劉　冬，王　晶，胡　翠，梅　俏，許建明

炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)是一種病因尚不十分清楚的慢性腸道炎癥性疾病，包括克羅恩病(Crohn’s disease，CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)，有慢性和反復(fù)發(fā)作的臨床特點(diǎn)，主要依靠臨床表現(xiàn)、內(nèi)鏡和病理組織學(xué)診斷[1]。最直接的診斷和評(píng)估方法是內(nèi)鏡表現(xiàn)以及組織活檢病理檢查，胃腸鏡檢查常給患者帶來不同程度的痛苦，具有一定侵入性，影響患者的依從性和檢測頻率。相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查如血沉(erythrocyte sedimentation rate ,ESR)、C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein ,CRP)等炎性指標(biāo)雖可反映疾病的活動(dòng)性，但不是特異性指標(biāo)[2]，易受多種因素干擾，影響其在IBD診斷和病情評(píng)估中的的作用。因此，尋找反映IBD病情評(píng)估敏感、方便的生物標(biāo)志物是目前IBD研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。

研究表明IBD患者的腸道炎癥反應(yīng)中，腸道組織中巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯增加[3]，并參與IBD的病理生理過程， 在腸道巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物中，CD163作為巨噬細(xì)胞系-血紅蛋白-珠蛋白清道夫受體，是巨噬細(xì)胞活化的特殊標(biāo)記[4]。CD163被釋放進(jìn)循環(huán)的形式為可溶性CD163(soluble CD163，sCD163)，可從尿中排出，同時(shí)研究[5]表明尿液中sCD163濃度與巨噬細(xì)胞的活化功能和水平密切相關(guān)。巨噬細(xì)胞是作為體內(nèi)重要的吞噬和抗原呈遞細(xì)胞，對(duì)于維持腸道穩(wěn)態(tài)具有重要意義[6]。IBD患者體內(nèi)巨噬細(xì)胞功能常有不同程度改變[7]。該研究擬通過檢測IBD患者尿液中sCD163水平的改變，探討尿液中sCD163在IBD臨床評(píng)估中的意義。

1　材料與方法

1.2尿液標(biāo)本收集方法分別采集對(duì)照組和IBD患者入院后24 h內(nèi)晨尿標(biāo)本，加入防腐劑二甲苯，混合后離心抽取5 ml于-80 ℃保存待測。

1.3檢測方法采用ELISA方法測定尿液sCD163水平。CD163 ELISA試劑盒購自美國R&D公司，采用美國Bio-Rad公司MD550酶標(biāo)儀檢測吸光度值，按照試劑盒說明書操作，使用標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算sCD163的表達(dá)水平。

2　結(jié)果

2.1IBD患者與對(duì)照組尿中sCD163水平的比較對(duì)照組尿液sCD163水平為(0.06±0.03)μg/ml，IBD組患者尿液sCD163水平為(0.26±0.013)μg/ml，CD組患者尿液sCD163水平為(0.57±0.24)μg/ml，UC組患者尿液sCD163水平為(0.06±0.03)μg/ml，分別與對(duì)照組尿液sCD163水平比較，均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2IBD患者尿液中sCD163水平與臨床特征的關(guān)聯(lián)分析

2.2.1UC患者尿液中sCD163水平與臨床特征的關(guān)聯(lián)分析UC患者緩解期尿液sCD163水平為(0.36±0.15)μg/ml，活動(dòng)期輕度患者尿液sCD163水平為(0.24±0.08)μg/ml，中度患者尿液sCD163水平為(0.38±0.09)μg/ml，重度患者尿液sCD163水平為(0.54±0.05)μg /ml，均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但各組間未見明顯差異(F=3.68,P=0.156)；按UC病變范圍分析，E1型UC患者尿液sCD163水平為(0.35±0.13)μg/ml、E2型UC患者尿液sCD163水平為(0.36±0.13)μg/ml、E3型UC患者尿液sCD163水平為(0.32±0.15)μg/ml，均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但各組間未見明顯差異(F=4.73,P=0.189)。

2.2.2CD患者尿液中sCD163水平與臨床特征的關(guān)聯(lián)分析CD患者緩解期尿液sCD163水平為(0.28±0.13)μg/ml，活動(dòng)期輕度患者尿液sCD163水平為(0.26±0.12)μg/ml，中度患者尿液sCD163水平為(0.30±0.12)μg/ml，重度患者尿液中sCD163水平為(0.34±0.06)μg/ml，均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但各組間未見明顯差異(F=4.12，P=0.167)。按CD病變部位分析，L1型CD患者尿液sCD163水平為(0.28±0.14)μg/ml、L2型CD患者尿液sCD163水平為(0.26±0.12)μg/ml，L3型UC患者尿液sCD163水平為(0.24±0.14)μg/ml，均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但各組間未見明顯差異(F=4.24,P=0.085)。按CD疾病行為分析，B1型CD患者尿液sCD163水平為(0.22±0.12)μg/ml，B2型CD患者尿液sCD163水平為(0.35±0.13)μg/ml，B3型UC患者尿液sCD163水平為(0.22±0.13)μg/ml，均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.85,P=0.007)。

