李燕芳

[摘 要]氧樂果是每年廣東省農(nóng)業(yè)廳組織的全省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)能力驗證的必考項目，也是日常工作的監(jiān)測項目。氧樂果是有機磷農(nóng)藥中回收率比較難做得好的一種，如果氧樂果回收率做得準確，其他的很多有機磷農(nóng)藥就可做得好。本文依照《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》NY/T761-2008[1]這一標準，對氧樂果的回收率進行檢測，提出了檢測過程應(yīng)注意的事項，提出了如何把氧樂果回收率做得最好。

[關(guān)鍵詞]氧樂果；回收率；注意事項

[中圖分類號]TS207.53 [文獻標識碼]A

氧樂果又名氧化樂果，氧化樂果對害蟲和螨類有很強的觸殺作用，尤其對一些已經(jīng)對樂果產(chǎn)生抗藥性蚜蟲，毒力較高，在低溫期仍能保持較強的毒性。主要用于防治香蕉多種蚜蟲、卷葉蟲、斜紋夜蛾、花薊馬和網(wǎng)蝽等的良好藥劑，低溫期氧化樂果的殺蟲作用表現(xiàn)比樂果快。 然而需要注意的是因為氧化樂果還有很強的內(nèi)吸殺蟲作用，可以被植株的莖、葉吸進植株體內(nèi)，并可傳送到植株各個部位，因此很容易造成農(nóng)藥殘留，作為高毒農(nóng)藥的殺蟲劑，“氧化樂果”是一種用于果樹或綠化類植物的殺蟲劑。

在蔬菜生產(chǎn)過程中，“氧化樂果”屬于違禁使用農(nóng)藥，而在農(nóng)業(yè)部公布的禁止和限制使用的農(nóng)藥名單上是禁止氧樂果在甘藍上使用的。 農(nóng)業(yè)部、省農(nóng)業(yè)廳和我單位，每月都有對蔬菜和水果中的氧樂果進行例行檢查。每次檢測，筆者都對氧樂果進行回收率驗證。以下是氧樂果的回收率檢測過程及各個環(huán)節(jié)的注意事項。

1 原理

試樣中有機磷農(nóng)藥經(jīng)乙腈提取，提取溶液經(jīng)過濾、濃縮后，用丙酮定容，用自動進樣器注入氣相色譜儀的進樣口，農(nóng)藥組分經(jīng)不同極性的兩根毛細管柱分離，火焰光度檢測器（FPD磷濾光片）檢測。用雙柱的保留時間定性，外標法定量。

2 試劑材料與儀器設(shè)備

（1）試劑與材料：除非另有說明，在分析中僅使用確認為分析純的試劑和GB/T 6682中規(guī)定的至少二級的水。乙腈；丙酮，重蒸；氯化鈉，140 ℃ 烘烤4h；濾膜，0.2um，有機溶劑膜；鋁箔。

（2）儀器設(shè)備：氣相色譜儀，帶有雙火焰光度檢測器（FPD磷濾光片），自動進樣器，不分流/分流進樣口；分析實驗室常用儀器設(shè)備；食品加工器；旋渦混合器；勻漿機；氮吹儀。

3 農(nóng)藥標準溶液配制

（1）購買來的氧樂果標液是100 mg/L，吸0.4 mL到10 mL的容量瓶中，用丙酮定容至10 mL（濃度為4 mg/L），用于做加標的標液。

（2）配制氧樂果標準曲線：配0.02、 0.05、0.10、0.15、0.20mg/L 的5個濃度的標液。

4 加標過程

選取番茄做加標樣品，番茄樣品無殘留，在250mL三角瓶中準確稱取25.0 g樣品，用移液槍向樣品中，分別添加濃度為4 mg/L的氧樂果標液0.25、0.5、1mL， 即加標樣品中氧樂果的濃度分別為0.04、0.08、0.16mg/kg，每個濃度做3個平行樣，同時做空白樣品。

5 前處理步驟

（1）提取：把樣品放入勻漿機中，加入50.0 mL乙腈，在勻漿機中高速勻漿2 min。

（2）凈化：勻漿后用濾紙過濾，濾液收集到裝有5g～7g氯化鈉的100 mL具塞量筒中，收集濾液40mL～50mL，蓋上塞子，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。

