孫冰雪，牟鳳輝，王睿，王艷

（吉林大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春 130021）

前列欣膠囊是一種對(duì)前列腺增生具有良好治療作用的顆粒劑，對(duì)前列腺增生引起的排尿不暢等病癥具有明確的療效[1，2]。本研究首次將前列欣膠囊進(jìn)行劑型的改革創(chuàng)新，將膠囊劑轉(zhuǎn)劑型為濃縮丸劑。濃縮丸劑具有很多其他劑型無(wú)法取代的優(yōu)勢(shì)，包括比表面積小、容易被吸收、經(jīng)濃縮后單丸藥物濃度高、口服給藥病人順應(yīng)性高等[3]。

本研究中用到的前列欣濃縮丸是將國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編收載的前列欣膠囊〔WS3-048（Z-013）-98（Z）〕經(jīng)劑型改革制成的新藥[4]。經(jīng)過(guò)劑型改變后明顯改善了藥物穩(wěn)定性差、吸收利用度低等缺點(diǎn)。前列欣濃縮丸中的主治成分為芍藥苷。目前，未見(jiàn)有關(guān)前列欣濃縮丸含量測(cè)定的研究報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)HPLC法對(duì)前列欣濃縮丸中芍藥苷的含量進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析討論，為前列欣濃縮丸的生產(chǎn)研發(fā)提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AT高效液相色譜儀、SPD-10Avp紫外可見(jiàn)檢測(cè)器（日本島津公司）；日立U-3400型分光光度計(jì)（日立新技術(shù)公司）；XS105分析天平（1/100 000，梅特勒托利多儀器有限公司)；XSP-2CA雙目光學(xué)顯微鏡（上海光學(xué)儀器廠）；HWS24型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科技有限公司）

1.2 試藥

前列欣濃縮丸：0.2g/丸，包含桃仁（炒）、沒(méi)藥（炒）、丹參、赤芍、紅花、澤蘭、王不留行（炒）、皂角刺、敗醬草、蒲公英、川楝子、白芷、石葦、枸杞子，吉林大學(xué)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)中心自制。

芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：0736-200014，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；乙腈（色譜純，批號(hào)：013110532，美國(guó)J.T.Baker公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

2.1.1 對(duì)照品溶液 稱(chēng)量芍藥苷對(duì)照品（2.00±0.03）mg，將稱(chēng)取的芍藥苷粉末用甲醇-水（v∶v=50∶50）作為溶劑于25mL容量瓶中將其稀釋定容。

2.1.2 供試品溶液 稱(chēng)量約0.4g濃縮丸研細(xì)粉，傾倒于 50mL容量瓶中，加入水-鹽酸（v∶v=40∶1），超聲30min，冷卻，定容，放置10min后，移取上層液體10mL，CHCl3萃取2次，將2次得到的萃取液合并，定容于10mL容量瓶，備用。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液 依照芍藥苷濃縮丸的制法，制備僅不含芍藥苷的濃縮丸，并按“2.1.2”項(xiàng)下處理方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：GL-WondasilC1（84.6 150mm，5m）；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸溶液（v∶v=14∶86）；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；柱溫箱溫度：40℃；進(jìn)樣量：10L；流速：1mL/min[5]。

2.3 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

將對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液按照“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行分析，對(duì)處理后的色譜圖進(jìn)行整理。通過(guò)色譜圖可知，前列欣濃縮丸中其他成分對(duì)芍藥苷的檢測(cè)沒(méi)有干擾，分析方法專(zhuān)屬性好，芍藥苷特征的出峰時(shí)間是10.367min。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram

2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察

吸取“2.1.1”項(xiàng)下配置好的對(duì)照品溶液0.1mL～1.3mL（每間隔0.2mL為1組，共7組），分別置2mL容量瓶中，加甲醇-水（v∶v，50∶50）溶液分別進(jìn)行定容。分別吸取上述溶液各10L（濃度由低到高），按“2.2”項(xiàng)下設(shè)定的條件進(jìn)行檢測(cè)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得線(xiàn)性回歸方程為Y=24 558+1 585 535X，r=0.999 7，芍藥苷在0.054g～0.702g范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

