田甜 張瑜

[摘要]對高效液相色譜法測定黃瓜中三羥基克百威含量的不確定度進(jìn)行評估，并分析產(chǎn)生該方法不確定度的來源。經(jīng)檢測黃瓜中的三羥基克百威含量為0.08305mg/kg時(shí)，其擴(kuò)展不確定度為0.00276 mg/kg，k=2（95%置信度）。評定結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)峰面積的測定（）是影響該方法不確定度的主要因素。

[關(guān)鍵詞]高效液相色譜法；不確定度；黃瓜；三羥基克百威

[中圖分類號]S481.8 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

克百威是廣譜、高效、高毒性的氨基甲酸酯類殺蟲、殺螨、殺線蟲劑，可以被植物吸收并輸送到莖葉部，達(dá)到防治害蟲的目的。三羥基克百威是克百威的主要代謝產(chǎn)物，具有觸殺和胃毒作用，屬于丁硫克百威的毒代謝產(chǎn)物，若與膽酰脂酶結(jié)合具有不可逆性，因此毒性甚高。根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量，GB 2763-2016》，蔬菜中三羥基克百威農(nóng)藥殘留按照 NY/T761-2008規(guī)定的方法進(jìn)行檢測。為有效控制黃瓜中使用該農(nóng)藥所帶來的殘留風(fēng)險(xiǎn)，實(shí)驗(yàn)人員根據(jù)該方法對黃瓜中三羥基克百威的殘留量進(jìn)行有效監(jiān)測。

為了進(jìn)一步提升檢測分析方法的有效性及可靠性，對其進(jìn)行不確定度的評估顯得格外有意義。本研究依據(jù)《測量不確定度評定與表示，JJF1059.1-2012》和《化學(xué)分析中不確定度的評估指，CNAS—GL06》等技術(shù)規(guī)范要求，對液相色譜法測定黃瓜中三羥基克百威的不確定度進(jìn)行評估，分析該方法不確定度分量及其來源，確保檢測結(jié)果更加真實(shí)有效。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

島津液相色譜儀（配熒光檢測器與柱后衍生系統(tǒng)）；柱子為C8（4.0×250mm），5?m；移液槍為Eppendorf。

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟

精確稱量25.00g樣品置于打樣機(jī)中，移取50.0mL乙腈，均勻破碎2min后過濾，匯集濾液40±5mL到裝有6±1g氯化鈉的100mL具塞量筒中，在離心機(jī)中離心3min后取出靜置15min，等待分層充足后。在具塞量筒中移取10.00mL乙腈上清液，放置在150mL的燒杯中，通過65℃水浴鍋進(jìn)行加熱，同時(shí)緩緩氮吹，將乙腈蒸發(fā)近干，加入甲醇+二氯甲烷（比例為1+99）2.0mL洗凈，待凈化。用4.0mL甲醇+二氯甲烷（1+99）活化氨基柱，當(dāng)溶液面到達(dá)氨基柱吸附層表面的時(shí)候，立刻加入待凈化的溶液，用15 mL玻璃試管將洗脫液進(jìn)行收集，用2 mL甲醇+二氯甲烷（1+99）洗具塞量筒后過柱，并再重復(fù)一次。將試管放置在氮吹儀上，設(shè)置水浴溫度為45℃，氮吹蒸發(fā)至溶液近干，用甲醇定容至2.5mL?；靹蚝螅捎?.45μm濾膜進(jìn)行過濾，吸取20.0μL樣品溶液注入液相色譜儀中，等待分析。檢測時(shí)，室溫保持在16～26℃。

2 結(jié)果與討論

2.1 建立數(shù)學(xué)模式

ω為樣品中農(nóng)藥的含量（mg/kg）；為標(biāo)準(zhǔn)液中三羥基克百威濃度含量（μg/mL）；為標(biāo)準(zhǔn)液中三羥基克百威峰面積（mV*s）；為樣品中三羥基克百威峰面積（mV*s）；m為樣品的質(zhì)量（g）；為提取液的總體積（mL）；為提取液分取的體積（mL）；為樣品溶液定容體積（mL）。

2.2 分析不確定度的來源

HPLC檢測黃瓜中三羥基克百威的標(biāo)準(zhǔn)不確定度主要來源：標(biāo)準(zhǔn)液濃度、試樣稱量、樣品前處理溶液體積、標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積、試樣峰面積、檢測方法重復(fù)性等。