（3）濃縮：從具塞量筒中吸取10.00 mL乙腈溶液，放入150 mL燒杯中。將燒杯放在80 ℃水浴鍋上加熱，燒杯內(nèi)緩緩?fù)ㄈ氲獨饬?，蒸發(fā)近干，加入2.0 mL丙酮，蓋上鋁箔，備用。將上述備用液完全轉(zhuǎn)移至10.0 0mL刻度試管中，再用丙酮分三次沖洗燒杯，并轉(zhuǎn)移至試管，最后定容至5.00 mL，在旋渦混合器上混勻，分別移入兩個2 mL進樣瓶中，供色譜測定。如定容后的樣品溶液過于混濁，應(yīng)用0.2 um濾膜過濾后再進行測定。

6 測定

6.1 色譜參考條件

（1）色譜柱：14%氰丙基苯基（其中7%氰丙基7%苯基）86%甲基硅酮，中極性毛細管柱（DB-1701），30m×0.25mm× 0.25um，或相當者。

（2）溫度：進樣口230℃；柱溫120℃-8℃/ min -210℃ （4min）-30℃/ min -250℃；檢測器270℃。

（3）氣體及流量：載氣：氮氣，純度≥99.999%，流速為1.3 mL/min；燃氣：氫氣，純度≥99.999%，流速為80 mL /min；助燃氣：空氣，流速為120 mL /min。

（4）進樣方式：不分流進樣。

6.2 色譜分析

由自動進樣器分別吸取1.0uL標準溶液和凈化后的樣品溶液注入色譜儀中，以保留時間定性，以獲得的樣品溶液峰面積與標準溶液峰面積比較定量。

7 結(jié)果

（1）色譜圖：在上述前處理過程及色譜條件下，得到氧樂果的標液、加標樣品、空白樣品、標準曲線的色譜圖，如圖1～圖4所示，加標樣品圖譜無干擾，氧樂果出峰良好。

（2）標準曲線和最低檢出限：在實驗條件下，以峰面積為X橫坐標，濃度為Y縱坐標繪制標準曲線（見圖4），測定濃度范圍為0.02～0.20mg/L，標準曲線的相關(guān)系數(shù)為0.9999；以基線噪聲3倍峰面積對應(yīng)的質(zhì)量濃度為檢出限（S/N=3），檢出限為0.02mg/kg。

（3）加標回收率和精密度：3個濃度的回收率（見表1），在回收率的合格范圍內(nèi)；精密度RSD值也在合格的范圍內(nèi)（見表1）

圖1 氧樂果標樣（0.10 mg/L）的色譜圖

圖2 加標樣品中氧樂果（加標濃度0.08 mg/kg）的色譜圖

圖3 空白樣品的色譜圖

圖4 氧樂果標準曲線圖

表1 樣品中氧樂果加標回收率和精密度實驗

加標濃度

（mg/kg） 平均值

（mg/kg） 平均回

收率（%） 回收率的合格范圍（%） RSD

（%） RSD的合格

范圍（%）

0.04 0.034 85.0 60～120 1.68 ≤20

0.08 0.066 82.5 60～120 0.87 ≤20

0.16 0.13 81.3 80～110 4.33 ≤15

8 實驗過程注意事項與討論

8.1 配制氧樂果標液的注意事項

（1）至少配制5個點，濃度盡可能覆蓋一個數(shù)量級，加標的濃度要包含在5個點內(nèi)。

（2）要用樣品基質(zhì)來配制標液，因為氧樂果有基質(zhì)效應(yīng)，受基質(zhì)影響大，需要基質(zhì)配標液，消除基質(zhì)效應(yīng)。經(jīng)過多次試驗，同一濃度的標液，用基質(zhì)配制標樣與用丙酮配制標樣，峰面積要大很多（見圖5和表2）；回收率要偏高很多（見表2）。

圖5 氧樂果標液（0.10mg/L）用基質(zhì)和丙酮配制的峰面積比較圖

表2 氧樂果標液用基質(zhì)和丙酮配制的峰面積和回收率

標液濃度

（mg/L） 丙酮配標液的峰面積 基質(zhì)配標液的峰面積 丙酮配標液的回收率（%） 基質(zhì)配標液的回收率（%）

0.05 337268.6 464529.2 127.5 85.0

0.10 510422.6 932416.6 162.5 82.5

0.20 1203727.2 1846773.1 131.3 81.3

（3）配標液的移液槍要經(jīng)過校準，是準確的；使用移液槍前，要先學(xué)習(xí)移液槍的正確使用方法，既槍頭要旋緊，吸液體時，要先洗槍頭1次，移液時，要緩慢吸起來；各個濃度的配制過程要一致。

（4）標準曲線的R值不應(yīng)低于0.99；若R值小于0.99，證明曲線配制不準確，不能用于定量，要重配標液。

8.2 加標的注意事項

（1）不要選蔥、蒜、蘿卜等樣品做空白樣品，因為這些物質(zhì)由于基質(zhì)效應(yīng)引起的干擾大，出了很多雜峰，會影響目標峰， 所以選番茄、黃瓜做空白樣品，樣品的基線很干凈。