吸取任意一個(gè)濃度的對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10L，進(jìn)行HPLC分析，連續(xù)進(jìn)樣分析5次，記錄色譜圖，對(duì)芍藥苷的特征色譜峰進(jìn)行積分，記錄峰面積的積分值[5]。5次進(jìn)樣分析得到的RSD值為0.037%（n=5），表明方法精密度較好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取供試品和對(duì)照品溶液各取10L進(jìn)行穩(wěn)定性檢測(cè)，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件，對(duì)上述溶液在配制后0h、1h、2h、4h、6h 含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果 RSD 為 1.85%（n=5），表明6h內(nèi)待測(cè)樣品穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

同一批次的自制前列欣濃縮丸6份，制備待檢測(cè)液，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，RSD為2.44%，＜3%（n=6），說(shuō)明測(cè)定方法重復(fù)性好。

2.8 回收率實(shí)驗(yàn)

稱(chēng)取已知明確含量的自制前列欣濃縮丸研細(xì)粉6份，將1.48mg/mL芍藥苷對(duì)照品溶液1mL分別加入到上述研細(xì)粉中，將6份樣品按“2.1.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行同一處理，依照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析測(cè)定，利用得到的特征峰面積計(jì)算回收率，回收率平均為99.8%、RSD值為2.56%（n=6），表明該方法回收率良好。

2.9 3批次樣品含量測(cè)定

分別取3批次的樣品（批號(hào)：170611、170612、170613），按“2.1.2”項(xiàng)下方法配制成待測(cè)樣品溶液。按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件分析測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果Table 1 Sample contentdetermination results （%，n=3）

3 討論

3.1 波長(zhǎng)的選擇

稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品，分別用乙腈-水（v∶v=50∶50）和甲醇-水（v∶v=50∶50）作為溶劑，制成0.02mg/mL的溶液，待測(cè)。分別取供試品溶液置石英比色皿中，以甲醇為參比，掃描并記錄芍藥苷在190nm～400nm范圍內(nèi)的吸光度值，繪制吸收曲線(xiàn)，結(jié)果表明，芍藥苷在2種溶液中都是在230nm處吸光度值最大，于是將230nm作為本研究中芍藥苷的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 樣品處理方法的選擇

方法 1：稱(chēng)取研細(xì)粉，加水-濃鹽酸（v∶v=40∶1）40mL，超聲處理，放冷，定容，搖勻，靜置，取上清，用CHCl3萃取2次，量取10mL，取水層2次，合并于10mL容量瓶中，定容。

方法2：稱(chēng)取研細(xì)粉，加入40mL純甲醇，超聲處理，放冷，加甲醇定容，搖勻，靜置，取上清液，蒸干，殘?jiān)铀?mL溶解，用CHCl3萃取2次，每次10mL，取水層2次，合并于10mL容量瓶中，定容。

方法3：稱(chēng)取研細(xì)粉，加水飽和正丁醇40mL，超聲處理，冷卻，加水飽和正丁醇定容，搖勻，靜置，揮發(fā)干上清液，剩余底層加入8mL水將其溶解，用CHCl3萃取2次，每次10mL，取水層2次，合并于10mL量瓶中，定容。

分別量取上述3種方法處理得到的待測(cè)樣品溶液10L，進(jìn)行HPLC測(cè)定，得到色譜圖，分析色譜圖發(fā)現(xiàn)，方法1處理得到的待測(cè)樣品的分離分析效果較其他2種方法好，且積分得到的峰面積積分值最高，故選定該法為前列欣濃縮丸的樣品處理方法。

3.3 流動(dòng)相的選擇

前列欣濃縮丸為復(fù)方制劑，干擾成分眾多，流動(dòng)相的選擇很重要。結(jié)合中國(guó)藥典2015年版（一部）和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[6～9]，選用甲醇-水和乙腈-水2種流動(dòng)相體系進(jìn)行分析時(shí)，樣品中芍藥苷均能與其他雜質(zhì)峰完全分離，但是，經(jīng)實(shí)驗(yàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，以乙腈-0.2%磷酸溶液（v∶v，14∶86）流動(dòng)相時(shí)，能夠達(dá)到基線(xiàn)分離，峰型好，確定該流動(dòng)相作為芍藥苷HPLC含量測(cè)定的流動(dòng)相。

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