何　杰　吳代武　葉元土*　蔡春芳　吳　萍　羅其剛　浦琴華

(1.蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，蘇州 215123；2.浙江一星實(shí)業(yè)股份有限公司，海鹽 314300)

魚粉與其他陸生動(dòng)物蛋白質(zhì)、植物蛋白質(zhì)原料的主要差異之一就是含有較多的生物胺(biogenic amine)。魚粉中生物胺含量一直以來被作為新鮮度的控制指標(biāo)之一[1]。組胺(histamine)是生物胺中的一種，組胺是游離的組氨酸經(jīng)微生物的組胺脫羧酶作用而產(chǎn)生[2]，其在魚粉中含量的高低，是評(píng)價(jià)魚粉新鮮度質(zhì)量的重要指標(biāo)[3]。有報(bào)道稱，海產(chǎn)鯖科魚類中含量最多且最主要的生物胺是組胺，金槍魚作為紅色肌肉種類，金槍魚魚粉組胺含量較白魚粉高[4-5]，Takagi等[6]發(fā)現(xiàn)紅魚粉中的組胺含量相比于白魚粉中的組胺含量更高。有研究表明，在毒性劑量下組胺可引起雞[7]、豬[8]、水貂[9]、小鼠[10]等的毒性反應(yīng)，尤其是對(duì)胃黏膜有損傷作用。在水產(chǎn)動(dòng)物飼料中，組胺對(duì)不同養(yǎng)殖種類生長(zhǎng)、生理代謝等的作用有較大的差異，尤其是對(duì)胃腸道黏膜的作用、并是否引起“吐料”一直是關(guān)注的重點(diǎn)內(nèi)容之一。黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)是一種有胃的肉食性魚類，其體色也容易受到多種因素的影響而發(fā)生變化。本試驗(yàn)以黃顙魚為研究對(duì)象，研究飼料組胺水平對(duì)黃顙魚生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)和胃腸道黏膜結(jié)構(gòu)的影響，旨在為飼料組胺的適宜添加水平提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　飼料原料與試驗(yàn)飼料

試驗(yàn)用的金槍魚魚粉為厄瓜多爾生產(chǎn)的金槍魚魚粉，其主要營(yíng)養(yǎng)組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))為：粗蛋白質(zhì)74.97%、粗脂肪7.88%、粗灰分11.04%、水分7.54%、組胺226.8 mg/kg；白魚粉為俄羅斯白魚粉，其主要營(yíng)養(yǎng)組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))為：粗蛋白質(zhì)67.18%、粗脂肪9.07%、粗灰分20.31%、水分7.44、組胺39.6 mg/kg。

以白魚粉為對(duì)照，參照黃顙魚的營(yíng)養(yǎng)需要和實(shí)用飼料營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)，選用組胺二鹽酸鹽(C5H9N3·2HCl，組胺含量60.30%，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品)為組胺原料，設(shè)置白魚粉飼料(H0)、金槍魚魚粉飼料(TFM)和白魚粉飼料中分別添加5個(gè)水平組胺的試驗(yàn)飼料(H1、H2、H3、H4、H5)，共7種試驗(yàn)飼料。飼料組胺水平分別為53.20、4.30、18.00、56.20、84.60、103.50、158.90 mg/kg。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

各飼料原料粉碎過60目篩，采取逐級(jí)稀釋法將組胺等混合均勻，用飼料機(jī)制成粒徑為1.5 mm，長(zhǎng)2～3 mm的顆粒飼料，空氣干燥，4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩８鹘M飼料等氮、等脂(粗蛋白質(zhì)含量為40.28%～40.32%，粗脂肪含量為8.21%～8.23%)。各組飼料生物胺種類和含量由新希望六和測(cè)試中心采用液相色譜法分析，飼料的尸胺、精胺、亞精胺、腐胺和組胺含量的實(shí)測(cè)值見表1。

