朱旭東，王　敏,朱宇華

(1.西安市高陵區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心, 陜西西安 710200；2.西安市第三中學(xué),陜西西安 710048)

H7N9亞型禽流感是一種新型流感，于2013年3月底在我國(guó)長(zhǎng)三角地區(qū)首次出現(xiàn)后，來(lái)勢(shì)洶洶，在10個(gè)月內(nèi)，造成12個(gè)省市148人感染，其中46人死亡[1]。近幾年來(lái)發(fā)病數(shù)逐年上升，國(guó)家衛(wèi)計(jì)委公布的疫情統(tǒng)計(jì)，僅2017年1月-8月全國(guó)就有643人感染，死亡268人，已蔓延到我國(guó)17個(gè)省、區(qū)、直轄市(不包括港、澳、臺(tái)地區(qū))，H7N9亞型禽流感是全球首次發(fā)現(xiàn)的新亞型流感病毒，尚未證實(shí)此類病毒是否具有人傳染人的特性[2]?，F(xiàn)階段研究發(fā)現(xiàn)，人感染禽流感病毒的傳染源為攜帶病毒的禽類，H7N9禽流感病人是通過(guò)直接接觸禽類或其排泄物污染的物品、環(huán)境而感染[3]。所以，預(yù)防人感染H7N9亞型禽流感病毒，必須從源頭上做好家禽亞型H7N9禽流感的預(yù)防工作[4]。

家禽方面，2016年之前我國(guó)只是在家禽上和活禽交易市場(chǎng)環(huán)境中檢測(cè)到H7N9亞型禽流感病毒，無(wú)相關(guān)家禽發(fā)病報(bào)道。2017年我國(guó)開(kāi)始出現(xiàn)家禽感染發(fā)病和大批死亡，根據(jù)國(guó)家農(nóng)業(yè)部公布的疫情統(tǒng)計(jì),截止2017年8月我國(guó)發(fā)生9起家禽H7N9亞型流感疫情，發(fā)病家禽185 684只，死亡115 259只，因病撲殺958 696只。因此，國(guó)家農(nóng)業(yè)部自2017年秋季在家禽上緊急啟動(dòng)H7N9流感強(qiáng)制免疫計(jì)劃，要求統(tǒng)一使用重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)，對(duì)全國(guó)家禽(包括水禽)實(shí)施免疫。

西安羅曼實(shí)業(yè)有限公司是陜西省最大的種禽企業(yè)，常年存欄種禽15萬(wàn)只，公司按照《農(nóng)業(yè)部關(guān)于切實(shí)做好全國(guó)高致病性禽流感秋季免疫工作的通知》(農(nóng)醫(yī)發(fā)﹝2017﹞24號(hào))要求，第一時(shí)間采購(gòu)疫苗，及時(shí)對(duì)公司全部家禽進(jìn)行了H7N9禽流感免疫預(yù)防。由于是首次使用H7N9禽流感疫苗，目前尚無(wú)家禽H7N9禽流感免疫效果田間試驗(yàn)報(bào)道。為及時(shí)了解家禽H7N9疫苗免疫后的抗體水平、評(píng)價(jià)H7N9流感疫苗的免疫效果，為家禽H7N9禽流感防控提供科學(xué)的依據(jù)，對(duì)西安羅曼實(shí)業(yè)有限公司的雞群進(jìn)行了H7N9流感疫苗免疫接種及H7免疫抗體檢測(cè)。

1　材料與方法

1.1　材料

1.1.1疫苗重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)，青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)，批號(hào)171374503。

1.1.2試劑及器具0.01 mol/L pH7.2的PBS液;10 mL/L雞紅細(xì)胞懸液；禽流感病毒H7亞型抗原，哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司產(chǎn)品，批號(hào)2017003；禽流感病毒H7亞型陽(yáng)性血清，哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司產(chǎn)品，批號(hào)2017003；96孔V型微量反應(yīng)板，微量移液器。

1.2　方法

1.2.1疫苗接種用重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)對(duì)西安羅曼實(shí)業(yè)有限公司的薩索種雞進(jìn)行免疫，每只雞胸部肌肉注射0.5 mL，首次免疫后間隔1個(gè)月進(jìn)行二次免疫，劑量同為0.5 mL，共計(jì)免疫接種146 800只。

