仲利靜，張蕾萍，蔣雪梅，馬紀(jì)強(qiáng)，盧 亮，喬 婷，宋朝錦，張大明

（1.公安部物證鑒定中心，北京 100038；2.北京市公安司法鑒定中心，北京100085）

甲基苯丙胺（Methamphetamine，甲基安非他明，俗稱“冰毒”）具有典型的精神興奮作用，長(zhǎng)期或大量服用會(huì)產(chǎn)生耐受性及軀體依賴。其原體及代謝物主要由尿液排出體外，通過檢測(cè)尿液中的甲基苯丙胺及其代謝物可以認(rèn)定吸毒者。服用者唾液中也含有此類物質(zhì)，毒品原體比代謝物具有親脂性，更易通過脂肪膜屏障進(jìn)入唾液，唾液中毒品檢測(cè)的目標(biāo)物主要是毒品原體[1-2]，因此相對(duì)于尿液而言，唾液能存留游離態(tài)的藥物成分，更具備分析藥物的理想條件，在公安執(zhí)法實(shí)踐中，唾液檢測(cè)能反映血藥濃度[3-4]。近年來，隨著“毒駕入刑”等法律法規(guī)的提出，唾液在吸毒者初篩中的作用越來越大。本文對(duì)市場(chǎng)上甲基苯丙胺膠體金9種型號(hào)尿液試劑條和4種型號(hào)唾液試劑條交叉反應(yīng)、閾值、實(shí)際應(yīng)用等情況進(jìn)行了考察，對(duì)影響產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵性指標(biāo)進(jìn)行了分析。本文旨在通過比較唾液和尿液試劑條實(shí)際使用過程中的優(yōu)劣，為整個(gè)行業(yè)甲基苯丙胺試劑條質(zhì)量控制提供參考，為公安機(jī)關(guān)甲基苯丙胺初篩提供建議。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)條件

1.1.1 試劑

毒品對(duì)照品全部由公安部物證鑒定中心提供。標(biāo)樣、載液全部為色譜純。

1.1.2 儀器

LC-MS，型號(hào)：島津/AB LC-30A/QTRAP5500。

1.1.3 樣品

由公安部門送檢，被確認(rèn)吸食過甲基苯丙胺類毒品的38名甲基苯丙胺毒品濫用者唾液、尿液檢材。其中同一濫用者的唾液和尿液檢材在同一時(shí)間獲取。

市場(chǎng)購(gòu)買的共9個(gè)型號(hào)尿液試劑條，產(chǎn)地來源為北京、上海、杭州、廣州、紹興、廈門。2015年批次試劑條，編號(hào)為N1～N9，N1、N2對(duì)應(yīng)的2017年批次產(chǎn)品編號(hào)為N10、N11。唾液試劑條共4個(gè)型號(hào)，產(chǎn)品產(chǎn)地來源為北京、廣州、紹興，2015年批次產(chǎn)品編號(hào)為T1～T4，T1對(duì)應(yīng)的2017年批次產(chǎn)品編號(hào)為T5。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 尿液試劑條測(cè)試

1.2.1.1 尿液試劑條交叉反應(yīng)測(cè)試

用正常人陰性尿液配制100 μg/mL表1中33種常見毒品溶液，每種毒品每次取100 μL滴進(jìn)試劑條進(jìn)樣孔中進(jìn)行測(cè)試，每種試劑條平行測(cè)試5次。

表1 33種常見毒品Table 1 33 kinds of common-seen drugs

1.2.1.2 尿液試劑條閾值測(cè)試

用正常人陰性尿液配制甲基安非他明梯度溶液2000、1500、1000、750 、500、250 ng/mL，測(cè)試試劑條閾值，每次取100 μL滴進(jìn)試劑條進(jìn)樣孔中進(jìn)行測(cè)試，每種試劑條平行測(cè)試5次。

