白順星，龔舒靜，楊 姝，秦向東 *，馬胡堅(jiān)，張光東，馬俊花

(1. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院，云南 昆明 650201；2. 云南省高校生物天然氣產(chǎn)業(yè)化技術(shù)工程研究中心，云南 昆明 650201；3. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650201)

【研究意義】能源草作為生物質(zhì)能源開(kāi)發(fā)的原料不僅能利用貧瘠山坡地而且具有成本低、效率高、無(wú)污染的優(yōu)點(diǎn)。狼尾草屬于禾本科，全世界約有140種，廣泛分布于熱帶、 亞熱帶，少數(shù)種類可達(dá)溫帶地區(qū)[1]。其中雜交狼尾草(Pennisetumamericanum×P.purpureum)是由1年生二倍體美洲狼尾草(P.americanum；2n-2x-14，AA)作為母本和多年生四倍體象草(P.purpureum)作為父本遠(yuǎn)緣雜交獲得的三倍體不育雜交種，綜合了母本品質(zhì)優(yōu)和父本產(chǎn)草量高、抗逆性強(qiáng)、可多年生的特性[2-3]。由于它具有的這些特性，近年來(lái)雜交狼尾草作為厭氧發(fā)酵原料的研究日益增多[4-8]。【前人研究進(jìn)展】在厭氧發(fā)酵體系中微量元素對(duì)維持整個(gè)發(fā)酵體系穩(wěn)定、徹底分解發(fā)酵原料有很大的作用，微量元素不僅參與合成體系中的厭氧微生物而且還能激活厭氧體系中各種酶的活性[9-11]。Speece[12]指出由于不同厭氧消化菌的不同種微量元素含量不同，即使是同種產(chǎn)甲烷菌在不同環(huán)境中它所含的微量元素也不盡相同，以Fe、Co、Ni為序，只有當(dāng)前一營(yíng)養(yǎng)元素足夠時(shí)，后面一個(gè)才能對(duì)甲烷菌的生長(zhǎng)起激活作用。此外，由于秸稈類能源作物的木質(zhì)纖維素含量較高，木質(zhì)素，半纖維素和纖維素之間緊密交聯(lián)使纖維素難于降解，嚴(yán)重制約了其厭氧發(fā)酵效率。對(duì)原料進(jìn)行堿預(yù)處理能夠有效提高其產(chǎn)氣效率，但是處理過(guò)的原料還需用酸進(jìn)行中和才能進(jìn)行厭氧發(fā)酵，給原本低成本、低收益沼氣工程增添了設(shè)備和技術(shù)難點(diǎn)[13]。相比較而言，在厭氧消化系統(tǒng)中加入水解酶，不僅操作簡(jiǎn)便，也能有效提高厭氧發(fā)酵的沼氣產(chǎn)量[14]。此外，螯合劑和表面活性劑的添加也有利于厭氧發(fā)酵產(chǎn)沼氣[15-16]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】以上研究都是單一添加劑對(duì)厭氧發(fā)酵的影響，復(fù)合添加劑對(duì)厭氧發(fā)酵的影響研究較少。文章以雜交狼尾草為發(fā)酵原料，外源添加混合的FeCl2、CoCl2、NiCl2、纖維素酶、吐溫20、EDTA-2Na，以累積產(chǎn)氣量和輔酶F420的含量作為指標(biāo)，評(píng)價(jià)組合添加劑作用下厭氧系統(tǒng)產(chǎn)氣潛力?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】以期找到促進(jìn)沼氣產(chǎn)量的各個(gè)添加物的最佳組合方式及組合水平。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

雜交狼尾草：2013年9月采自云南農(nóng)業(yè)大學(xué)后山，為自種雜交狼尾草(Penniseturmamericanum×P.purpureum)的地上部分，陰干后切成2～3 cm段，常溫密封保存?zhèn)溆谩悠房偣绦挝?total solid，TS)含量為88.5 %，揮發(fā)物(volatile solid, VS)含量為80.4 %。