表1　試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表1項(xiàng)目 Items飼料 DietsTFMH0H1H2H3H4H5腐胺 Putrescine25.50101.70109.90102.80109.60104.40102.00亞精胺 Spermidine 84.0089.6091.6088.6091.9090.4090.10組胺 Histamine 53.204.3018.0056.2084.60103.50158.90

1)預(yù)混料為每千克飼料提供 The premix provided the following per kg of diets：Cu 25 mg，F(xiàn)e 640 mg，Mn 130 mg，Zn 190 mg，I 0.21 mg，Se 0.7 mg，Co 0.16 mg，Mg 960 mg，K 0.5 mg，VA 8 mg，VB18 mg，VB28 mg，VB612 mg，VB120.02 mg，VC 300 mg，VD33 mg，VK35 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 25 mg，煙酸 niacin 25 mg，葉酸 folacin 5 mg，肌醇 inositol 100 mg

2)營(yíng)養(yǎng)水平為實(shí)測(cè)值。Nutrient levels were measured values.

1.2　試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

選取浙江一星養(yǎng)殖基地池塘培育的1冬齡、規(guī)格整齊、健康、體質(zhì)量為(30.08±0.35) g的黃顙魚魚種420尾，隨機(jī)分成7組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)(網(wǎng)箱)20尾魚，各組分別投喂金槍魚魚粉飼料(TFM組)、白魚粉飼料(H0組，作為對(duì)照組)以及白魚粉飼料中分別添加5個(gè)組胺水平的試驗(yàn)飼料(H1、H2、H3、H4和H5組)。試驗(yàn)期60 d。

養(yǎng)殖試驗(yàn)在浙江一星養(yǎng)殖基地池塘網(wǎng)箱中進(jìn)行，在面積為40 m×60 m的池塘中設(shè)置試驗(yàn)網(wǎng)箱(規(guī)格為1.0 m×1.5 m×1.5 m)，以海鹽縣長(zhǎng)山河為水源，池塘中設(shè)置1臺(tái)1.5 kW的葉輪式增氧機(jī)，每天運(yùn)行12 h。試驗(yàn)魚網(wǎng)箱馴化適應(yīng)2周后開始正式投喂。日投喂2次(07:00、16:00)，日投喂量為魚體質(zhì)量的3%～5%，每10 d估算1次魚體增重量并調(diào)整飼料投喂量。養(yǎng)殖期間池塘水溫24.1～36.0 ℃，溶解氧濃度>7.0 mg/L，pH 8.0～8.4，氨氮濃度<0.10 mg/L，亞硝酸鹽濃度<0.005 mg/L，硫化物濃度<0.05 mg/L。

1.3　樣品采集與分析

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，禁食24 h后，記錄每個(gè)網(wǎng)箱魚尾數(shù)、總重，計(jì)算成活率(survival rate，SR)、特定生長(zhǎng)率(specific growth rate，SGR)。每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取3尾魚作為全魚樣品，用于全魚體成分的測(cè)定。

每個(gè)網(wǎng)箱隨機(jī)取5尾魚，自尾柄靜脈采血待自然凝固后，3 000 r/min、4 ℃條件下離心10 min，取上層血清，每個(gè)網(wǎng)箱的血清混合為1個(gè)樣品，液氮速凍后于-80 ℃冰箱保存，用于血清指標(biāo)的測(cè)定。

每個(gè)網(wǎng)箱隨機(jī)取5尾魚解剖后稱量?jī)?nèi)臟團(tuán)、肝胰臟用于計(jì)算肥滿度(condition factor，CF)、肝體比(hepatosomatic index，HSI)、臟體比(viscero-somatic index，VSI)。每個(gè)試驗(yàn)組選取6尾魚體取體側(cè)皮膚，用于類胡蘿卜素和葉黃素的測(cè)定；同時(shí)取黃顙魚的胃黏膜(胃底部)、腸道黏膜(腸道1/2處的黏膜)，用魚用生理鹽水清洗，戊二醛固定，用于掃描電鏡和透射電鏡，觀察胃黏膜表面特征和腸道黏膜細(xì)胞之間細(xì)胞連接結(jié)構(gòu)。