（2）加標的移液槍或移液管要經(jīng)過校準的。

8.3 提取過程的注意事項

（1）換樣品時，要清洗勻漿機3次，避免交叉污染。

（2）平行樣品的轉(zhuǎn)速與勻漿時間要一致，結(jié)果才能平行。

8.4 凈化的注意事項

（1）先要挑選不會漏液的具塞量筒，劇烈震蕩時，才能避免漏液而結(jié)果不準確。

（2）用手振蕩的過程中，兩手要握緊，用力左右劇烈振蕩，力度與時間要足夠，氧樂果與水才能充分分離。

（3）加氯化鈉要足夠，靜置的時間要足夠。因為此步驟的目的是，讓有機相乙腈（帶著氧樂果）與水完全分離。氧樂果是易溶于水的農(nóng)藥，但不溶于氯化鈉溶液，所有水都與氯化鈉溶解成氯化鈉溶液，氧樂果就完全與水分離了。若靜置后，具塞量筒底部沒看到氯化鈉，那有可能氯化鈉加得不夠。

（4）靜置后不分離而是出現(xiàn)混濁，可離心或延長靜置時間。

8.5 濃縮的注意事項

（1）氮吹儀的氣流應(yīng)先調(diào)好，每個樣品的氣流大小控制一致，保證每個燒杯中的液面都會晃動，氣流要緩慢，防止樣品濺出。

（2）樣品濃縮時，要吹至近干，最好吹至0.5 mL，太干了，回收率會減少（見圖6和表3）。吹至近干是做好回收率最關(guān)鍵的一步，因為氧樂果對熱不穩(wěn)定，吹干對易揮發(fā)、蒸汽壓較高的農(nóng)藥有影響，有些農(nóng)藥組分有溶劑在時，揮發(fā)會較慢，而一旦溶劑蒸干，農(nóng)藥組分揮發(fā)就會很快了。

圖6 氧樂果加標樣品氮吹至近干和氮吹很干的峰面積比較圖

表3 氧樂果加標樣品氮吹至近干和氮吹很干的回收率

加標濃度

（mg/kg） 氮吹很干的平均值

（mg/kg） 氮吹很干的回收率

（%） 氮吹至近干的回收率（吹至0.5ml）（%）

0.04 0.026 65.0 85.0

0.08 0.055 68.8 82.5

0.16 0.10 62.5 81.3

（3）要防止局部過干，所以燒杯中的液體較少時，就要搖晃燒杯直到近干，馬上拿出，加上丙酮。

（4）選的10.00 mL 刻度試管要經(jīng)過校準的，可送去權(quán)威機構(gòu)校準，也可自己校準。自己校準的方法是用天平稱量法（在20 ℃時，用10.00 mL刻度試管稱5g水，看是否是5 mL，如果是，證明試管是準確的，否則就不準確。）

8.6 測定的注意事項

（1）氣相色譜儀要先維護好，氧樂果很容易被吸附，所以進樣口的襯管和石英棉要硅烷化。并且襯管不能臟，因為襯管臟了，會使氧樂果被吸附而造成結(jié)果不準，并且會出現(xiàn)鬼峰而影響定性判斷。

（2）色譜柱要割好，一般割10cm 以上，因為高沸點物質(zhì)會殘留在柱頭，影響柱效，產(chǎn)生鬼峰。

（3）進樣口、色譜柱和檢測器要先老化，保證儀器干凈，處于好的狀態(tài)。

9 結(jié)語

實驗的過程中，主要注意以下幾個重要步驟：

（1）所有的定量器具都要經(jīng)過校準，確保準確。

（2）氧樂果標液配制的過程中要注意基質(zhì)效應(yīng)，即要用基質(zhì)配制標液。如上述實驗，同一濃度的標液（如濃度0.10 mg/L），用丙酮配制比用基質(zhì)配制的峰面積要小1倍（如圖5），這樣會造成回收率高1倍（如表2）。因為氧樂果是強極性的農(nóng)藥，會有基質(zhì)效應(yīng)，需要基質(zhì)配標液，消除基質(zhì)效應(yīng)。

（3）濃縮過程，氮吹至近干是做好回收率最關(guān)鍵的一步，如上述實驗，吹得干的回收率比吹至近干的回收率約低20%（如表3），在一般情況下，氧樂果回收率約80%，如果再損失20%，就更容易不合格。

[參考文獻]

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