活性污泥：2014年10月采自昆明蒜村生活污水溝，室溫密封保存，用前馴化。其TS含量為14.5 %，VS含量為29.9 %。

儀器：DZKW-S-8型電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)；GT901型甲烷測(cè)定儀(深圳科爾諾電子科技有限公司)；DHG-9053A型真空干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；SX2-2.5-10馬弗爐(上海實(shí)研電爐有限公司)；ISO9001電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)；JS-30A電子計(jì)數(shù)天平(成都普瑞遜電子有限公司)；722型可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海光學(xué)儀器廠)；DFT-100手提式高速中藥粉碎機(jī)(溫嶺市林大機(jī)械有限公司)；自制厭氧發(fā)酵裝置：主要由恒溫水浴鍋、發(fā)酵瓶、集氣瓶、集水瓶組成，裝置之間均采用玻璃導(dǎo)管和橡膠管連接，保證厭氧環(huán)境。

試劑：FeCl2、CoCl2、NiCl2、酵母提取物、纖維素酶(1500 U/g)、吐溫20(0.01 %)、EDTA-2Na、精密pH試紙。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在前期單因素試驗(yàn)[17]及參考相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，選定FeCl2、CoCl2、NiCl2、纖維素酶、吐溫20、EDTA-2Na 6種添加劑，以累積產(chǎn)氣量為考查指標(biāo)，采用L25(56)正交表對(duì)添加劑組合進(jìn)行設(shè)計(jì)。每個(gè)因素各設(shè)置5個(gè)水平，如表1所示。試驗(yàn)共包含25組，每組試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)平行。

1.2.2 厭氧發(fā)酵試驗(yàn) 采取批次進(jìn)料發(fā)酵方法，1 L自制厭氧反應(yīng)器，各組料液質(zhì)量為500 g，TS濃度為6 %，接種率為20 %(按照接種物與雜交狼尾草的VS計(jì)算)，初始pH值7.0，分別加入不同的添加劑組合后，觀測(cè)中溫35 ℃條件下厭氧發(fā)酵35 d的產(chǎn)氣情況。每日固定時(shí)間檢測(cè)日產(chǎn)氣量、料液pH值及甲烷濃度。發(fā)酵結(jié)束后選擇代表性試驗(yàn)組測(cè)定體系輔酶F420含量。

1.2.3 各種指標(biāo)的測(cè)定 含水率和總固體(TS)質(zhì)量分?jǐn)?shù)采用(105±5) ℃下干燥恒重法；揮發(fā)性固體值(VS)采用(550±20) ℃下灼燒恒重法；日產(chǎn)氣量采用排水法測(cè)定；甲烷體積分?jǐn)?shù)采用GT901型甲烷測(cè)定儀測(cè)定；料液pH值用精密pH試紙測(cè)定；單位原料干物質(zhì)產(chǎn)氣量(TS產(chǎn)氣率)、單位原料揮發(fā)性有機(jī)物產(chǎn)氣量(VS產(chǎn)氣率)均通過(guò)公式計(jì)算得出；輔酶F420含量采用紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定。

表1 正交試驗(yàn)因素水平Table 1 Factors and levels of orthogonal test

表2 L25 (56) 試驗(yàn)方案及結(jié)果Table 2 L25(56) orthogonal test design and results

1.2.4 數(shù)據(jù)處理及分析 數(shù)據(jù)處理采用Excel2003進(jìn)行，方差分析采用SPSS18.0完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 組合添加劑對(duì)累積產(chǎn)氣量的影響

組合添加劑作用下的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果如表2所示，其中試驗(yàn)1為空白對(duì)照組，試驗(yàn)2-25為添加劑組。對(duì)正交試驗(yàn)累積產(chǎn)氣量的直接對(duì)比分析顯示，24個(gè)添加劑組中，累積產(chǎn)氣量較空白對(duì)照組高的有22個(gè)組，占添加劑組總數(shù)的91.7 %，產(chǎn)氣量增加介于2.72 %～27.64 %。有7個(gè)組的累積產(chǎn)氣量較對(duì)照組增加20 %以上，有10個(gè)組的產(chǎn)氣增加量介于10 %～20 %，5個(gè)組產(chǎn)氣增加量在10 %以內(nèi)，僅有2個(gè)組的累積產(chǎn)氣量低于對(duì)照組。試驗(yàn)7累積產(chǎn)氣量最多，達(dá)10 170 mL(折合原料TS產(chǎn)氣率619.5 mL/g)，比對(duì)照組增加27.64 %；其次是試驗(yàn)19，產(chǎn)氣9885 mL，比對(duì)照組產(chǎn)氣增加24.06 %。試驗(yàn)9產(chǎn)氣7 543 mL，較對(duì)照組減少5.33 %；試驗(yàn)12產(chǎn)氣7258 mL，較對(duì)照組減少8.91 %。結(jié)果顯示：6種添加劑不同水平的組合對(duì)累積產(chǎn)氣量均能產(chǎn)生較為明顯的影響，整體而言，添加劑的使用有助于提高雜交狼尾草厭氧發(fā)酵產(chǎn)氣量。

