Nathan Winkelman

本文是根據(jù)現(xiàn)任美國豬獸醫(yī)協(xié)會(huì)主席Nathan Winkelman獸醫(yī)博士的演講整理而成的聽課筆記。

Winkelman博士（圖1）在報(bào)告的一開始列出了多種豬腸道疾?。▓D2）。Winkelman博士說，他的工作主要是研究豬回腸炎。根據(jù)他的研究，回腸炎已經(jīng)成為全球養(yǎng)豬界的一個(gè)巨大挑戰(zhàn)（圖3）。

Winkelman博士說，通過血清學(xué)、糞便聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polvmerase ChainReaction，PCR）檢測(cè)及臨床流行性證明該疾病在全球范圍內(nèi)流行;美國臨床型回腸炎的流行情況為發(fā)病率達(dá)42%、亞臨床回腸炎達(dá)94%;臨床回腸炎會(huì)影響豬群生產(chǎn)性能，包括平均日增重、平均日采食量和飼料轉(zhuǎn)化率;它還會(huì)影響利潤(rùn)（如淘汰率升高、達(dá)不到目標(biāo)體重），死亡率上升，治療成本高。根據(jù)Winkelman博士的報(bào)告，美國預(yù)計(jì)由回腸炎造成的損失達(dá)1億美元/年，亞臨床回腸炎對(duì)每頭豬將造成4美元的經(jīng)濟(jì)損失。

1 胞內(nèi)勞森氏菌的特點(diǎn)

Winkelman博士說，胞內(nèi)勞森氏菌屬于脫硫弧菌，是一種新的種屬，屬內(nèi)僅一種菌能夠感染豬。胞內(nèi)勞森氏菌在細(xì)胞內(nèi)呈彎曲狀，它在常規(guī)的細(xì)菌培養(yǎng)中不能生長(zhǎng)。胞內(nèi)勞森氏菌的培養(yǎng)周期較長(zhǎng)，一般為5 d～21 d。另外，培養(yǎng)周期與日齡和感染劑量有關(guān)。豬感染胞內(nèi)勞森氏菌后，會(huì)間歇性排菌，排菌時(shí)間通常為6周，最多可達(dá)12周。胞內(nèi)勞森氏菌感染豬腸道后，可導(dǎo)致小腸未成熟的隱窩細(xì)胞出現(xiàn)獨(dú)特的增生，導(dǎo)致腸道黏膜增厚（圖4）。

2 臨床回腸炎的表現(xiàn)形式

胞內(nèi)勞森氏菌感染豬后，通?？梢姷絻煞N表現(xiàn)形式。一是慢性型一一豬腸腺瘤：主要感染6～20周齡的豬，感染豬群表現(xiàn)為均勻度差，總體性能表現(xiàn)不佳，消瘦，拉稀甚至拉水樣糞便。二是急性型一一豬出血性腸炎：主要感染4～12月齡的青年豬，感染后表現(xiàn)為突然死亡，皮膚蒼白，伴有黑色或血色糞便（圖5）。病死豬剖檢后發(fā)現(xiàn)，受影響的小腸外觀呈大腦樣，剖開腸道內(nèi)部為黑色，可見出血（圖6）。

3 亞臨床回腸火

Winkelman博士說，由胞內(nèi)勞森氏菌引起的亞臨床回腸炎是回腸炎流行最廣泛的一種形式，它不表現(xiàn)出任何臨床癥狀，但可通過回腸炎檢測(cè)（糞便或腸組織PCR、增生性病變或?qū)乃澜M織部分的免疫組化）測(cè)定。感染豬群表現(xiàn)為消瘦和生產(chǎn)性能差。

4 流行病學(xué)——回腸炎的傳播

Winkelman博士說，回腸炎主要通過糞一口途徑傳播，豬舍之間和豬與豬之間的水平傳播較垂直傳播更為普遍。引起豬發(fā)病的感染劑量是每克糞便不到104個(gè)細(xì)胞。豬感染后，大多數(shù)會(huì)排菌6周，最多不超過12周。胞內(nèi)勞森氏菌在5℃～15℃的環(huán)境中至少可存活2周。老鼠和昆蟲是胞內(nèi)勞森氏菌的攜帶者，工作靴、運(yùn)輸車和生產(chǎn)設(shè)備等沾染感染豬場(chǎng)的污染物也可傳播本病。Winkelman博士強(qiáng)調(diào)說，本病的凈化比較困難，疫苗不能清除病原體攜帶者。中國的回腸炎主要是從西方引種傳入的。

5 診斷

5.1死亡前的診斷一一糞便PCR檢測(cè)勞森氏菌——黃金標(biāo)準(zhǔn)

Winkelman博士說，豬回腸炎可通過定量PCR的循環(huán)值對(duì)糞便內(nèi)細(xì)菌進(jìn)行定量檢測(cè)，此方法的敏感性為90%，特異性為100%。每克糞便含有102～103個(gè)細(xì)菌也能夠被檢測(cè)到。循環(huán)值與腸道的損傷無關(guān)，但與平均日增重相關(guān)（圖7）。