1.2.2 唾液試劑條測(cè)試

1.2.2.1 唾液試劑條交叉反應(yīng)測(cè)試

用人工唾液配制100 μg/mL表1中提到的33種常見毒品藥品，每種毒品藥品每次取200 μL滴進(jìn)試劑條進(jìn)樣孔中測(cè)試，每種試劑條平行測(cè)試5次。

1.2.2.2 唾液試劑條閾值測(cè)試

用人工唾液配制甲基安非他明梯度溶液200、150、100、75 、50、25 ng/mL，測(cè)試試劑條閾值，每次取200 μL滴進(jìn)試劑條進(jìn)樣孔中進(jìn)行測(cè)試，每種試劑條平行測(cè)試5次。

1.2.3 實(shí)際樣品測(cè)試分析

1.2.3.1 實(shí)際樣品前處理

甲基苯丙胺毒品濫用者的唾液、尿液各38份，先將唾液、尿液取樣器放置于冰箱中的冷凍室-20 ℃下冷凍30 min，其目的是破壞檢材中的粘蛋白，實(shí)驗(yàn)前取出置于室溫下自然解凍。

1.2.3.2 實(shí)際樣品濃度測(cè)試

用LC-MS獲得其濃度值。實(shí)驗(yàn)條件參照參考文獻(xiàn) [ 5]。

2 結(jié)果與討論

2.1 尿液試劑條交叉反應(yīng)及閾值測(cè)試

9種型號(hào)尿液試劑條對(duì)100 μg/mL安非他明、可待因等其他29種常見毒品藥品無交叉反應(yīng)。對(duì)于100 μg/mL麻黃堿、偽麻黃堿、鹽酸去氧腎上腺素、MDMA等4種毒品、藥品部分試劑條有交叉反應(yīng)，尤其是型號(hào)N7對(duì)四種毒品藥品都有交叉。其中麻黃堿及MDMA交叉反應(yīng)測(cè)試結(jié)果見表2～3。

表2中可見，100 μg/mL的麻黃堿，9個(gè)型號(hào)共45個(gè)試劑條55.6%有交叉反應(yīng)，對(duì)于型號(hào)N3、N6甲基苯丙胺試劑條1 μg/mL的麻黃堿為陽性，對(duì)于型號(hào)N7，高于10 μg/mL麻黃堿不可區(qū)分。

表3中可見，對(duì)于3 μg/mL的MDMA，所有品牌都有交叉反應(yīng)，又因MDMA為毒品類，因此建議將MDMA列入甲基苯丙胺尿液試劑條陽性參考品類。

對(duì)于型號(hào)N7，高于50 μg/mL偽麻黃堿不可區(qū)分，其他型號(hào)對(duì)偽麻黃堿無交叉反應(yīng)。對(duì)于鹽酸去氧腎上腺素，型號(hào)N6、N7和高于50 μg/mL的鹽酸去氧腎上腺素有交叉反應(yīng)，其他型號(hào)無交叉反應(yīng)。麻黃堿、偽麻黃堿為感冒藥重要成分，鹽酸去氧腎上腺素也為臨床常用藥物，建議將這三種藥物列入甲基苯丙胺尿液試劑條陰性參考品類。

參考美國(guó)和歐盟建議尿液試劑條閾值為1000 ng/mL。若閾值±25%為灰區(qū)，即1250 ng/mL以上為陽性、750 ng/mL以下為陰性，750～1250 ng/mL可以為陰性也可以為陽性，若以此為標(biāo)準(zhǔn)，則N5、N7、N9試劑條設(shè)置的閾值偏低，見表4。一般來講如果閾值低的話，即靈敏度設(shè)置高，可能和其他藥物交叉反應(yīng)增多，特異性變差，如批次N7。N5、N9閾值設(shè)置較低，但是其特異性要好于N1、N2、N3、N6、N7，說明市場(chǎng)上產(chǎn)品性能差異還是很大的，有些產(chǎn)品性能有待提高。

表2 麻黃堿交叉反應(yīng)測(cè)試(尿液)Table 2 Cross reactivity to ephedrine (urine)