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2.3IBD患者尿液中sCD163水平與血CRP、ESR水平及Mayo評(píng)分相關(guān)分析CD患者尿液sCD163水平與CRP及CDA評(píng)分顯著相關(guān)(P<0.05)；UC患者尿液sCD163水平與ESR、CRP及Mayo評(píng)分相關(guān)性不顯著。見表1。

表1　IBD患者尿液中sCD163與血CRP、ESR及CDAI/Mayo評(píng)分的關(guān)聯(lián)分析

表2　IBD患者治療前后尿中sCD163水平改變的比較

3　討論

研究[9]表明巨噬細(xì)胞在IBD病理生理機(jī)制中具有重要作用，腸道巨噬細(xì)胞接觸大量細(xì)菌和抗原，作為機(jī)體免疫防御的重要屏障。病原體激活黏膜巨噬細(xì)胞產(chǎn)生促炎因子或趨化因子，釋放白介素1、白介素6、白介素18、轉(zhuǎn)化生長因子-β、腫瘤壞死因子-α等細(xì)胞因子，損傷腸黏膜屏障，促進(jìn)IBD的發(fā)生發(fā)展[9]。巨噬細(xì)胞分為M1型亞群和M2型亞群，兩種細(xì)胞分別具有促炎和抗炎作用。CD163分子量為130 ku，在M2型巨噬細(xì)胞表面特異性表達(dá)[10]，為巨噬細(xì)胞活化的標(biāo)志物。因具有可溶性可存在于血漿內(nèi)的CD163稱為sCDl63。sCDl63包含CD163大部分胞外區(qū)域，與CD163具有相同的抗炎作用。在正常人的外周血中sCD163表達(dá)水平較低，sCD163表達(dá)與膜CD163表達(dá)成反比，在炎癥信號(hào)的刺激下，膜CD163脫落成為sCD163，sCD163表達(dá)水平迅速升高，膜表面CD163表達(dá)降低[11]，研究[11]表明，CD163及sCD163水平與炎癥性疾病密切相關(guān)。

sCD163水平對(duì)于IBD的評(píng)估具有重要意義。本研究表明，IBD患者的血液中CD163水平升高，局部腸道黏膜CD163表達(dá)明顯高于對(duì)照組，但在UC及CD患者中無明顯區(qū)別，因此，CD163在IBD患者腸道黏膜炎癥過程中具有重要作用[12]。由于sCD163具有可溶性，存在于機(jī)體體液中，相比之下尿液更易獲得，且完全無創(chuàng)并可以連續(xù)性收集，受體內(nèi)不穩(wěn)定因素干擾較小，尿液檢測更為簡便，容易為患者接受。另一方面由于腎小管的天然屏障，尿液中蛋白質(zhì)組成復(fù)雜度降低，更容易觀察某些低豐度蛋白的變化[13]。目前評(píng)估IBD疾病活動(dòng)的方法主要包括ESR、CRP等炎癥指標(biāo)以及腸鏡檢查[14]，ESR、CRP等炎癥指標(biāo)存在靈敏度不足，特異性較差等缺點(diǎn)，腸鏡檢查等是侵入性檢查方法，患者依從性較低，不利于常規(guī)監(jiān)測。本研究表明，IBD組及CD、UC亞組患者尿液sCD163水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；由于患者組與對(duì)照組差異達(dá)4～8倍，具有一定的診斷價(jià)值。在臨床關(guān)聯(lián)分析中，尿液sCD163水平與CD組患者有明顯相關(guān)性，特別是與CRP、是否活動(dòng)期顯著相關(guān)，而在UC組中相關(guān)性不明顯，提示其CD發(fā)病機(jī)制及疾病進(jìn)展有一定關(guān)系，并有一定的鑒別價(jià)值，IBD組及UC、CD亞組治療前后對(duì)比，尿中sCD163水平均有所降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示其對(duì)于療效預(yù)測有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值；尿液中炎癥標(biāo)志物檢測可成為一種簡單、易行的評(píng)估IBD疾病活動(dòng)的監(jiān)測方式，有助于調(diào)整IBD治療方案和判定療效，且尿液檢留取方便，患者依從性較好，因此監(jiān)測尿sCD163水平，在IBD病情評(píng)估和療效觀察中具有一定的臨床意義，由于本研究樣本量有限，尿sCD163水平在IBD中的臨床意義需要擴(kuò)大樣本量的臨床研究證實(shí)。

參考文獻(xiàn)