Winkelman博士在報(bào)告中還列出了一些經(jīng)驗(yàn)。他說，根據(jù)美國明尼蘇達(dá)大學(xué)診斷實(shí)驗(yàn)室的研究，糞便樣本PCR胞內(nèi)勞森氏菌≤31，表明陽性率極高，豬增生性腸炎免疫組化陽性與眼觀病變有很高的聯(lián)系;根據(jù)艾奧瓦州立大學(xué)診斷實(shí)驗(yàn)的研究，PCR循環(huán)閾值≤20，那么免疫組化一定呈陽性，PCR循環(huán)閾值≥30，有95%的概率為陰性。

在談到血清學(xué)檢測(cè)方法時(shí)，Winkelman博士說免疫球蛋白G （Immunoglobulin G，IgG）抗體是一種非常有用的篩選工具，可檢測(cè)豬群是否已暴露于致病的環(huán)境中。豬感染病原體后經(jīng)2～4周會(huì)表現(xiàn)出血清學(xué)轉(zhuǎn)陽，具體時(shí)間與勞森氏菌的感染量有關(guān)。不能檢測(cè)到口服疫苗的滴度;免疫過氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)（ImmunoperoxidaseMonolayer Assay，IPMA）滴度范圍為30～960，滴度大于960表示豬有嚴(yán)重的疾病。

5.2死后診斷

Winkelman博士說，豬回腸炎的死亡后診斷可以通過剖檢和組織病理學(xué)進(jìn)行確診（圖8）。

6 治療和控制

Winkelman博士說，豬回腸炎可以用抗生素進(jìn)行治療，注射、飲水或拌料是治療和控制回腸炎的常用方法。胞內(nèi)勞森氏菌對(duì)泰妙菌素、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類和林可胺類抗生素敏感，體外和體內(nèi)研究表明泰妙菌素最為有效（圖9）。

Winkelman博士補(bǔ)充說，豬回腸炎也可以用疫苗進(jìn)行預(yù)防，途徑是口服或注射，但在美國的使用證明效果一般。接種疫苗僅能控制70%～ 80%臨床型回腸炎（回腸炎的臨床癥狀），不能控制亞臨床型回腸炎。在控制回腸炎上，使用抗生素的效果高于接種疫苗。

7 枝原凈TM液體在胞內(nèi)勞森氏菌黏膜勻漿感染中使用劑量研究

7.1試驗(yàn)方法

試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組和三個(gè)處理組（分別添加枝原凈TM60 mg/kg、120 g/kg和180 mg/kg。處理組和陽性對(duì)照組的試驗(yàn)豬在第O天灌胃2×109個(gè)胞內(nèi)勞森氏菌。第7天20%的豬和60%的豬圈出現(xiàn)腹瀉，處理組進(jìn)行藥物治療，陽性對(duì)照組未用藥。第12天處理組停止治療，第27天安樂死。未治療組為15 d。

7.2觀察

測(cè)定指標(biāo)為平均日增重、平均日采食量和飼料轉(zhuǎn)化率（圖10）。同時(shí)還進(jìn)行臨床觀察（圖11）。

7.3結(jié)論

a.根據(jù)臨床或生產(chǎn)性能表現(xiàn)，枝原凈TM的3種劑量組間沒有顯著差異;

b.即使豬感染109個(gè)胞內(nèi)勞森氏菌黏膜勻漿，延胡索酸？泰妙菌素也表現(xiàn)出極高的治療效果;

c.60 mg/kg被認(rèn)為是治療的“金標(biāo)準(zhǔn)”。

8 豬痢疾

痢疾是一種糞便中帶有黏膜和血液的腹瀉，通常是由于結(jié)腸發(fā)生病變所致。病豬會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的β-溶血、嚴(yán)重的黏膜性出血性腹瀉，因豬的生產(chǎn)性能下降、死亡增多和藥物治療而造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬痢疾主要是由豬痢疾短螺旋體、漢普林細(xì)螺旋體等引起的腸道傳染病。診斷通常采用剖檢，病原分離培養(yǎng)后用PCR檢測(cè)、測(cè)序（圖12）。病原對(duì)泰妙菌素、卡馬氧、龐大霉素和林可霉素敏感（圖13）。

Winkelman博士補(bǔ)充說，在美國，豬痢疾是一種再次發(fā)生的疾病，早在20世紀(jì)90年代，其在美國已經(jīng)被凈化。在歐洲和亞太地區(qū)，豬痢疾仍然是影響豬健康的主要疾病;在加拿大和美國的部分地區(qū)，豬痢疾重新出現(xiàn)。策略性地在飼料中添加泰妙菌素（枝原凈TM），進(jìn)行嚴(yán)格的消毒，并控制老鼠，可以凈化豬痢疾（美國）（圖14）。目前，對(duì)于豬痢疾沒有疫苗和有效的血清學(xué)檢測(cè)手段。

9 對(duì)回腸炎的展望

由于病毒性疾病在養(yǎng)豬生產(chǎn)系統(tǒng)逐步得到凈化，豬群變得更加健康;但地方性疾病如回腸炎會(huì)造成養(yǎng)豬生產(chǎn)巨大的經(jīng)濟(jì)損失，它們?cè)跓o抗的豬群中會(huì)更加流行。

提升獸醫(yī)對(duì)死亡前后豬的診斷技術(shù)，可以讓他們更好地監(jiān)控回腸炎的臨床和亞臨床癥狀，并更好地了解回腸炎造成的經(jīng)濟(jì)損失。

建立回腸炎凈化豬群或徹底消除病原體很困難，除非用抗生素消除胞內(nèi)勞森氏菌攜帶豬群和/或使用疫苗提供更強(qiáng)的免疫力。