表3 MDMA交叉反應(yīng)測(cè)試(尿液)Table 3 Cross reactivity to MDMA (urine)

表4 閾值測(cè)試(尿液)Table 4 Threshold test (urine)

2.2 唾液試劑條交叉反應(yīng)及閾值測(cè)試

4種型號(hào)唾液試劑條對(duì)于100μg/mL麻黃堿、鹽酸去氧腎上腺素、MDMA等3種毒品、藥品全部有交叉反應(yīng)，對(duì)于本文涉及的其他30種毒品、藥品無交叉反應(yīng)。

對(duì)1000 ng/mL麻黃堿所有型號(hào)都有交叉反應(yīng)，T4型號(hào)對(duì)高于500 ng/mL的麻黃堿不可區(qū)分（表5）。

對(duì)于2000 ng/mL的MDMA所有型號(hào)都有交叉反應(yīng)，T4型號(hào)和150 ng/mL的MDMA有交叉反應(yīng)。同樣建議將MDMA列入甲基苯丙胺唾液試劑條陽性參考品類。T2、T4兩種型號(hào)的產(chǎn)品對(duì)9 μg/mL的鹽酸去氧腎上腺素有交叉反應(yīng)，T1、T3對(duì)鹽酸去氧腎上腺素?zé)o交叉反應(yīng)。唾液試劑條收集樣本型號(hào)較少，不能排除其他型號(hào)對(duì)偽麻黃堿有交叉反應(yīng)。

由表6可知，4個(gè)型號(hào)產(chǎn)品閾值設(shè)定都為50 ng/mL。

表5 麻黃堿交叉反應(yīng)測(cè)試(唾液)Table 5 Cross reactivity to ephedrine (saliva)

表6 閾值測(cè)試(唾液)Table 6 Threshold test (saliva)

2.3 產(chǎn)品穩(wěn)定性測(cè)試

為驗(yàn)證產(chǎn)品穩(wěn)定性，間隔18個(gè)月重新對(duì)2015年生產(chǎn)的9個(gè)尿液試劑條、4個(gè)唾液試劑條的特異性和閾值進(jìn)行測(cè)試。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩次測(cè)試其產(chǎn)品的特異性和閾值測(cè)試結(jié)果基本不變，說明產(chǎn)品在室溫正常存放18個(gè)月，性質(zhì)穩(wěn)定。進(jìn)一步驗(yàn)證本次實(shí)驗(yàn)所涉及的試劑條在各型號(hào)說明書中所標(biāo)注保質(zhì)期內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.4 同廠家不同批次產(chǎn)品特異性測(cè)試、閾值測(cè)試結(jié)果對(duì)比

為測(cè)試同一廠家不同批次產(chǎn)品性質(zhì)穩(wěn)定性，對(duì)N10和N11、T5特異性和閾值進(jìn)行測(cè)試，并和N1、N2、T1產(chǎn)品測(cè)試結(jié)果比較。測(cè)試發(fā)現(xiàn)：抗體的選擇和結(jié)合位置對(duì)于試劑條的特異性影響很大。因此不同廠家的產(chǎn)品特異性（即交叉反應(yīng)情況）相差很大，但是對(duì)于同一廠家，其不同批次（甚至是尿液和唾液的甲基苯丙胺產(chǎn)品）產(chǎn)品特異性具有同一性。對(duì)于閾值來講，影響因素主要是：抗原涂層厚度、膜條寬度，抗體濃度、均勻度；這些易于變化也易于調(diào)節(jié)，但變動(dòng)也比較大，易造成產(chǎn)品批間差，這些因素導(dǎo)致有些型號(hào)產(chǎn)品難以將灰區(qū)控制在閾值±25%。