樣品魚經(jīng)絞碎機(jī)絞碎后，用LGJ-18B型冷凍干燥機(jī)干燥至恒重測(cè)定水分，得到冷凍干燥樣品；采用凱氏定氮法(GB/T 5009.5—2010)測(cè)定粗蛋白質(zhì)含量；采用索氏抽提法(GB/T 14772—2008)測(cè)定粗脂肪含量；采用GB/T 5009.4—2010中方法測(cè)定粗灰分含量；血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性及高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽汁酸(TBA)、總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量采用雅培C800全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。皮膚類胡蘿卜素和葉黃素含量的測(cè)定參考AOAC 970.64的方法測(cè)定。胃黏膜表面結(jié)構(gòu)采用掃描電鏡觀察，腸道黏膜細(xì)胞之間緊密連接結(jié)構(gòu)采用透射電鏡觀察。

1.4　計(jì)算方法

特定生長(zhǎng)率(%/d)=100×(lnWt-lnWi)/t；
飼料系數(shù)(feed conversion ratio，F(xiàn)CR)=
Wa/(W1-W0)；
蛋白質(zhì)沉積率(protein retention rate，PRR，%)=
100×(P1-P0)/Wp；
脂肪沉積率(fat retention rate，F(xiàn)RR，%)=
100×(F1-F0)/Wf；
肥滿度(%)=100×W/L3；
肝體比(%)=100×Wh/W；
臟體比(%)=100×Wv/W；
類胡蘿卜素含量(mg/kg)=(A×K×V)/(E×G)；
葉黃素含量(mg/kg)=A474×1000×f/236×b×d。

式中：Wt、Wi分別為終末均重(g)、初始均重(g)；t為飼養(yǎng)天數(shù)(d)；W1、W0分別為終末總體質(zhì)量(g)、初始總體質(zhì)量(g)；Wa為投喂飼料總質(zhì)量(g)；P1、P0分別為終末體蛋白質(zhì)質(zhì)量(g)、初始體蛋白質(zhì)質(zhì)量(g)；Wp為蛋白質(zhì)攝入總質(zhì)量(g)；F1、F0分別為終末體脂肪質(zhì)量(g)、初始體脂肪質(zhì)量(g)；Wf為脂肪攝入總質(zhì)量(g)；W為魚體質(zhì)量(g)；Wv為魚體內(nèi)臟團(tuán)質(zhì)量(g)；Wh為魚體肝胰臟質(zhì)量(g)；L為魚體長(zhǎng)(cm)；A為吸光度；K為稀釋倍數(shù)；V為提取液體積(mL)；E為摩爾消光系數(shù)；G為樣品重量(g)；b為比色池的長(zhǎng)度(cm)；f為儀器誤差；A474為被觀察的波長(zhǎng)474 nm下的光密度值；d為稀釋系數(shù)。

1.5　數(shù)據(jù)處理與分析

采用SPSS 18.0對(duì)所得數(shù)據(jù)用one-way ANOVA程序進(jìn)行單因素方差分析，用Duncun氏法多重比較分析組間差異。試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果均以樣本平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，顯著性水平設(shè)置為0.05。

2　結(jié)果與分析

2.1　飼料組胺水平對(duì)黃顙魚生長(zhǎng)性能、體成分和形體指標(biāo)的影響

由表2可見，各組黃顙魚初均重?zé)o顯著差異(P>0.05)。H1組黃顙魚的末均重、特定生長(zhǎng)率顯著高于H0、H2、H3和H4組(P<0.05)，而其他各組之間無顯著差異(P>0.05)。H1組黃顙魚的的蛋白質(zhì)沉積率和脂肪沉積率高于其他各組(P<0.05)，其他各組之間的蛋白質(zhì)沉積率和脂肪沉積率無顯著差異(P>0.05)。在黃顙魚的成活率方面，TFM、H3、H4和H5組與H0、H1和H2組相比，顯著下降了19.17%～24.17%(P<0.05)。由于養(yǎng)殖試驗(yàn)是在池塘網(wǎng)箱中進(jìn)行的，無法收集殘餌，所以黃顙魚的FCR結(jié)果的是按照實(shí)際投喂量計(jì)算的，導(dǎo)致本試驗(yàn)結(jié)果中的FCR與實(shí)際生產(chǎn)的數(shù)據(jù)有一定的差異。

