尹銳 孫鵬 于衛(wèi)松 孫惠青 魯世軍 王允白 曹建敏

摘 要：采用濾頭式固相萃取前處理方法，結(jié)合氣相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（GC-QTOF/MS）檢測技術(shù)，建立了煙草中184種農(nóng)藥殘留的快速篩查和定量測定方法。通過單因素結(jié)合Box-Behnken響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)考察了溶劑用量，加水量及凈化量對(duì)目標(biāo)農(nóng)藥回收率的影響。最終確定了煙草樣品最佳前處理方法為，15 mL乙腈提取，震蕩離心后移取1 mL上清液通過Cleanert NANO凈化柱凈化，平行濃縮近干后，以0.5 mL丙酮-正己烷（1/1，V/V）進(jìn)行溶劑置換，GC-QTOF/MS進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，184種農(nóng)藥在范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；在0.05、0.25、0.5 ?g/g添加水平下，除部分農(nóng)藥回收率較低外，平均回收率分別為62.05%～122.19%、65.18%～120.21%和68.55%～119.41%；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）范圍分別為0.16%～14.04%、0.15%～12.06%和0.03%～14.92%（n=3）；在0.05、0.1、0.5 ?g/g添加濃度下，定性篩查軟件檢出農(nóng)藥的比例分別為71.74%、92.39%和98.91%。該方法操作簡便，耗時(shí)短，準(zhǔn)確性好，能夠滿足煙草中多農(nóng)藥殘留定性和定量檢測的要求，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞：濾頭式固相萃??；氣相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜；響應(yīng)面法；煙草；農(nóng)藥殘留

中圖分類號(hào)：TS41+1 文章編號(hào)：1007-5119（2018）06-0079-12 DOI：10.13496/j.issn.1007-5119.2018.06.012

近年來，由于化學(xué)農(nóng)藥的濫用，農(nóng)藥殘留問題已經(jīng)成為影響農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的一個(gè)重要因素。煙絲中的農(nóng)藥殘留在卷煙抽吸過程中，會(huì)以一定的遷移率轉(zhuǎn)移到煙氣中或發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生新的有害物質(zhì)[1-2]，因此煙草農(nóng)藥殘留問題一直是煙草行業(yè)乃至社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn)。許多國家及國際組織均對(duì)煙草中農(nóng)藥殘留制定了最大殘留限量（MRL）法規(guī)，例如國際煙草科學(xué)研究合作中心（CORESTA）在2016版“煙用農(nóng)藥指導(dǎo)性殘留限量指南”中規(guī)定了106種農(nóng)藥及其代謝物的指導(dǎo)限量標(biāo)準(zhǔn)[3]，而中國煙草總公司也在2014年發(fā)布了我國“煙葉農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)”，規(guī)定了煙葉中123種農(nóng)藥的最大殘留限量[4]。

對(duì)于多殘留分析，檢測技術(shù)是影響其發(fā)展的主要制約因素，現(xiàn)有煙草農(nóng)藥多殘留檢測技術(shù)主要以氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[5-8]和液相色譜-質(zhì)譜法[9-11]為主，均以目標(biāo)化合物數(shù)據(jù)采集為基礎(chǔ)，在組分篩查鑒定前需要大量的方法設(shè)置和優(yōu)化，僅支持靶標(biāo)農(nóng)藥的檢測，此外受儀器掃描速度及分辨率的限制，高通量的檢測仍具有一定的局限性。而基于高分辨質(zhì)譜技術(shù)的飛行時(shí)間質(zhì)譜可采集更全面的化合物信息，能夠?qū)υO(shè)定掃描質(zhì)量范圍內(nèi)的所有物質(zhì)進(jìn)行測定，無需預(yù)先編輯質(zhì)譜采集方法，掃描效率高，理論上同時(shí)掃描的目標(biāo)物數(shù)量無上限，可在短時(shí)間內(nèi)對(duì)大量目標(biāo)化合物進(jìn)行分析，同時(shí)實(shí)現(xiàn)未知化合物的定性篩查。近年來，色譜與高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)已成為化合物定性篩查的有效手段，在水果、蔬菜多農(nóng)殘篩查工作中已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展[12-15]。