1.2.2樣品采集在西安羅曼實(shí)業(yè)有限公司薩索種雞用重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗首免和二免后21 d,分別對(duì)雞群進(jìn)行翅靜脈抽血。每次選5個(gè)雞舍，每個(gè)雞舍隨機(jī)抽樣20份，兩次共采集血樣200份，在實(shí)驗(yàn)室用離心機(jī)分離血清。

1.2.3檢測(cè)方法按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T18936-2003)采用血凝和血凝抑制試驗(yàn)(HI試驗(yàn))對(duì)血清樣品進(jìn)行H7流感抗體的檢測(cè)[5]。

1.2.4判定標(biāo)準(zhǔn)

1.2.4.1免疫合格個(gè)體按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T 18936-2003)，經(jīng)過(guò)血凝抑制試驗(yàn)(HI)檢測(cè)，對(duì)H7N9疫苗免疫的家禽，免疫21 d后HI抗體效價(jià)≥4 log2為免疫合格[5]。

1.2.4.2免疫合格群體對(duì)H7N9疫苗免疫的家禽，免疫合格個(gè)體數(shù)量占群體總數(shù)的70%(含)以上[5]。

2　結(jié)果

利用血凝和血凝抑制試驗(yàn)對(duì)西安羅曼有限公司5棟雞舍200份樣品進(jìn)行了禽流感H7亞型抗體測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表1和表2。

表1　雞群首免H7N9流感疫苗后抗體檢測(cè)結(jié)果

表2　雞群二免H7N9流感疫苗后抗體檢測(cè)結(jié)果

由表1可見(jiàn)，雞群用H7N9疫苗第一次免疫后，其免疫抗體水平就達(dá)到7 log2～10 log2，平均為8.3 log2，合格率為100%。遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)個(gè)體HI抗體效價(jià)≥4 log2、群體免疫合格個(gè)體數(shù)量占群體總數(shù)的70%(含)以上的標(biāo)準(zhǔn)。由表2中可見(jiàn)，雞群用H7N9疫苗第2免疫后，其免疫抗體水平能達(dá)到7 log2～13 log2，平均為11.2 log2,合格率為100%。

二次免疫后抗體均比首次免疫后抗體有不同程度提高，提高幅度在1.5～4.1個(gè)滴度之間，平均提高2.9個(gè)滴度(圖1)。

圖1　不同雞舍雞群首免和二免后抗體水平比較

3　討論

雞群用重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗按標(biāo)準(zhǔn)劑量免疫一次，其H7N9流感抗體平均達(dá)到8.3 log2，合格率為100%。遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于個(gè)體抗體效價(jià)≥4 log2，群體合格率≥70%的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明用重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗對(duì)雞群H7N9禽流感免疫效果確實(shí)有效。

同一個(gè)雞場(chǎng)不同雞舍種雞在免疫接種同一種疫苗以后產(chǎn)生的抗體水平卻不同，說(shuō)明雞群的日齡、健康情況、整齊度、生物安全措施等對(duì)雞只產(chǎn)生免疫抗體有一定的影響[6]。

雞群二免后抗體均比首免后抗體有不同程度提高，但不同雞群提高幅度差異較大，首免后抗體較低的雞群在二免后抗體水平提高幅度比首免抗體較高的雞群提高的幅度大，這可能與抗體對(duì)疫苗抗原中和有關(guān)。也說(shuō)明如果雞群首免后抗體如果不理想，可以重新加強(qiáng)免疫一次，以達(dá)到提高抗體的效果。

對(duì)一般商品雞群，用重組禽流感病毒(H5+H7)二價(jià)滅活疫苗免疫一次即可達(dá)到理想的抗體水平，但對(duì)種雞而言，因?yàn)橐紤]的后代的母源抗體水平，最好連續(xù)進(jìn)行兩次免疫，以使后代雛雞也達(dá)到較高抗體水平，提高后代雛雞對(duì)H7N9流感病毒的抵抗力。