直觀分析結(jié)果顯示：纖維素酶這一因素極差最大，為1734.2 mL；FeCl2這一因素極差最小，為155.0 mL，說(shuō)明纖維素酶添加量的變化對(duì)系統(tǒng)產(chǎn)氣量的影響最大，而FeCl2的添加量對(duì)系統(tǒng)產(chǎn)氣量的影響最小。從極差的比較可以看出，各因素影響雜交狼尾草厭氧發(fā)酵產(chǎn)氣量的順序?yàn)槔w維素酶>EDTA-2Na >吐溫20>CoCl2> NiCl2> FeCl2。試驗(yàn)中較優(yōu)添加配方為A2B2C3D4E5F1，而根據(jù)正交試驗(yàn)k值可知，理論優(yōu)化方案為A1B3C2D4E4F1，考慮在甲烷菌所需營(yíng)養(yǎng)元素中，F(xiàn)e元素是排在第一位的金屬元素，F(xiàn)e元素的不足會(huì)抑制其他元素發(fā)揮作用[12]。因此最終確定的優(yōu)化方案為A4B3C2D4E4F1，即FeCl2添加10.0 mg/L、CoCl2添加1.0 mg/L、NiCl2添加1.0 mg/L、纖維素酶添加15 g/L、吐溫20添加250 mg/L、不添加EDTA-2Na。在相同發(fā)酵條件下對(duì)理論優(yōu)化方案進(jìn)行驗(yàn)證，系統(tǒng)累積產(chǎn)氣量平均值達(dá)10 320 mL，較空白對(duì)照組提高29.52 %。

2.2 組合添加劑對(duì)產(chǎn)氣過(guò)程的影響

通過(guò)比較添加劑組與空白對(duì)照組日產(chǎn)氣量變化趨勢(shì)(圖1)，可以發(fā)現(xiàn)，雜交狼尾草厭氧發(fā)酵過(guò)程均顯示有3個(gè)產(chǎn)氣高峰，其中又以第二、三產(chǎn)氣高峰為主，添加劑對(duì)產(chǎn)氣過(guò)程的作用主要體現(xiàn)在對(duì)產(chǎn)氣峰值、產(chǎn)氣高峰出現(xiàn)時(shí)間及延續(xù)時(shí)間的影響上。整體而言，組合添加劑的加入會(huì)使主產(chǎn)氣高峰推遲出現(xiàn)，但能提高產(chǎn)氣高峰值及延續(xù)時(shí)間。其中，對(duì)照組的第二、三產(chǎn)氣高峰分別出現(xiàn)在第14、22天，峰值分別為440 和308 mL，與對(duì)照組相比主要產(chǎn)氣高峰(第二高峰)明顯提前的有2個(gè)試驗(yàn)組(試驗(yàn)7、13)，峰值分別為560 和590 mL。主要產(chǎn)氣高峰延后出現(xiàn)的有13個(gè)試驗(yàn)組，峰值介于340～470 mL。本研究所選添加劑中，能夠使產(chǎn)氣高峰出現(xiàn)時(shí)間提前的有FeCl2、CoCl2、NiCl2，而纖維素酶與吐溫20在添加量較高時(shí)，會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)氣高峰出現(xiàn)時(shí)間延后[16]，EDTA-2Na對(duì)產(chǎn)氣峰值出現(xiàn)時(shí)間的影響尚不明確。