煙草樣品基質(zhì)復(fù)雜，含有較多的色素、萜類、生物堿、黃酮和香豆素等干擾物質(zhì)[16-17]，因此對(duì)前處理過程提出了更高的要求。現(xiàn)有多農(nóng)藥殘留的凈化方法主要基于QuEChERS[5，8，18]和固相萃取（SPE）技術(shù)[6，19-21]。SPE技術(shù)在處理基質(zhì)較為復(fù)雜的樣品方面表現(xiàn)出了明顯的優(yōu)勢，凈化效果較好，定量更為準(zhǔn)確，但步驟稍顯繁瑣費(fèi)時(shí)。而QuEChERS技術(shù)以其操作步驟簡便、耗時(shí)短，消耗化學(xué)試劑少等特點(diǎn)，在處理大批量樣品時(shí)具有明顯的優(yōu)勢，但去除基質(zhì)干擾的能力有限，對(duì)儀器造成了一定的污染。本文采用的濾頭式固相萃取凈化柱是一種新型的SPE柱，可以免去常規(guī)固相萃取凈化方法的活化和淋洗步驟，大大減少樣品前處理時(shí)間，主要填料Cleanert NANO是一種新型碳納米管材料，其表面鍵合的特殊官能團(tuán)增加了對(duì)脂肪酸和色素等干擾物的選擇性，同時(shí)由于層狀中空結(jié)構(gòu)的特征，材料的附載能力得以增加。2016年薛亞薇等[22]采用Cleanert NANO作為凈化劑，建立了無需標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照定性篩查茶葉中26種高毒劇毒農(nóng)藥的液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測方法。2017年李春苗等[23]采用Cleanert NANO與乙二胺基-N-丙基（PSA），C18作為分散固相萃取吸附劑，建立了一種對(duì)半夏中322種農(nóng)藥及化學(xué)污染物殘留的氣相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（GC-QTOF/MS）檢測方法。但以Cleanert NANO作為吸附劑的濾頭式SPE應(yīng)用于煙草中多種農(nóng)藥殘留量的檢測尚未見報(bào)道。

本文以濾頭式SPE前處理方法為基礎(chǔ)，184種農(nóng)藥作為目標(biāo)化合物，考察了提取溶劑用量、加水量及凈化量對(duì)目標(biāo)農(nóng)藥回收率的影響，結(jié)合氣相色譜-四級(jí)桿/飛行時(shí)間質(zhì)譜的高通量、高靈敏度、高定性能力，建立了煙草中184種農(nóng)藥的快速篩查和定量檢測方法。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

安捷倫7200 GC-QTOF/MS（安捷倫科技公司，美國）；真空離心濃縮儀（赫西儀器裝備有限公司，湖南）；渦旋振蕩器（Heidolph公司，德國）。

乙腈（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；丙酮、正己烷（色譜純，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；Cleanert NANO凈化柱（博納艾杰爾科技有限公司，天津）；50 mL塑料離心管；固體農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品購自德國Dr. Ehrenstorfer公司，純度大于95%；液體農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品及滅蟻靈標(biāo)準(zhǔn)品購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)所（天津）。各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品用丙酮-正己烷（1/1，V/V）配制成1000 mg/L 單標(biāo)溶液，根據(jù)每種農(nóng)藥的化學(xué)性質(zhì)和保留時(shí)間分為A、B、C三組，分別配制成5.0 mg/L 的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，以空白基質(zhì)溶液稀釋配制成0.01～0.8 mg/L的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。184種農(nóng)藥的名稱、保留時(shí)間見表1。

1.2 前處理方法

1.2.1 樣品前處理過程 稱取1.000 g已粉碎的煙葉樣品于50 mL具蓋離心管中，加入100 ?L內(nèi)標(biāo)（5.0 mg/L滅蟻靈）和15 mL乙腈，置于旋渦混合振蕩儀上以2000 r/min速率渦旋10 min，然后以4000 r/min離心10 min，待凈化。將NANO凈化管與2 mL注射器針管串聯(lián)，取一定體積上清液置于注射器針管內(nèi)，用推桿緩慢壓下，流出液收集于2 mL離心管中，于真空離心濃縮儀上45 ℃減壓濃縮，加入0.5 mL丙酮-正己烷（1/1，V/V）復(fù)溶，經(jīng)0.22 ?m有機(jī)系微孔濾膜過濾后，待GC-QTOF/MS測定。

