張曉婷 張?jiān)律? 黃雅玲

[摘要]目的 分析不同組織中芳香烴受體（AHR）與人絨毛膜促性腺激素（HCG）、雌二醇（E2）、孕酮（P）、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）的相關(guān)性，探討AHR與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（RSA）的關(guān)系。方法 選取2016年12月～2017年3月在山西醫(yī)學(xué)科學(xué)院婦產(chǎn)科門診就診的30例RSA患者為研究組，正常早孕要求行人工流產(chǎn)的30例患者為對(duì)照組，取每例患者的外周血、絨毛、蛻膜組織，檢測(cè)每例患者血清中的AHR、HCG、E2、P水平，絨毛及蛻膜組織中的ER、PR水平，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 研究組患者絨毛、蛻膜中的AHR水平明顯高于對(duì)照組（P<0.05），兩組的血清AHR水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。研究組患者的血清HCG、P、E2水平明顯低于對(duì)照組（P<0.05）。研究組絨毛及蛻膜組織中的ER、PR水平明顯低于對(duì)照組（P<0.05）。血清中AHR與HCG、P、E2無相關(guān)性，絨毛及蛻膜組織中AHR與相應(yīng)部位ER、PR無相關(guān)性。結(jié)論 人體中AHR的增高可能會(huì)導(dǎo)致RSA，尤其是局部組織絨毛及蛻膜中AHR的升高，ER、PR的表達(dá)量減少也是導(dǎo)致復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的原因，但AHR的升高與ER、PR之間無聯(lián)系，AHR升高既不會(huì)通過ER、PR影響妊娠結(jié)局，ER、PR也不會(huì)影響AHR的升高，AHR可能直接或者通過其他路徑影響著妊娠結(jié)局。

[關(guān)鍵詞]芳香烴受體；雌激素受體；孕激素受體；絨毛；蛻膜

[中圖分類號(hào)] R714.21 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）3（b）-0009-04

Correlation analysis of aromatic hydrocarbon receptor and recurrent spontaneous abortion

1.Shanxi Dayi Hospital Affiliated to Shanxi Medical University，Taiyuan 030000，China；2.Department of Obstetrics and Gynecology，Shanxi Academy of Medical Sciences，Taiyuan 030000，China

[Abstract]Objective To analyze the correlation between aromatic hydrocarbon receptor （AHR） and human chorionic gonadotropin （HCG），estradiol （E2），progesterone （P），estrogen receptor （ER），and progesterone receptor （PR），and to explore the relationship between AHR and recurrent spontaneous abortion （RSA）.Methods From December 2016 to March 2017，30 RSA patients treated in the Department of Obstetrics and Gynecology，Shanxi Academy of Medical Sciences were selected as the research group.30 patients with abortion requiring in normal early pregnancy were categorized into the control group.The peripheral blood，villi and decidua tissues were collected.The levels of serum AHR，HCG，E2，P，ER and PR from villi and decidua tissues were detected and statistically analyzed.Results The AHR levels in the villi and decidua tissues in the research group were significantly higher than those in the normal control group （P<0.05）.There was no significant difference in the serum AHR levels between the two groups （P>0.05）.The level of serum HCG，P and E2 in the research group were significantly lower compared with those in the normal control group （P<0.05）.The levels of ER and PR in villus and decidua tissues in the research group were significantly lower，in comparison with those in the control group （P<0.05）.There was no correlation between the serum AHR and HCG，P and E2.The AHR in the villi and decidua tissues was not correlated with ER or PR in the corresponding areas.Conclusion The elevated AHR in human may lead to RSA，especially the increase of AHR in the local villi and decidua tissues.The decrease of ER and PR expression is also the cause of RSA.However，the increase of AHR is not associated with ER or PR.Increase of AHR will may directly influence on pregnancy outcome or by other pathways except ER and PR.Meanwhile，ER and PR will not affect the rise of AHR，either.