2.3 組合添加劑對(duì)甲烷菌活性的影響

作為產(chǎn)甲烷菌特有的一種與甲烷形成過(guò)程密切聯(lián)系的輔酶，F(xiàn)420可作為氫化酶系統(tǒng)中低電位電子轉(zhuǎn)移的載體，在甲烷的形成過(guò)程中起著重要的作用。輔酶F420在波長(zhǎng)420 nm的紫外光激發(fā)下，能產(chǎn)生自發(fā)藍(lán)綠熒光，該特性可以用來(lái)對(duì)F420進(jìn)行定量分析。由于F420在產(chǎn)甲烷過(guò)程中的重要作用，厭氧處理中經(jīng)常以F420的含量作為判斷產(chǎn)甲烷菌產(chǎn)甲烷活性的標(biāo)準(zhǔn)[18]，輔酶F420含量越高，指示甲烷菌產(chǎn)甲烷活性越大。

圖1 各試驗(yàn)組日產(chǎn)氣量隨時(shí)間變化Fig.1 Tendency of daily gas production of experimental groups

圖2 累積產(chǎn)氣量與輔酶F420含量關(guān)系Fig.2 Relational graph between accumulated gas production and concentration of coenzyme F420

本研究選取了正交試驗(yàn)中累積產(chǎn)氣量最高的2組(試驗(yàn)7、19)、居中的2組(試驗(yàn)5、25)、最低的2組(試驗(yàn)9、12)以及對(duì)照組(試驗(yàn)1)進(jìn)行輔酶F420含量的測(cè)定，每組平行測(cè)定3次，結(jié)果(圖2)顯示：沼氣產(chǎn)量越高的試驗(yàn)組其輔酶F420的含量也越多，其中產(chǎn)氣量最高的試驗(yàn)組(試驗(yàn)7)中輔酶F420含量達(dá)10.97 μmol/L，較對(duì)照組提高43.6 %。累積產(chǎn)氣量的變化趨勢(shì)與厭氧系統(tǒng)中輔酶F420含量的變化趨勢(shì)基本一致，說(shuō)明外源添加劑的加入能夠?qū)淄榫钚孕纬捎绊懀M(jìn)而對(duì)厭氧發(fā)酵的產(chǎn)氣效率形成影響。整體而言，組合添加劑對(duì)提高甲烷菌活性有明顯的促進(jìn)作用。

對(duì)厭氧系統(tǒng)輔酶F420含量和累積產(chǎn)氣量進(jìn)行相關(guān)性分析，兩者之間的Pearson相關(guān)系數(shù)達(dá)0.917，觀測(cè)到的顯著性水平小于0.001，低于理論顯著性水平0.01，說(shuō)明輔酶F420含量和累積產(chǎn)氣量存在極顯著正相關(guān)。兩者關(guān)系的擬合曲線見(jiàn)圖3，擬合方程為：y=15.611x3-564.14x2+7137.3x-20 802，R2=0.8726。

2.4 組合添加劑中各因素對(duì)厭氧發(fā)酵的影響

正交試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見(jiàn)表3，各因素的因素效應(yīng)見(jiàn)圖4。

2.4.1 FeCl2對(duì)產(chǎn)氣量的影響 研究[19]顯示Fe2+對(duì)太湖藍(lán)藻厭氧消化過(guò)程中相關(guān)酶活性存在影響，能夠進(jìn)一步提高其厭氧產(chǎn)甲烷的能力。由方差分析結(jié)果可知，F(xiàn)eCl2對(duì)累積產(chǎn)氣量的影響不顯著(P>0.05)。FeCl2的因素變化效應(yīng)曲線同樣顯示：整體而言，組合添加模式下的FeCl2，其添加量上的變化對(duì)雜交狼尾草厭氧系統(tǒng)產(chǎn)氣量影響較小。當(dāng)添加量為0.0、2.5、5.0、10.0、15.0 mg/L時(shí)，其累積產(chǎn)氣量均值分別為9035、8880、8896、9000、9014 mL，在2.5～15.0 mg/L內(nèi)添加量與產(chǎn)氣量呈現(xiàn)弱的正相關(guān)。

圖3 累積產(chǎn)氣量與輔酶F420含量間的擬合曲線Fig.3 Fitted curve between accumulated gas production and concentration of coenzyme F420