1.2.2 單因素試驗(yàn) 分別考察前處理過程中加水量（0、2、4、6、8 mL）、溶劑用量（5、10、15、20、25 mL）和凈化量（0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL）對(duì)目標(biāo)農(nóng)藥回收率的影響。

1.2.3 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，針對(duì)3個(gè)影響目標(biāo)農(nóng)藥回收率的主要因素：加水量、溶劑用量和凈化量，采用Design-Expert 8.0.6軟件進(jìn)行Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表2。

1.3 實(shí)驗(yàn)條件

1.3.1 色譜條件 色譜柱：兩根HP-5MS超高惰性毛細(xì)管色譜柱（15 m×250 ?m×0.25 ?m）通過反吹系統(tǒng)串聯(lián)；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；程序升溫：初始溫度60 ℃，保持1 min后以40 ℃/min速率升溫至120 ℃，然后以5 ℃/min速率升溫至310 ℃，保持5 min；不分流進(jìn)樣；載氣：氦氣（純度為99.999%），恒流模式，滅蟻靈用于進(jìn)行保留時(shí)間鎖定，適時(shí)調(diào)節(jié)色譜柱1和柱2流速；反吹：開始時(shí)間40.5 min，壓力50 psi；自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣量為1 ?L。

1.3.2 質(zhì)譜條件 離子源：EI；電離能70 eV；離子源溫度：280 ℃；傳輸線溫度：280 ℃；溶劑延遲4 min；數(shù)據(jù)掃描方式：TOF-Scan全掃描，掃描范圍50～500 m/z，采集速率5 spectrum/s，模式4 Ghz；采集軟件：安捷倫MassHunter工作站。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溶劑選擇

本文考察的目標(biāo)農(nóng)藥包含有機(jī)氯類、有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類等多種類別，溶解性和極性差異較大的化合物，因此在保證提取效率的基礎(chǔ)上，要求提取溶劑與目標(biāo)農(nóng)藥間的溶解性好，滲透力強(qiáng)，提取雜質(zhì)少。目前農(nóng)藥多殘留分析方法中，以乙腈，丙酮，乙酸乙酯以及丙酮-正己烷混合溶劑最為常用。

以1.2.1方法對(duì)煙草樣品進(jìn)行前處理，目標(biāo)農(nóng)藥的加標(biāo)回收率為指標(biāo)，考察了乙腈，乙酸乙酯，以及丙酮-正己烷（1/1，V/V）作為提取溶劑的提取效果。不同溶劑得到的目標(biāo)農(nóng)藥回收率范圍見圖1。結(jié)果表明，3種溶劑都有較好的提取效果。但乙酸乙酯為提取溶劑時(shí)，部分極性較大的有機(jī)磷農(nóng)藥的提取不完全，提取液中共存較多的脂類、蛋白質(zhì)，不利于凈化；而采用丙酮-正己烷（1/1，V/V）為提取溶劑，由于其非極性較強(qiáng)，導(dǎo)致提取的色素物質(zhì)較多[24-25]，同時(shí)共存有脂類等物質(zhì)，影響定性和定量的穩(wěn)定性，儀器維護(hù)成本相應(yīng)提高。乙腈提取的雜質(zhì)較少，另外對(duì)一些擬除蟲菊酯類農(nóng)藥和部分極性較強(qiáng)農(nóng)藥的提取效率較高[26]，因此，最終選擇以乙腈為提取溶劑。

2.2 前處理方法優(yōu)化

2.2.1 單因素試驗(yàn) 在各農(nóng)藥添加濃度為0.5 ?g/g條件下，按1.2.2節(jié)設(shè)計(jì)各試驗(yàn)處理，并對(duì)各處理樣品按1.2.1節(jié)方法進(jìn)行前處理，計(jì)算各處理目標(biāo)農(nóng)藥加標(biāo)回收率在60%～120%范圍內(nèi)的比例，結(jié)果見圖2。從圖2中可以看出，在固定其余兩個(gè)因素的條件下，隨著加水量的增加，范圍內(nèi)的農(nóng)藥比例呈現(xiàn)下降趨勢；而溶劑用量與凈化量對(duì)農(nóng)藥比例的影響均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。當(dāng)加水量為2 mL、溶劑用量10 mL和凈化量0.8 mL時(shí)，接近各單因素的最大響應(yīng)值，以此為基礎(chǔ)，采用響應(yīng)面試驗(yàn)對(duì)各參數(shù)進(jìn)一步優(yōu)化。

