在給定濃度處的偏差

HCY的醫(yī)學決定水平分別為25 μmol/L、100 μmol/L，行業(yè)標準中HCY的允許誤差是15%，依據(jù)兩種基本的檢測方法，臨床上能夠接受的誤差水平是相對偏倚比“1/2允許誤差”小。通過回歸方程計算的預期偏差可以參考表4，兩臺儀器檢測HCY這一項目偏倚時使用的方法都能夠接受，也就是說，兩臺儀器檢測的結(jié)果之間能夠進行比較。

注*允許誤差在預期偏差可信區(qū)的上下限之間，那么實驗方法與比對方法是相當?shù)?允許誤差比預期偏差可信區(qū)上限大，能夠接受;允許誤差比預期偏差可信區(qū)下限小，不能夠接受。

3? 討論

隨著現(xiàn)代醫(yī)學檢驗技術(shù)的不斷發(fā)展，POCT 技術(shù)的水平也全面提升，其在輔助診斷疾病的過程中，發(fā)揮著關(guān)鍵作用。與此同時，控制檢驗質(zhì)量也顯得尤為關(guān)鍵，臨床實驗室的質(zhì)量目標主要是保障檢驗結(jié)果的可靠性、精準性[5-7]，結(jié)合醫(yī)學實驗室CLSI文件中 POCT 09-A提出的各項基本要求[8]，必須全面評估寧波美康保生生物醫(yī)學有限公司研究生產(chǎn)的MP1干式分析儀應用在臨床過程中的可靠性與精準性。

HCY是蛋氨酸代謝重要中間產(chǎn)物，屬含硫氨基酸。在臨床上，高HCY常作為動脈粥樣硬化和心腦血管疾病獨立危險因子使用[9]。急性腦梗死患者HCY水平明顯高于健康體檢者，并且隨著神經(jīng)損傷程度的加重而升高，這表明HCY可能與急性腦梗死發(fā)病密切相關(guān)[10]。使用不同系統(tǒng)檢測同一個標本，結(jié)果必然是不同的，對檢測結(jié)果進行全面評估是實驗室研究中主要的問題。

該研究根據(jù)CLSI EP9-A2文件的要求，分析了MP1干式分析儀與日立7100全自動生化分析儀的研究結(jié)果，為實驗室研究提供了數(shù)據(jù)資料。研究表明，兩種方法具有很好的重復性，方法之間和方法內(nèi)部的差異都在能夠接受的范圍內(nèi)，所以，二者沒有離群值。對日立7100測定結(jié)果（X）和MP1分析儀測定結(jié)果（Y）進行線性回歸分析，兩者線性關(guān)系良好，r2=0.995 1，說明選擇的樣本濃度滿足要求，能夠?qū)煞N檢測方法存在的偏倚進行全面評估。進一步通過偏差估計發(fā)現(xiàn)，MP1干式分析儀的偏倚評估結(jié)果表明，在醫(yī)學決定水平處，HCY檢測項目的偏差比行業(yè)規(guī)定的偏差標準都小，說明兩種檢測系統(tǒng)的結(jié)果一致性較強，臨床能夠接受系統(tǒng)的誤差，結(jié)果能夠進行比較，保證了測定結(jié)果的準確可靠。

與傳統(tǒng)的全自動生化分析儀相比，POCT分析儀操作非常便利，檢測效率高，成本低，大概10 min就能夠得到很多檢測結(jié)果;而且因為測定使用的試劑盤片是利用微流控芯片技術(shù)與真空冷凍干燥技術(shù)研發(fā)的，檢測試劑以凍干小球的形式在盤片中存放，能夠便捷地攜帶;與此同時，這個儀器廣泛應用，在野戰(zhàn)外科、手術(shù)室、醫(yī)院各個科室、重癥監(jiān)護室、急診室以及家庭診療、小型診所等都能夠應用，測試結(jié)果的可靠性不會受到影響，檢測之后，不需要清洗，保養(yǎng)與維修儀器都很便利。

[參考文獻]

[1]? Peter BL， Carolin M， Alice S，Harald S.Point-of-care testing （POCT）：Current techniques and future perspectives[J].Trends in Analytical Chemistry，2011，30（6）：887-898.

[2]? 林炳承，秦建華.微流控芯片實驗室[M].北京：科學出版社， 2006：2-10.

[3]? EP9-A2.Method comparison and bias estimation using patient samples：approved guideline-2nd edition[S].CLSI，2002.

[4]? 葉應嫵，王毓三申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)范[M].3版.南京：東南大學出版社，2006：59.

[5]? 叢玉隆，馮仁豐，陳曉東.臨床實驗室管理學[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2004：111-114.

[6]? 魏吳，叢玉隆.醫(yī)學實驗室質(zhì)量管理與認可指南[M].北京：中國計量出版社，2004：72-75.

[7]? 焦連亭.我國生化分析儀臨床應用中應注意的若干問題[J].中華檢驗醫(yī)學雜志，2005，28（5）：472-474.

[8]? Document POCT 09-A.Selection Criteria for Point-of Care Testing Devices; Approved Guideline[S].CLSI，2010.

[9]? 張捷，蒙桂文，劉浩軍，等.HCY水平與糖尿病發(fā)展之間的關(guān)系[J].檢驗與診斷，2017，11（9）：57.

[10]? 鐘錦開，張七二，楊澤，等.HCY、hs-CRP、MPV聯(lián)合檢測對急性腦梗死患者的臨床意義[J].醫(yī)學檢驗與臨床，2017，28（1）：17-49.

（收稿日期：2018-05-16）