[Key words]Aromatic hydrocarbon receptors；Estrogen receptors；Progesterone receptors；Villi；Decidua

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生3次及3次以上的自然流產(chǎn)，常見的原因有染色體異常、解剖異常、內(nèi)分泌異常、感染等，但仍有1/2的患者病因不明，稱為原因不明性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）。有研究發(fā)現(xiàn)，正常的雌孕激素水平能夠促進(jìn)子宮內(nèi)膜容受性，有利于胚泡的植入及胎盤的形成發(fā)育，可以維持胚胎持續(xù)生長(zhǎng)發(fā)育[1]。也有研究發(fā)現(xiàn)，芳香烴受體（AHR）可通過配體依賴的方式調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化和巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等重要免疫細(xì)胞的功能[2]，參與許多重要的生理過程[3]，如細(xì)胞周期和增殖的調(diào)控、細(xì)胞分化和凋亡、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫應(yīng)答、晝夜節(jié)律、腫瘤誘發(fā)[4]、脂類代謝有關(guān)基因的表達(dá)、胚胎的形成、胎兒生長(zhǎng)、血管的形成和重塑等[5-8]。本研究通過檢測(cè)RSA患者及正常對(duì)照組患者血清中AHR、人絨毛膜促性腺激素（HCG）、雌二醇（E2）、孕酮（P），絨毛及蛻膜組織中雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）的水平，分析AHR在RSA中的作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2016年9月～2017年3月在我院因胎停育而行清宮術(shù)的30例患者作為研究組，納入標(biāo)準(zhǔn)為男方精液分析正常，女性月經(jīng)周期正常，無生殖器官解剖結(jié)構(gòu)異常、自然流產(chǎn)史或胎停育史2次以上，抗心磷脂抗體、抗核抗體、藥物基因、同型半胱氨酸均無異常，夫婦雙方染色體檢查正常的患者。選擇同期在我院要求行人工流產(chǎn)的30例患者作為對(duì)照組，納入標(biāo)準(zhǔn)為此前有正常生育史，無自然流產(chǎn)史或胎停育史，超聲提示可見胚胎原始心管搏動(dòng)，未合并其他相關(guān)疾病。本研究已經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意，研究對(duì)象簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集及處理 收集兩組早孕婦女的血清、絨毛及蛻膜組織。血清置于離心機(jī)中，以3000 r/s離心15 min后取上清液，置于-70℃冰箱中備用；將絨毛及蛻膜用生理鹽水進(jìn)行漂洗，剪取200 mg，加入生理鹽水1.8 ml，使用玻璃研磨器進(jìn)行研磨，置于離心機(jī)中，以3000 r/s速度離心15 min，提取上清液，置于-70℃冰箱中備用。

1.2.2 Elisa試驗(yàn)方法 采用Elisa試驗(yàn)方法對(duì)各個(gè)標(biāo)本中的AHR、ER、PR進(jìn)行檢測(cè)。取出上述冰凍標(biāo)本，室溫下溶解，嚴(yán)格按照Elisa試劑盒說明書進(jìn)行試驗(yàn)，得出數(shù)值。

1.2.3化學(xué)發(fā)光法 采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)各外周血標(biāo)本中HCG、P、E2的濃度。取出每例患者血清標(biāo)本，室溫下溶解，嚴(yán)格按照各個(gè)試劑盒說明書進(jìn)行試驗(yàn)，得出數(shù)值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，如符合正態(tài)分布，采用兩樣本t檢驗(yàn)分別對(duì)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血清、絨毛、蛻膜的AHR進(jìn)行比較，采用Pearson相關(guān)分析研究AHR與HCG、E2、P、ER、PR是否相關(guān)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α<0.05。

2結(jié)果

2.1兩組病例AHR表達(dá)情況的比較

研究組與對(duì)照組血清、絨毛及蛻膜組織中均有AHR的表達(dá)。研究組絨毛及蛻膜組織中的AHR表達(dá)量明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；研究組外周血中的AHR表達(dá)量與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2兩組病例血清中HCG、E2、P表達(dá)情況的比較

研究組血清中的HCG、E2、P含量明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

2.3兩組病例絨毛、蛻膜中ER、PR的表達(dá)分析

研究組絨毛及蛻膜中ER、PR含量明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表3）。

2.4研究組各部位AHR與相關(guān)部位HCG、E2、P、ER、PR的相關(guān)性分析

血清AHR與血清HCG、E2、P無相關(guān)（P>0.05）；絨毛與蛻膜組織中AHR與相應(yīng)部位的ER、PR無相關(guān)（P>0.05）（圖1～圖7）。