從檢測方法可知，各參數(shù)相互獨(dú)立，合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算可采用相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度的合成。

2.3 量化不確定度分量

2.3.1 由實(shí)驗(yàn)總重復(fù)性導(dǎo)出的相對不確定度μrel（rep）。同一樣品溶液進(jìn)樣5次，檢測到農(nóng)藥濃度分別為0.178 mg/kg、0.187 mg/kg、0.184 mg/kg、0.182 mg/kg、0.179 mg/kg。平均濃度為0.182 mg/kg。計(jì)算不確定度：

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度導(dǎo)致的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度評定。（1）標(biāo)準(zhǔn)液純度引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度。實(shí)驗(yàn)用三羥基克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液母液，濃度為100 μg/mL，1.0 mL/支，其擴(kuò)展不確定度為-0.12 ～0.12μg/mL（k=2），則：

（2）稀釋過程引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度評定。將三羥基克百威標(biāo)準(zhǔn)母液1mL移至10mL容量瓶（A級）中，制備成濃度為10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。再用移液槍吸取200μL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至定容體積為10mL的容量瓶（A級）中，用甲醇進(jìn)行定容，配置成濃度為0.2μg/mL的三羥基克百威標(biāo)準(zhǔn)液。

（3）合成相對不確定度評定。

2.3.3 測定標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積導(dǎo)致的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度評定。根據(jù)《液相色譜儀檢定規(guī)程，JJG 705-2014》操作測定樣本。儀器精準(zhǔn)度、進(jìn)樣偏差最終均反映在試樣峰，相同條件下對標(biāo)準(zhǔn)溶液中三羥基克百威含量進(jìn)行平行6次檢測，如表1所示。該不確定度通過連續(xù)平行檢測計(jì)算，屬于A類評定。

（1）標(biāo)準(zhǔn)色譜峰面積重復(fù)測量導(dǎo)致的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度。根據(jù)以上數(shù)據(jù)，計(jì)算可得：

（2）儀器產(chǎn)生的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度。依據(jù)儀器檢定信息，其重復(fù)性誤差為，則：

（3）標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰面積測定不確定度的合成。

2.3.4 試樣色譜峰面積檢測引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度評定。（1）由試樣色譜峰面積重復(fù)測量導(dǎo)致的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度。通過該不確定度重復(fù)進(jìn)樣計(jì)算，屬于A類評定。對樣本中三羥基克百威含量6次重復(fù)測定結(jié)果分別為49618、49345、50750、49970、48663、49212mV*s，平均值49593mV*s，則

（2）由檢測儀器產(chǎn)生的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度。依據(jù)儀器檢定信息，其定量重復(fù)性誤差為（B類評定），則：

（3）由試樣峰面積測定引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成。

2.3.5 樣品稱量時(shí)帶入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度μrel（m）評定。樣品稱量過程中使用的天平（最小稱量值為0.01g），其最大誤差為-0.05～0.05g，因此由稱量帶入的不確定度為：

2.3.6 試樣前處理溶液體積引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度評定。（1）提取過程中溶液總體積導(dǎo)致的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度。50 mL單標(biāo)線胖肚移液管（A級）的容量允許誤差范圍為±0.050mL，則。

乙腈的膨脹系數(shù)為1.37×10-3/℃，而檢測實(shí)驗(yàn)室的溫度變化范圍在-3～3℃之間，因此。

計(jì)算樣品提取液總體積引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3 討論

由表2可知，對檢測結(jié)果影響最大的不確定度分量為標(biāo)準(zhǔn)峰面積的測定（A標(biāo)），其次是樣品總重復(fù)性測定（rep）、樣品峰面積測定（A樣）和前處理過程溶液體積（V）等。因此在檢測過程中應(yīng)按儀器操作規(guī)程做好儀器各項(xiàng)調(diào)試工作，確保儀器溫度、壓力等儀器條件穩(wěn)定運(yùn)行，同時(shí)檢測所用的儀器、器材、容器和檢測場所應(yīng)保持清潔，以免沾染其他物質(zhì)影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。注意樣品前處理操作規(guī)范，做到均勻取樣。此外，還應(yīng)特別注意檢測過程中加強(qiáng)對上述主要影響因素的控制，減少測量的不確定度，提高測量結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

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