趙宏峰 劉新瑞

（吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長春 130012）

益腎降濁膠囊為吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院應(yīng)用多年的醫(yī)院內(nèi)部制劑，批準(zhǔn)文號為吉藥制字Z20130290。益腎降濁膠囊全方由熟地、杜仲、淫羊藿、補(bǔ)骨脂等十二味中藥組成，具有健脾補(bǔ)腎，降逆清濁的功效，適用于慢性腎功能衰竭（脾腎氣虛證），證見：倦怠乏力，食少納呆，腰酸膝軟，惡心嘔吐，脘腹脹滿，便溏，口中黏膩，舌苔黃膩，脈沉細(xì)等。益腎降濁膠囊原標(biāo)準(zhǔn)中僅規(guī)定了藥物的定性鑒別方法，無含量測定項(xiàng)。原有標(biāo)準(zhǔn)已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)有國家法規(guī)及廣大病患對中成藥質(zhì)量可控性和應(yīng)用安全性的要求。本文建立了益腎降濁膠囊中主要藥物淫羊藿所含淫羊藿苷的含量測定方法，采用高效液相法測定，并規(guī)定了制劑中淫羊藿苷的含量限度，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法及數(shù)據(jù)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

日本島津LC-10ATVP高效液相色譜儀；日本島津SPD-10AVP紫外檢測器；7725i手動(dòng)進(jìn)樣器；美國科學(xué)系統(tǒng)公司SS420X型色譜工作站；日本島津AUW120D電子分析天平（十萬分之一）。

益腎降濁膠囊（批號：150601，150602，150603），由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室提供。淫羊藿苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110737-201516，供含量測定用）。甲醇，乙腈均為色譜純，美國Fisher公司出品，水為蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：WondaCract ODS-2色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈-水（30∶70）；流速1.0 mL/min；檢測波長270 nm；柱溫35 ℃。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。

2.2 對照品溶液的制備：淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含淫羊藿苷對照品0.1 mg的溶液，0.45 μm濾膜濾過，即得。

2.3 供試品溶液的制備：取本品20粒，傾出內(nèi)容物，混勻，取1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率150 W，頻率20 kHz）30 min，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，上清液用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得。

2.4 線性關(guān)系考察：分別精密吸取淫羊藿苷對照品溶液4、7、10、13、19 μL注入液相色譜儀，測定，以對照品峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，淫羊藿苷在0.428～1.712 μg范圍內(nèi)，峰面積與淫羊藿苷量呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為 Y=-48597.070+1102665.498X，相關(guān)系數(shù)r=0.9996。

2.5 精密度試驗(yàn)：精密吸取供試品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法檢測，結(jié)果淫羊藿苷峰面積的RSD值為1.96%，表明儀器系統(tǒng)精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液10 μl，分別于放置0、3、6、9、12、15 h時(shí)進(jìn)樣，依法檢測，結(jié)果淫羊藿苷峰面積的RSD值為2.33%，表明供試品溶液在15 h內(nèi)能保持良好的穩(wěn)定性。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批次的益腎降濁膠囊（批號：150601）樣品，制備6份供試品溶液，分別測定，計(jì)算淫羊藿苷含量，結(jié)果平均含量為0.73 mg/g，RSD值為0.76%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)：取同一批次的益腎降濁膠囊（批號：150601；淫羊藿苷含量為0.73 mg/g）樣品0.5 g，共計(jì)6份，精密稱定，分別精密加入淫羊藿苷對照品溶液（3.69 mg/mL）1.0 mL，依法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果表明，平均回收率為96.5%，RSD值為0.93%，測定結(jié)果見表1。

2.9 陰性試驗(yàn)：取除去“淫羊藿”的處方，按完全相同的制備方法制備成陰性樣品溶液，依法測定。結(jié)果色譜圖中，在淫羊藿苷對照品保留時(shí)間處無任何色譜峰，表明陰性對照無干擾。

2.10 樣品含量測定及含量限度的確定：按含量測定項(xiàng)下方法，測定了10批“益血合劑（無糖型）”中2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，結(jié)果見表2。

根據(jù)上述測定結(jié)果，10批益腎降濁膠囊中淫羊藿苷的平均含量為0.22毫克/粒，且均高于0.19毫克/粒。為有效保證制劑質(zhì)量，同時(shí)考慮原料藥材產(chǎn)地、加工及生產(chǎn)等因素的影響，限定本品每粒含淫羊藿以淫羊藿苷（C33H40O15）計(jì)，不得少于0.19 mg。

表1 淫羊藿苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討 論

實(shí)驗(yàn)中采用分光光度法[1-3]，取淫羊藿苷對照品溶液（0.1 mg/mL）適量，以溶劑為空白，在200～400 nm波長范圍內(nèi)繪制吸收曲線，結(jié)果淫羊藿苷在270 nm處有最大吸收，故確定本實(shí)驗(yàn)的檢測波長為270 nm。

綜上，本實(shí)驗(yàn)建立了益腎降濁膠囊中淫羊藿苷的含量測定方法，作為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的定量控制指標(biāo)，新標(biāo)準(zhǔn)更嚴(yán)格，更規(guī)范，增強(qiáng)了成品制劑的可控性，也進(jìn)一步保證了臨床用藥的安全和有效。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典:2010年版一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社, 2010.

[2] 陳發(fā)奎.常用中草藥有效成分含量測定[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1997.

[3] 苗明三.現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000.