2.2.2 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn) 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇加水量、溶劑用量和凈化量為因素，每個(gè)因素設(shè)置3個(gè)水平，回收率在60%～120%范圍內(nèi)的農(nóng)藥比例（Y）為響應(yīng)值，采用Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)建立數(shù)學(xué)模型，進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。

應(yīng)用Design-expert 8.0.6軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，得到農(nóng)藥比例（Y）對(duì)各因素的回歸方程Y=76.74-12.25A+17.43B+6.89C+4.20AB+4.14AC+2.80BC+1.44A2-7.71B2-9.78C2。結(jié)果表明，該模型影響極顯著（P<0.01），且失擬項(xiàng)不顯著（P=0.256 8>0.05），說明回歸方程與實(shí)際擬合中非正常誤差所占比例較小，決定系數(shù)R2為0.987 2，表明模型相關(guān)度好；變異系數(shù)為4.27%，說明實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性良好。

方差分析結(jié)果顯示，在所選各因素水平范圍內(nèi)，A、B、C、AB、AC、B2、C2的P值均小于0.05，說明以上因素對(duì)農(nóng)藥回收率有顯著影響，其余因素影響不顯著。本實(shí)驗(yàn)中各因素的主效應(yīng)關(guān)系為溶劑用量>加水量>凈化量。由回歸方程繪制的響應(yīng)面三維分析圖見圖3～5。

結(jié)合回歸模型的分析結(jié)果，煙草樣品最優(yōu)前處理過程參數(shù)為：加水量0 mL，溶劑用量14.53 mL，凈化量0.91 mL，在此條件下，60%～120%范圍內(nèi)農(nóng)藥比例為94.8%。結(jié)合實(shí)際情況，確定前處理過程參數(shù)為：加水量0 mL，溶劑用量15 mL，凈化量1 mL。在此條件下，農(nóng)藥比例為94.5%，說明該模型可靠，前處理過程參數(shù)可靠。

2.3 基質(zhì)效應(yīng)

使用色譜法進(jìn)行多種農(nóng)藥殘留檢測時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)是影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性和重復(fù)性的重要因素。氣相色譜系統(tǒng)中，大多數(shù)農(nóng)藥表現(xiàn)出不同程度的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，一般認(rèn)為是由于實(shí)際樣品檢測時(shí)，由于樣品中的雜質(zhì)分子與待測農(nóng)藥分子競爭進(jìn)樣口、柱頭以及質(zhì)譜系統(tǒng)的活性位點(diǎn)，從而使待測物與活性位點(diǎn)的反應(yīng)機(jī)會(huì)減少，待測分子的損失減少，因此，相同含量的待測物在實(shí)際樣品中要比在純?nèi)軇?biāo)樣中的響應(yīng)值高[27-28]。本文比較了相同濃度下目標(biāo)農(nóng)藥在純?nèi)軇┖突|(zhì)溶液中的峰面積，得到基質(zhì)效應(yīng)相對(duì)強(qiáng)度，基質(zhì)效應(yīng)（ME）=基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品峰面積/溶劑標(biāo)準(zhǔn)樣品峰面積。結(jié)果表明絕大多數(shù)的農(nóng)藥表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，因此本文選擇空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線來校正基質(zhì)效應(yīng)。

2.4 篩查方法建立與驗(yàn)證

在優(yōu)化的色譜、質(zhì)譜條件下，對(duì)184種農(nóng)藥分別進(jìn)行全掃描，采集目標(biāo)農(nóng)藥的高分辨質(zhì)譜圖，將其導(dǎo)入Personal Compound Database and Library（PCDL）軟件中，輸入每種農(nóng)藥的名稱、保留時(shí)間、分子式、精確質(zhì)量數(shù)、CAS號(hào)以及結(jié)構(gòu)式等信息，建立184種農(nóng)藥化合物的精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫。在安捷倫Masshunter Qualitative Analysis Workflows定性篩查軟件中，選擇自建數(shù)據(jù)庫，設(shè)定檢索保留時(shí)間偏差為±0.15 min，精確質(zhì)量偏差為±20×10-6，最小合格碎片數(shù)量為1個(gè)，共流出匹配得分≥70分，按離子碎片信息進(jìn)行自動(dòng)檢索，軟件將依據(jù)保留時(shí)間、精確質(zhì)量偏差、同位素峰分布和豐度比來計(jì)算每種化合物的實(shí)測值與譜庫中理論值的偏差，并給出匹配得分。在篩查定性分析中，定性和定量離子比值是判斷假陽性存在與否的重要參數(shù)，Workflows軟件中默認(rèn)兩者比例高于75分時(shí)合格，當(dāng)共流出匹配得分滿足要求，但定性、定量離子比值得分小于75分時(shí)，軟件會(huì)給予警示，表示存在假陽性可能，此時(shí)需手動(dòng)進(jìn)行驗(yàn)證。