2.5 實(shí)際樣品測(cè)試分析

參照美國(guó)和歐盟建議甲基苯丙胺膠體金唾液試劑條閾值初篩濃度[6]為50 ng/mL，實(shí)驗(yàn)室唾液確證濃度25 ng/mL；甲基苯丙胺膠體金尿液試劑條閾值濃度為1000 ng/mL。取由公安部門送檢、被確認(rèn)吸食過甲基苯丙胺類毒品的38名甲基苯丙胺毒品濫用者唾液、尿液檢材進(jìn)行初篩。結(jié)果顯示，序號(hào)1～6吸毒人員的尿液檢材初篩為陰性；序號(hào)7～11吸毒人員的唾液檢材結(jié)果為陰性。其余27個(gè)樣品則尿液、唾液檢材中甲基苯丙胺濃度均達(dá)到甲基苯丙胺檢測(cè)試劑條檢測(cè)閾值，唾液和尿液都呈陽性。即尿液試劑條設(shè)置閾值1000 ng/mL，檢出率為85%左右；唾液試劑條閾值初篩濃度為50 ng/mL，初篩檢出率大概為87%。具體執(zhí)法過程中選用何種試劑條還需根據(jù)實(shí)際情況來選擇，可以兩種試劑條結(jié)合使用，提高檢出率和準(zhǔn)確度，本實(shí)驗(yàn)中兩種試劑條結(jié)合使用，初篩檢出率可以提高到95%以上。

3 結(jié)論

通過對(duì)不同廠家的試劑條交叉反應(yīng)、閾值、實(shí)際應(yīng)用等實(shí)驗(yàn)研究，得到以下結(jié)論。

1）不同型號(hào)甲基苯丙胺試劑條對(duì)麻黃堿、偽麻黃堿、鹽酸去氧腎上腺素、MDMA等4種毒品、藥品有交叉反應(yīng)，對(duì)于本文涉及的其他29種常見毒品、藥品無交叉反應(yīng)，可在日常質(zhì)控中排除這29種樣品的常規(guī)檢驗(yàn)，節(jié)省人力物力。

2）建議質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)過程中可根據(jù)產(chǎn)品的交叉反應(yīng)、閾值及灰區(qū)控制等影響產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵性指標(biāo)進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量分級(jí)。本文提供的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)可作為質(zhì)量分級(jí)的參考數(shù)據(jù)。

3）可以根據(jù)具體應(yīng)用需求來調(diào)節(jié)試劑條的閾值，建議偵查辦案時(shí)采用閾值低、靈敏度高的產(chǎn)品，大批量篩查時(shí)采用閾值較高的產(chǎn)品。

4）甲基苯丙胺試劑條產(chǎn)品在室溫正常存放18個(gè)月性質(zhì)穩(wěn)定。

5）唾液和尿液試劑條結(jié)合使用可提高檢出率和準(zhǔn)確度。

［1］ HAECKEL R，H?NECKE P. Application of saliva for drug monitoring an in vivo model for transmembrane transport［J］.European Journal of Clinical Chemistry & Clinical Biochemistry Journal of the Forum of European Clinical Chemistry Societies, 1996, 34(3):171-191.

［2］ 劉曉，林承喜，張平平，等. 基于上轉(zhuǎn)換發(fā)光技術(shù)的尿液中嗎啡及甲基苯丙胺快速定量檢測(cè)方法研究［J］. 刑事技術(shù)，2015,40(1): 28-34.

［3］ 李鵬旺，王玉瑾，劉俊芳. 唾液中濫用藥物分析及其與血液中藥物濃度的相關(guān)性［J］. 法醫(yī)學(xué)雜志， 2007,23(4):309-310.

［4］ 申文靜，朱軍，劉耀. 人唾液中苯丙胺類藥物檢測(cè)方法進(jìn)展［J］. 中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志， 2007.22( 3) : 179-180．

［5］ 陳躍，朱軍，于忠山，等. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)唾液中3種毒品及其代謝物［J］. 色譜，2012,30(11): 1148-1152.

［6］ SPIEHLER V, BALDWIN D, HAND C. Cutoff concentrations for drugs of abuse in saliva for DUI,DWI or other drivingrelated crimes［C］. Cracow :37th Triennial Meeting Cracow September 5-9,1999.