各組黃顙魚的肥滿度無顯著差異(P>0.05)。H1組黃顙魚的臟體比顯著高于TFM、H2、H3、H4、H5組(P<0.05)，但是TFM、H2、H3、H4和H5組之間無顯著差異(P>0.05)。H0組黃顙魚的肝體比顯著高于TFM組(P<0.05)，其余各之組間無顯著差異(P>0.05)。

表2　飼料組胺水平對(duì)黃顙魚生長(zhǎng)性能、體成分和形體指標(biāo)的影響

續(xù)表2項(xiàng)目 Items組別 GroupsTFMH0H1H2H3H4H5粗灰分 Ash/%4.43±0.144.31±0.524.52±0.404.38±0.174.67±0.124.37±0.304.52±0.28肥滿度 CF/%2.14±0.092.27±0.262.27±0.072.09±0.382.13±0.242.08±0.222.71±0.57臟體比 VSI/%6.85±0.50b8.73±0.22ab13.24±7.87a7.69±1.45b7.25±0.96b7.85±1.21b7.63±0.24b肝體比 HSI/%1.65±0.08b2.11±0.31a1.84±0.28ab1.84±0.14ab1.73±0.02ab2.03±0.23ab1.73±0.15ab

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

將黃顙魚特定生長(zhǎng)率與飼料組胺水平作圖(圖1)，黃顙魚特定生長(zhǎng)率與飼料組胺水平顯示出二次函數(shù)關(guān)系的變化趨勢(shì)。

上述結(jié)果表明，與白魚粉比較，金槍魚魚粉對(duì)黃顙魚的生長(zhǎng)速度和飼料效率沒有顯著差異；而飼料組胺水平對(duì)黃顙魚的生長(zhǎng)速度和飼料效率顯示出二次函數(shù)變化趨勢(shì)，在低飼料組胺水平(18.00 mg/kg)條件下具有較好的生長(zhǎng)速度，而較高飼料組胺水平條件下顯示出對(duì)生長(zhǎng)的抑制作用。飼料組胺水平對(duì)黃顙魚的體成分沒有顯著影響。

圖1　黃顙魚特定生長(zhǎng)率與飼料組胺水平的關(guān)系

2.2　飼料組胺水平對(duì)黃顙魚血清生化指標(biāo)的影響

由表3可見，各組黃顙魚的血清總蛋白和高密度脂蛋白含量無顯著差異(P>0.05)。H3組黃顙魚的血清葡萄糖含量顯著高于TFM、H4和H5組(P<0.05)；H1和H2組黃顙魚的血清葡萄糖含量略微低于H3組，但差異不顯著(P>0.05)。H0組黃顙魚的總膽汁酸含量顯著高于其他各組(P<0.05)，H4和H5組黃顙魚的總膽汁酸含量顯著低于其他各組(P<0.05)。各組黃顙魚的血清總膽固醇含量無顯著差異(P>0.05)。TFM、H3、H4組黃顙魚的血清低密度脂蛋白含量顯著高于H0、H1、H5組(P<0.05)。

上述結(jié)果表明，各組黃顙魚血清內(nèi)環(huán)境顯示出一定的差異，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性、低密度脂蛋白含量有增加的趨勢(shì)，顯示肝胰臟結(jié)構(gòu)和功能可能受到飼料組胺水平的一定影響；值得注意的是血清總膽汁酸含量隨飼料組胺水平增加而顯著下降，表明魚體膽汁酸的腸-肝循環(huán)可能受到損傷性影響。