對(duì)0.05、0.1、0.5 ?g/g三個(gè)添加濃度的空白基質(zhì)加標(biāo)樣品進(jìn)行篩查驗(yàn)證，以匹配得分≥70分的最低濃度為篩查限。結(jié)果表明，71.74%的農(nóng)藥篩查限為0.05 ?g/g，20.6%的農(nóng)藥篩查限為0.1 ?g/g，6.5%的農(nóng)藥篩查限為0.5 ?g/g。此外有1%左右的農(nóng)藥篩查限大于0.5 ?g/g，這兩種農(nóng)藥分別為乙草胺或甲基對(duì)硫磷、莠去津或β-六六六。篩查流程中，軟件首先對(duì)總離子流色譜圖進(jìn)行積分，然后根據(jù)精確質(zhì)量數(shù)進(jìn)行組分識(shí)別。乙草胺和甲基對(duì)硫磷、莠去津和β-六六六，這兩對(duì)農(nóng)藥在色譜柱中未完全分離，積分時(shí)默認(rèn)為一個(gè)組分，因此篩查過程中只識(shí)別了其中一種農(nóng)藥，導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。實(shí)際樣品分析時(shí)，對(duì)于保留時(shí)間接近的農(nóng)藥，建議采用手動(dòng)識(shí)別方法進(jìn)一步進(jìn)行確證。此外，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，儀器

的狀態(tài)對(duì)部分有機(jī)磷農(nóng)藥如乙酰甲胺磷、甲胺磷、氧化樂果等組分影響較大。如果進(jìn)樣系統(tǒng)不太清潔，組分會(huì)有降解和損失，導(dǎo)致色譜峰拖尾嚴(yán)重，影響定性、定量分析的準(zhǔn)確性。

與已有文獻(xiàn)報(bào)道相比[23， 29]，本方法的篩查限偏高，主要是由于評(píng)價(jià)方法和前處理過程的差異引起的。上述文獻(xiàn)在評(píng)價(jià)篩查限時(shí)，采用的是空白基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液直接進(jìn)樣，而本實(shí)驗(yàn)是采用空白樣品中添加不同濃度的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)過前處理凈化后進(jìn)行檢測，所得結(jié)果為方法篩查限，更符合實(shí)際樣品的檢測工作要求。由于本文中前處理過程中稀釋比例較大，最終上機(jī)檢測濃度相當(dāng)于1 mL待測液中0.13 g煙末樣品，實(shí)際樣品篩查時(shí)，可通過增加濃縮倍數(shù)，以提高方法的篩查能力。

與傳統(tǒng)的GC-MS/MS相比，GC-QTOF/MS在非靶向成分的篩查方面具有一定的優(yōu)勢，但在目標(biāo)污染物的定量分析中，由于掃描模式的差異，在線性范圍、檢出限和定量限方面，與串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀仍存在一定的差距[30]，目標(biāo)物濃度過低時(shí)易受干擾物質(zhì)的影響，導(dǎo)致結(jié)果偏差；此外，飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)自20世紀(jì)90年代突破技術(shù)瓶頸之后才得以快速發(fā)展和應(yīng)用，發(fā)展時(shí)間較短，價(jià)格昂貴，一定程度上限制了該技術(shù)的研究和應(yīng)用[31]。未來隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和研究的不斷深入，GC-QTOF/MS在目標(biāo)物定性篩查和未知物分析的突出優(yōu)勢將使其在農(nóng)藥殘留分析方面的應(yīng)用愈加廣泛。