3討論

AHR又稱二英受體，是一種以多環(huán)芳香烴類化合物為配體的信使蛋白，在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與基因轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮作用，屬于堿性螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子家族中的bHLH-PAS（periodaryl hydrocarbon receptor nuclear translocator-single minded，Pre-Arnt-Sim）亞家族成員，由805個(gè)氨基酸構(gòu)成，N-端區(qū)域高度保守，C-端區(qū)域保守性低，易活化，需依賴配體激活[9]。其在各種生物體內(nèi)廣泛分布，多種哺乳類動(dòng)物體內(nèi)都含有AHR蛋白，不同物種和不同組織細(xì)胞中AHR含量不同[10]，人體中主要存在于肺、肝、腎、胎盤、扁桃體、B淋巴細(xì)胞等各種組織和細(xì)胞中[2]。AHR參與代謝環(huán)境中的污染物，其在毒理學(xué)研究中的作用被廣為重視，通過與毒性配體結(jié)合，損害生殖系統(tǒng)功能，進(jìn)一步對(duì)胚胎和胎兒產(chǎn)生不良影響[11]。已有不少研究發(fā)現(xiàn)，RSA與機(jī)體免疫異常有關(guān)。有研究者提出AHR可能參與Th17的表達(dá)上調(diào)，干擾Treg/Th17平衡，進(jìn)而在母胎免疫調(diào)節(jié)中起作用，并影響妊娠結(jié)局[12]。也有學(xué)者推測(cè)AHR與滋養(yǎng)細(xì)胞的增值和凋亡密切相關(guān)，很可能介導(dǎo)了滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力的調(diào)節(jié)。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示[13]，AHR功能缺失的小鼠生殖功能受到嚴(yán)重?fù)p害，部分母鼠受精卵不能著床，著床后不能維持正常妊娠等。本研究結(jié)果顯示，RSA患者絨毛及蛻膜組織中AHR的含量明顯高于對(duì)照組，而外周血中無明顯差異，提示局部組織的AHR聚集可能影響胚胎發(fā)育不良，是導(dǎo)致胚胎停育的主要原因。

血HCG是由合體滋養(yǎng)細(xì)胞分泌的一種糖蛋白激素，其作用在于維持早期妊娠黃體的繼續(xù)生長(zhǎng)，刺激黃體產(chǎn)生雌激素，以維持妊娠，直至完全被胎盤取代[14]。妊娠早期，孕酮隨著HCG的升高而升高，且呈正相關(guān)，若系血中孕酮水平低下或下降提示黃體或胎盤功能不足，不能維持繼續(xù)妊娠[15]。孕酮對(duì)孕卵著床建立適宜的子宮內(nèi)膜環(huán)境、早孕階段建立充分恰當(dāng)?shù)拿庖攮h(huán)境發(fā)揮重要作用，上調(diào)人白細(xì)胞抗原G（HLA-G）表達(dá)，維護(hù)母胎免疫平衡[16]。孕激素還可使子宮肌纖維松弛，興奮性降低，同時(shí)降低妊娠子宮對(duì)宮縮素的敏感性，減少子宮收縮，有利于受精卵在子宮內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育[17]?？梢姡屑に貙?duì)于排卵、受精乃至整個(gè)妊娠的維持均起著非常重要的作用，然而其功能的發(fā)揮主要是靠孕激素受體PR來實(shí)現(xiàn)的[18]。E2對(duì)ER起正調(diào)節(jié)作用，P對(duì)PR起負(fù)調(diào)節(jié)作用。PR的合成依賴于ER的合成通路，且E2和P必須在一定的比例范圍內(nèi)存在，才能正確誘導(dǎo)受體的合成，使激素受體的組織學(xué)效應(yīng)達(dá)到最佳狀態(tài)[19]。本研究結(jié)果顯示，血清HCG、E2、P的表達(dá)維持著正常妊娠，任意一者發(fā)生偏離都會(huì)導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生，ER、PR的正常表達(dá)比例也是維持妊娠的重要條件，E2、P通過ER、PR才能發(fā)揮相應(yīng)作用。

本研究中，血清AHR與血清HCG、P、E2無明顯相關(guān)性，絨毛及蛻膜中AHR與ER、PR也無明顯相關(guān)性，提示AHR并不通過ER、PR影響正常妊娠，可能其直接影響妊娠結(jié)局，也可能是通過其他因素間接影響妊娠結(jié)局，就像上述所說通過影響Th17/Treg細(xì)胞的平衡，進(jìn)而影響母胎界面微環(huán)境，導(dǎo)致胎停育。

AHR表達(dá)廣泛，其配體多樣，通過與各種配體的結(jié)合影響著妊娠的結(jié)局，本研究提示AHR局部聚集導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局的發(fā)生，但并非通過雌孕激素、ER、PR實(shí)現(xiàn)，關(guān)于AHR過高導(dǎo)致RSA的機(jī)制，有待進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Abraham sohn PA，Zom TM.Implantation and decidualization in rodents[J].J Exp Zool，1993，266（6）：603-628.