2.3　飼料組胺水平對(duì)黃顙魚皮膚色素含量的影響

由表4可見，各組黃顙魚體側(cè)皮膚2種色素含量沒有顯著性差異(P>0.05)。這表明，金槍魚魚粉、飼料組胺含量并未對(duì)黃顙魚的體色產(chǎn)生顯著性的影響。

2.4　黃顙魚胃黏膜細(xì)胞的掃描電鏡觀察

各組黃顙魚胃黏膜的掃描電鏡觀察結(jié)果如圖2。掃描電鏡觀察到的是胃黏膜的表面結(jié)構(gòu)，從圖中可以觀察到，H0和H1組的黃顙魚胃黏膜細(xì)胞正常，細(xì)胞界線清晰，細(xì)胞排列緊密；H2和H3組在圖中箭頭處有少數(shù)細(xì)胞破裂，其他部位較為完整；TFM、H4和H5組的胃黏膜細(xì)胞損傷嚴(yán)重。

上述結(jié)果顯示，飼料高組胺水平(大于103.50 mg/kg)對(duì)黃顙魚胃黏膜表面結(jié)構(gòu)有較為嚴(yán)重的損傷，損傷程度隨飼料中組胺水平增加而加重。飼料組胺水平較高的TFM組雖然生長(zhǎng)速度與H0組無顯著差異，但魚體胃黏膜細(xì)胞則受到較為明顯的損傷。

表3　飼料組胺水平對(duì)黃顙魚血清生化指標(biāo)的影響

表4　飼料組胺水平對(duì)黃顙魚皮膚色素含量的影響(干物質(zhì)基礎(chǔ))

2.5　黃顙魚腸道黏膜細(xì)胞之間緊密連接結(jié)構(gòu)的透射電鏡觀察

各組黃顙魚腸道黏膜細(xì)胞之間緊密連接結(jié)構(gòu)的透射電鏡觀察結(jié)果見圖3。腸道黏膜細(xì)胞之間的連接有緊密連接、縫隙連接等結(jié)構(gòu)，在靠近微絨毛端的細(xì)胞之間的連接為緊密連接結(jié)構(gòu)，而靠近黏膜基底層端的連接為縫隙連接結(jié)構(gòu)。從圖中可以觀察到，以白魚粉為蛋白質(zhì)源的H0組，黏膜細(xì)胞之間的連接結(jié)構(gòu)較為緊密，細(xì)胞之間沒有出現(xiàn)縫隙；H1組的細(xì)胞之間的連接結(jié)構(gòu)與H0組基本一致；從H2組開始，在微絨毛端和基底層端逐漸出現(xiàn)細(xì)胞之間的縫隙，顯示黏膜細(xì)胞之間的連接結(jié)構(gòu)受到損傷，且這種損傷的程度即縫隙的間隙大小隨飼料組胺水平的增加有逐漸增大的趨勢(shì)。

上述結(jié)果顯示，飼料組胺水平對(duì)黃顙魚腸道黏膜細(xì)胞之間的緊密連接結(jié)構(gòu)有一定的損傷作用，損傷程度與飼料組胺水平有一定的線性關(guān)系。

A：H0組；B：H1組；C：H2組；D：H3組；E：H4組；F：H5組；G：TFM組。下圖同?！疽饧?xì)胞損傷。放大倍數(shù)均為×1 500，最小刻度(右下)30.0 μm。

A: H0 group; B: H1 group; C: H2 group; D: H3 group; E: H4 group; F: H5 group; G: TFM group. The same as below. The ← indicated the cell damage. The magnification was ×1 500, and the minimum scale (lower right) was 30.0 μm.

圖2黃顙魚胃黏膜細(xì)胞的掃描電鏡觀察

Fig 2Scanning electron microscope observation of gastric mucosa cells of yellow catfish

示意微絨毛端連接，示意靠近黏膜基底層端連接。放大倍數(shù)均為20 000×，最小刻度200 nm。

The indicated the junctions of microvill end, and theindicated the junctions near the base layer of the mucous membrane. The magnification was 20 000×, and the minimum scale was 200 nm.