2.4.2 CoCl2對(duì)產(chǎn)氣量的影響 適量添加CoCl2除了能夠提升系統(tǒng)產(chǎn)氣量，還能提高系統(tǒng)穩(wěn)定性[17,20]。方差分析顯示，CoCl2對(duì)累積產(chǎn)氣量的影響為極顯著(P<0.01)。當(dāng)CoCl2添加量為0.0、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/L時(shí)，其累積產(chǎn)氣量均值分別為8656、8943、9206、9140、8879 mL。在0.0～1.0 mg/L內(nèi)添加量與產(chǎn)氣量呈現(xiàn)明顯正相關(guān)，添加濃度超過(guò)1.0 mg/L產(chǎn)氣量隨CoCl2添加量的增加而逐漸下降。

2.4.3 NiCl2對(duì)產(chǎn)氣量的影響 添加NiCl2有縮短系統(tǒng)產(chǎn)氣時(shí)間、提高系統(tǒng)產(chǎn)氣穩(wěn)定性的作用[17,20]。方差分析顯示，NiCl2對(duì)累積產(chǎn)氣量的影響不顯著(P>0.05)。當(dāng)NiCl2添加量為0.0、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/L時(shí)，其累積產(chǎn)氣量均值分別為8949、9092、9062、8839、8883 mL。在0.0～1.0 mg/L內(nèi)，添加量與產(chǎn)氣量呈現(xiàn)正相關(guān)，添加濃度超過(guò)1.0 mg/L產(chǎn)氣量隨NiCl2添加量的增加而逐漸下降。

表3 正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果Table 3 Variation analysis for orthogonal test

2.4.4 纖維素酶對(duì)產(chǎn)氣量的影響 纖維素酶能有效分解原料中的纖維素，促使厭氧體系快速啟動(dòng)，有利于提高原料轉(zhuǎn)化率。方差分析顯示，纖維素酶對(duì)累積產(chǎn)氣量的影響為極顯著(P<0.001)。當(dāng)纖維素酶添加量為0.0、5.0、10.0、15.0、20.0 g/L時(shí)，其累積產(chǎn)氣量均值分別為7787、8894、9062、9612、9279 mL。在0.0～15.0 g/L內(nèi)，添加量與產(chǎn)氣量呈現(xiàn)正相關(guān)，當(dāng)添加濃度超過(guò)20.0 g/L時(shí)產(chǎn)氣量開(kāi)始下降。

2.4.5 吐溫20對(duì)產(chǎn)氣量的影響 有研究[16]表明吐溫20的加入有助于改善微生物細(xì)胞的通透性和金屬離子生物利用的有效性，從而可以改善金屬離子生物利用效率。方差分析顯示，吐溫20對(duì)累積產(chǎn)氣量的影響為極顯著(P<0.001)。當(dāng)吐溫20添加量為0.0、62.5、125.0、250.0、500.0 mg/L時(shí)，其累積產(chǎn)氣量均值分別為8943、8605、8866、9245、9166 mL。在62.5～250.0 mg/L內(nèi)添加量與產(chǎn)氣量呈現(xiàn)正相關(guān)；添加濃度超過(guò)250.0 mg/L產(chǎn)氣量變化不大。

2.4.6 EDTA-2Na對(duì)產(chǎn)氣量的影響 研究[21]表明，加入金屬添加劑的同時(shí)加入螯合劑能夠防止金屬離子水解或轉(zhuǎn)化為硫化物，有助于維持金屬離子的有效濃度，從而促進(jìn)厭氧發(fā)酵的進(jìn)行。方差分析顯示，EDTA-2Na對(duì)累積產(chǎn)氣量的影響為極顯著(P<0.001)。當(dāng)EDTA-2Na添加量為0.0、0.93、1.86、3.72、7.44 g/L時(shí)，其累積產(chǎn)氣量均值分別為9333、9193、8983、8654、8661 mL，在0.0～3.72 g/L內(nèi)添加量與產(chǎn)氣量呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，添加濃度超過(guò)3.72 g/L產(chǎn)氣量變化不大。本試驗(yàn)添加EDTA-2Na呈現(xiàn)明顯的抑制作用，可能是因?yàn)闈舛冗^(guò)高，過(guò)量的EDTA-2Na結(jié)合微生物細(xì)胞膜表面上的金屬離子，造成菌體死亡進(jìn)而使厭氧發(fā)酵產(chǎn)氣量減少[22]，其添加濃度有待進(jìn)一步優(yōu)化。