[2]殷櫻，賈功偉.芳香烴受體在細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)中的研究進(jìn)展[J].免疫學(xué)雜志，2012，28（11）：1002-1004.

[3]段毅濤，趙輝，黃鶴.芳香烴受體內(nèi)外源性配體研究進(jìn)展[J].環(huán)境與健康雜志，2013，30（5）：456-459.

[4]Pendergast JS，Yamazaki S.The mammalian circadian system is resistant to dioxin[J].J Biol Rhythms，2012，27（2）：156-163.

[5]Mimura J，Yamashita K，Nakamura K，et al.Loss of teratogenic response to 2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin（TCDD）in mice lacking the Ah（dioxin） receptor[J].Genes Cell，1997，2（10）：645-654.

[6]Lahvis GP，Lindell SL，Thomas RS，et al.Portosystemic shunting and persistent fetal vascular structures in aryl hydrocarbon receptor-deficient mice[J].Proc Natl Acad Sci USA，2000， 97（19）：10442-10447.

[7]Lichtenstein P，Holm NV，Verkasalo PK，et al.Environmental and heritable factors in the causation of cancer-analyses of cohorts of twins from Sweden，Denmark，and Finland[J].N Engl J Med，2000，343（2）：78-85.

[8]Clapp RW，Jacobs MM，Loechler EL.Environmental and occupational causes of cancer：new evidence 2005-2007[J].Rev Environ Health，2008，23（1）：1-37.

[9]馬娓，黃文娟，余靜，等.芳香烴受體調(diào)控調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的研究進(jìn)展[J].中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)，2017，39（1）：114-120.

[10]代彩鳳.Slit/Robo信號(hào)通路和芳香烴受體（AhR）在卵巢腫瘤組織及卵巢癌細(xì)胞系中表達(dá)和意義的實(shí)驗(yàn)研究[D].濟(jì)南：山東大學(xué)，2011.

[11]郝克紅，王凱，周倩，等.芳香烴受體在女性生殖中的作用[J].生殖與避孕，2012，32（12）：844-847，836.

[12]郭紅玲，徐風(fēng)娟，茅彩萍，等.原因不明自然流產(chǎn)中芳香烴受體與Treg/Th17細(xì)胞因子平衡的關(guān)系[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014，24（5）：416-419.

[13]郝克紅，王凱，陳曉，等.芳香烴受體（AhR）內(nèi)源性配體ITE對(duì)胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖抑制作用及其機(jī)制[J].復(fù)旦學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014，41（4）：488-493.

[14]樂杰.婦產(chǎn)科學(xué)[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：34-129.

[15]馬禮明，吳賢.血清孕酮、β-HCG聯(lián)合檢測(cè)在早孕先兆流產(chǎn)治療中的價(jià)值[J].中國(guó)婦幼保健，2007，22（3）：389-390.

[16]趙楊，聞安民，梁潔玲，等.血β-HCG、孕酮、雌二醇和B超檢查預(yù)測(cè)宮內(nèi)妊娠早期陰道流血結(jié)局[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2015，36（1）：108-113.

[17]Johns J，Muttukrishna S，Lygnos M.Maternal serum hormone concentrations for prediction of adverse outcome in threatened miscarriage[J].Reprod Biomed Online，2007，15（4）：413-421.

[18]Aruna M，Nagaraja T，Andal S，et al.Role of progesterone receptor polymorphisms in the recurrent spontaneous abortions：Indian Case[J].PLoS One，2010，5（1）：12.

[19]孫慧清，蓋凌，張立宏，等.重復(fù)性早期流產(chǎn)患者雌、孕激素及其受體研究[J].生殖與避孕，1995，15（3）：180-185.

（收稿日期：2017-12-05 本文編輯：祁海文）