圖3黃顙魚腸道黏膜細(xì)胞之間緊密連接結(jié)構(gòu)的透射電鏡觀察

Fig.3Transmission electron microscope observation of tight junction between intestinal mucosa cell of yellow catfish

3　討　論

3.1　飼料組胺水平對(duì)黃顙魚生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及皮膚色素含量的影響

組胺是游離組氨酸在脫羧酶作用下脫去羧基后的產(chǎn)物。捕撈的魚類與其他動(dòng)物一樣，在死亡之后有一個(gè)僵硬、軟化、自溶、腐敗的過程。魚體的軟化、自溶主要依賴體內(nèi)消化系統(tǒng)和細(xì)胞溶酶體中的酶水解蛋白質(zhì)，產(chǎn)生較多的游離氨基酸，也可以得到游離的組氨酸。不同種類的魚組織中組氨酸含量有較大的差異，如紅肉魚與白肉魚相比較，紅肉魚含豐富的組氨酸，可以達(dá)到7～18 mg/g，而白肉魚只有0.1 mg/g。在腐敗過程中，微生物得到繁殖，并產(chǎn)生脫羧酶作用于游離的組氨酸，由此產(chǎn)生較多的組胺，組胺的產(chǎn)生主要是在腐敗過程中由于微生物的作用而產(chǎn)生的。由于魚體組氨酸含量的基礎(chǔ)差異，導(dǎo)致經(jīng)過加工生產(chǎn)的白魚粉中組胺的含量低于紅魚粉，本試驗(yàn)中，白魚粉、金槍魚魚粉中組胺含量分別為39.6、226.8 mg/kg。飼料中添加的組胺二鹽酸鹽中組胺含量為60.3%，飼料中的一些物質(zhì)可能干擾了飼料組胺的檢測(cè)，表1中檢測(cè)到的組胺含量低于了配方設(shè)計(jì)時(shí)的理論計(jì)算值。

組胺是具有多種生物活性的一種生物胺，飼料中的組胺對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物會(huì)產(chǎn)生一定的不良生理反應(yīng)并影響動(dòng)物的生長(zhǎng)和健康狀態(tài)?，F(xiàn)有的研究結(jié)果顯示，不同的養(yǎng)殖動(dòng)物對(duì)飼料組胺的生理反應(yīng)有較大的差異，對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物生長(zhǎng)的影響也出現(xiàn)較大的差異；重要的是，在低水平下，組胺對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物顯示出很好的生長(zhǎng)效果，而在高于一定水平后會(huì)產(chǎn)生不良的生理反應(yīng)，對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)造成負(fù)面的影響。

Cruz-Suarez等[11]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中100 mg/kg以上的生物胺(尸胺、腐胺、組胺)會(huì)降低凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)的攝食率、增重率和成活率。在飼料中添加4 000 mg/kg組胺會(huì)降低家禽[12]和糠蝦[13](NeomysisawatschensisandN.japonicaNakazawa)的成活率。羅其剛等[14]在魚溶漿對(duì)草魚(Ctenopharyngodonidella)的生長(zhǎng)影響試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，組胺對(duì)草魚的成活率沒有顯著影響，認(rèn)為草魚屬于無胃魚類，也就不具備組胺發(fā)揮作用的受體，從而降低組胺對(duì)于草魚的毒性作用，低劑量的生物胺能促進(jìn)草魚的生長(zhǎng)。有報(bào)道表明，在肉雞飼糧中添加4 000 mg/kg組胺時(shí)可以抑制肉雞生長(zhǎng)，并且引發(fā)肉雞肌胃糜爛綜合征[12]；豬飼糧中添加4 000 mg/kg組胺可以降低豬的攝食量和體增重率，但對(duì)其FCR沒有顯著影響[15]。本研究中，在投喂組胺水平超過84.60 mg/kg的試驗(yàn)飼料(H3、H4、H5)時(shí)，黃顙魚的成活率顯著降低，這可能是由于黃顙魚屬于有胃魚類，對(duì)組胺的刺激更敏感，高水平的組胺對(duì)黃顙魚產(chǎn)生了毒性作用，降低了其成活率；而投喂金槍魚粉飼料的黃顙魚的成活率也顯著降低，其可能的原因是紅魚粉與白魚粉在一般情況下相比，其高過氧化值更容易導(dǎo)致魚體損傷，從而導(dǎo)致成活率下降[5]，其具體原因還有待進(jìn)一步研究。