3 討 論

添加劑的應(yīng)用已經(jīng)成為改善厭氧系統(tǒng)產(chǎn)氣效率的重要手段，向沼氣發(fā)酵液中添加適量的金屬離子、酶、代謝促進(jìn)物、吸附劑、螯合劑等均能在一定程度上起到提高沼氣產(chǎn)量的作用[16]。不同種類添加劑之間在作用原理及呈現(xiàn)效果上存在很大的差異性。金屬離子能夠滿足甲烷菌生長(zhǎng)對(duì)無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)元素的需要，進(jìn)而有效改善厭氧消化的效率、產(chǎn)氣量和甲烷含量，抑制酸積累[23]。酶作為一種高活性生物催化劑，能夠提高物料中纖維素類成分的降解速度，提高物料轉(zhuǎn)化效率，進(jìn)而影響整個(gè)厭氧發(fā)酵過(guò)程。表面活性劑可以改善生物細(xì)胞通透性，雖然單獨(dú)添加表面活性劑并不能提高原料利用率，但有可能通過(guò)增加單位質(zhì)量底物產(chǎn)氣效率的方式，最終引起產(chǎn)氣量的增加[16]。在有機(jī)物厭氧消化過(guò)程的3個(gè)階段中，系統(tǒng)酸化是厭氧消化系統(tǒng)中需要解決的關(guān)鍵抑制因素之一，螯合劑的加入可以提高系統(tǒng)有機(jī)酸的利用或消耗速度，控制酸化程度及其不利影響[24]。吸附劑類添加劑則是通過(guò)加速發(fā)酵基質(zhì)在其吸附點(diǎn)的積累，從而為微生物提供有利的生長(zhǎng)環(huán)境。

相對(duì)于單一添加劑而言，多種成分構(gòu)成的組合添加劑在提高厭氧體系產(chǎn)氣量、穩(wěn)定產(chǎn)氣過(guò)程、提高甲烷菌活性等方面的應(yīng)用效果更為突出。研究顯示，金屬離子-金屬離子[23]、金屬離子-螯合劑[21, 24]、金屬離子-表面活性劑[16]、尿素-吸附劑[25]等多種類型的組合添加劑均能夠呈現(xiàn)更好的促產(chǎn)氣效果。不同組分的存在能夠滿足厭氧系統(tǒng)持續(xù)運(yùn)行的不同要求，同時(shí)各組分間的協(xié)同效應(yīng)又使其效果得到進(jìn)一步加強(qiáng)。充分利用好這種協(xié)同作用，對(duì)不同類型添加劑進(jìn)行優(yōu)化組合，有助于提高各個(gè)階段的處理效率，并最大程度地提高沼氣產(chǎn)氣量。但是當(dāng)前對(duì)沼氣發(fā)酵外源添加物的研究主要集中在不同添加物的促氣效果等方面，關(guān)于協(xié)同作用機(jī)理的研究仍需深入開(kāi)展[26]。

添加劑組合方式不同促產(chǎn)氣效果差異明顯，說(shuō)明不同添加劑間可能存在協(xié)同效應(yīng)。本研究確定的較優(yōu)方案為：FeCl210.0 mg/L、CoCl21.0 mg/L、NiCl21.0 mg/L、纖維素酶15 g/L、吐溫20 250 mg/L、不添加EDTA-2Na，該條件下雜交狼尾草厭氧發(fā)酵累積產(chǎn)氣量較對(duì)照組提高了29.53 %。

4 結(jié) 論

向產(chǎn)沼氣系統(tǒng)中加入外源添加物，通過(guò)不同類型外源添加物的優(yōu)化組合，發(fā)揮協(xié)同作用，可以提高厭氧菌活性，改善厭氧發(fā)酵各階段的作用效率，從而提高沼氣產(chǎn)量。

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