2.5 方法學(xué)驗(yàn)證

2.5.1 線性關(guān)系及檢出限、定量限 按照1.1方法制作空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行GC-QTOF/MS檢測。以各農(nóng)藥與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值（y）與對(duì)應(yīng)各農(nóng)藥與內(nèi)標(biāo)物的濃度比值（x）為參數(shù)，利用工作站軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在10～800 μg/mL的線性范圍內(nèi)，方程決定系數(shù)結(jié)果見表1。所有農(nóng)藥線性關(guān)系良好，決定系數(shù)（r2）均大于0.995。以S/N=3和S/N=10分別計(jì)算方法的檢出限（LOD）和定量限（LOQ），定量限結(jié)果見表1。表1中各農(nóng)藥的定量限均低于CORASTA煙草農(nóng)殘限量（GRLs），方法適用于所述農(nóng)藥在煙草中的定量分析。

2.5.2 回收率與精密度 選取空白煙草樣品，分別制成添加量為0.05、0.25、0.5 ?g/g加標(biāo)樣品，每個(gè)添加水平平行3次。以1.2.1節(jié)方法進(jìn)行前處理，1.3節(jié)條件進(jìn)行測定，計(jì)算各農(nóng)藥平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），回收率結(jié)果如表1所示。在3個(gè)添加濃度水平下，除二溴氯丙烷、乙酰甲胺磷、速滅磷、二溴磷、乙拌磷、滅菌丹、六氯苯、百菌清和甲硫威回收率較低外，其他農(nóng)藥的平均回收率分別為62.05%～122.19%、65.18%～120.21%和68.55%～119.41%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.16%～14.04%、0.15%～12.06%和0.03%～14.92% （n=3）。殘留分析中，農(nóng)藥回收率的高低受農(nóng)藥自身的化學(xué)結(jié)構(gòu)和填料類型影響較大，本文采用的改性碳納米材料具有層狀中空結(jié)構(gòu)，在去除色素和平面結(jié)構(gòu)雜質(zhì)的同時(shí)，會(huì)對(duì)平面結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥產(chǎn)生吸附（如六氯苯、百菌清），導(dǎo)致其回收率降低。而二溴磷由于性質(zhì)不穩(wěn)定，通常其殘留量以敵敵畏計(jì)[4]。其他幾種極性較強(qiáng)、穩(wěn)定性差的農(nóng)藥，可通過使用酸化乙腈溶劑提高回收率。

2.6 實(shí)際樣品的分析

采用建立的GC-QTOF/MS農(nóng)藥殘留快速篩查確證技術(shù)對(duì)不同產(chǎn)地的9個(gè)煙草樣品進(jìn)行檢測。每個(gè)樣品均有農(nóng)藥殘留檢出，共檢出篩查得分≥70分農(nóng)藥19項(xiàng)次，涉及農(nóng)藥8種。分別為仲丁靈、二甲戊靈、三唑醇、甲霜靈、戊菌唑、聯(lián)苯菊酯、高效氯氟氰菊酯和氟節(jié)胺，分屬于除草劑、殺菌劑、殺蟲劑和植物生長調(diào)節(jié)劑。采用基質(zhì)匹配校準(zhǔn)曲線對(duì)檢出的農(nóng)藥進(jìn)行定量，結(jié)果表明8種農(nóng)藥均未超過CORASTA煙草農(nóng)殘限量推薦值。

3 結(jié) 論

本文采用濾頭式固相萃取技術(shù)作為凈化方法，并利用Box-Behnken響應(yīng)面法對(duì)凈化方法進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)合氣相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測，建立了煙草中184種農(nóng)藥殘留的快速篩查和定量測定方法。與串聯(lián)四極桿質(zhì)譜檢測技術(shù)相比，雖然定量限稍高，但憑借建立的高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫，結(jié)合TOF全掃描模式，利用篩查軟件的自動(dòng)檢索功能，可以實(shí)現(xiàn)不

需標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照的農(nóng)藥殘留高通量快速篩查，簡化了繁瑣的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過程，減少人力物力消耗，大大提高了工作效率。此外還可進(jìn)一步擴(kuò)展高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫中農(nóng)藥的種類和數(shù)量，滿足實(shí)際工作的需要。本方法為煙草中多種類農(nóng)藥殘留的快速高通量篩查和檢測工作提供了技術(shù)支持。

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