有結(jié)果顯示，飼料中低水平的組胺對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)具有正向的促進(jìn)作用，表明飼料組胺水平是關(guān)鍵點(diǎn)。Tapia-Salazar等[16]在對(duì)細(xì)角濱對(duì)蝦(Litopenaeusstylirostris)的研究中發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)飼料中添加適量的組胺與不添加組胺的對(duì)照組相比，細(xì)角濱對(duì)蝦獲得了更好的生長(zhǎng)效果；Opstvedt等[17]在給鮭(Salmosalar)投喂添加不同水平的混合生物胺飼料時(shí)，對(duì)其生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用，這與魚溶漿中生物胺對(duì)草魚影響的研究結(jié)果[14]也類似。在大西洋鰈[18](Hippoglossushippoglossus)、大菱鲆[19](Scophthalmusmaximus)、金頭鯛[20](Sparusaurata)等養(yǎng)殖魚類飼料中，用高新鮮度、含低劑量的生物胺的魚粉，其生長(zhǎng)高于用中、低等新鮮度且含較高劑量生物胺的魚粉。在本試驗(yàn)中，TFM、H0、H2、H3、H4和H5的組黃顙魚的特定生長(zhǎng)率顯著低于H1組，此結(jié)果也表明，飼料中適宜水平(18.00 mg/kg)的組胺有助于提高黃顙魚的生長(zhǎng)性能。

研究表明，生物胺對(duì)核酸功能的調(diào)節(jié)、蛋白質(zhì)的合成具有重要作用[21]。Watanabe等[22]在飼料中添加70 mg/kg組胺時(shí)觀察到了虹鱒蛋白質(zhì)效率的提高。飼料中添加不同水平的組胺對(duì)黃顙魚的蛋白質(zhì)沉積率、脂肪沉積率以及主要的魚體營(yíng)養(yǎng)成分沒有造成顯著性差異，但H1組即飼料的組胺含量為18.00 mg/kg的黃顙魚的蛋白質(zhì)效率和脂肪沉積率最高，這說明在飼料中添加適量的組胺能夠促進(jìn)黃顙魚對(duì)飼料中蛋白質(zhì)和脂肪的利用，從而促進(jìn)黃顙魚的生長(zhǎng)。

肝體比和臟體比是評(píng)價(jià)魚體健康的一類指標(biāo)，飼料中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)通常對(duì)肝胰臟的生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生影響[23]。在本試驗(yàn)結(jié)果中，飼料組胺水平對(duì)黃顙魚的肥滿度沒有顯著影響，H1組黃顙魚的臟體比相比于H2、H3、H4、H5組顯著增高，而這5組的肝體比沒有顯著差異，這可能是由于H1組較高的脂肪沉積導(dǎo)致黃顙魚內(nèi)臟重和內(nèi)臟脂肪的增加。

血清總蛋白和白蛋白的含量與魚體的健康以及營(yíng)養(yǎng)狀況密切相關(guān)[24]。本試驗(yàn)中，各組黃顙魚血清總蛋白和白蛋白的含量差異不顯著，但是從變化的趨勢(shì)來看，H1組的血清白蛋白含量最高，這有可能是因?yàn)檫m量水平的組胺加強(qiáng)了黃顙魚體內(nèi)的蛋白質(zhì)合成代謝。

甘油三酯和膽固醇都是血清的主要脂類，它們?cè)谝欢ǔ潭壬夏芊从橙淼闹惔x狀況[25]。膽固醇代謝是脂質(zhì)代謝的重要部分，血清中膽固醇含量的升高說明肝臟細(xì)胞功能發(fā)生障礙，機(jī)體脂質(zhì)代謝出現(xiàn)紊亂。高密度脂蛋白和低密度脂蛋白是一種血脂蛋白，低密度脂蛋白易引起膽固醇在血管中沉積，并與其他物質(zhì)一起堵塞血管；高密度脂蛋白能將肝臟外的膽固醇運(yùn)輸?shù)礁闻K分解排出體外。本試驗(yàn)中，各組黃顙魚的血清高密度脂蛋白含量差異不顯著，血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白含量有差異，其中H1組的血清總膽固醇和總甘油三酯含量較低，血清低密度脂蛋白含量也較低，這說明適量添加組胺有可能對(duì)提高黃顙魚機(jī)體脂質(zhì)代謝能力、降低血脂含量具有促進(jìn)作用。血清膽汁酸是由肝臟合成，當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生病變或患膽管疾病時(shí)可引起膽汁的代謝障礙，使血清膽總汁酸含量升高，血清總膽汁酸含量與肝細(xì)胞損傷程度呈正比[26]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，TFM、H0、H2、H3、H4組的血清總膽汁酸含量相比于H1組顯著升高，這表明黃顙魚的肝臟可能有一定程度的損傷。

血液中葡萄糖的來源主要是營(yíng)養(yǎng)的消化吸收和糖原的分解，據(jù)相關(guān)報(bào)道可知，葡萄糖是反映體內(nèi)碳水化合物代謝的重要生理指標(biāo)[27]。本試驗(yàn)中，對(duì)于白魚粉飼料中添加組胺的黃顙魚，隨著組胺添加水平的提高，其血清葡萄糖含量呈先升高后降低的趨勢(shì)，猜測(cè)低水平的組胺可能會(huì)使黃顙魚維持相對(duì)較高的代謝水平。

黃顙魚是一種體側(cè)具有黃色色斑、腹部為黃色的魚類，其皮膚色素主要為類胡蘿卜素和葉黃素。本試驗(yàn)分析了各組黃顙魚體側(cè)皮膚的類胡蘿卜素和葉黃素含量，各組之間沒有顯著差異。由此可見，本試驗(yàn)條件下的飼料組胺水平并未對(duì)黃顙魚的體色產(chǎn)生顯著影響。

因此，綜合上述分析，本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中低水平(18.00 mg/kg)的組胺對(duì)黃顙魚的生長(zhǎng)速度、飼料效率、魚體健康等具有正向的促進(jìn)作用，而高于這個(gè)劑量的飼料組胺水平對(duì)黃顙魚的生長(zhǎng)速度、飼料效率、魚體健康具有負(fù)面的不良影響。本試驗(yàn)條件下飼料組胺未對(duì)黃顙魚的皮膚色素含量產(chǎn)生影響。

3.2　飼料組胺水平對(duì)黃顙魚的胃黏膜表面結(jié)構(gòu)、腸道黏膜細(xì)胞之間緊密連接結(jié)構(gòu)的影響

一般認(rèn)為，飼料中組胺對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物的作用是通過胃腸道黏膜中的組胺受體(histamine receptor，HR)而產(chǎn)生的生理代謝作用。組胺通過與組胺受體結(jié)合發(fā)揮廣泛的生理或病理作用[28]，組胺所帶來的毒性影響因子可能會(huì)影響黃顙魚的重要組織的結(jié)構(gòu)和功能。從本試驗(yàn)對(duì)各組黃顙魚胃黏膜掃描電鏡觀察結(jié)果看，飼料添加高水平的組胺(H4、H5組)對(duì)黃顙魚的胃黏膜細(xì)胞造成了明顯的損傷，黏膜表面出現(xiàn)細(xì)胞微絨毛缺失等現(xiàn)象。Fairgrieve等[29]和Watanabe等[22]用組胺含量2 000 mg/kg以上的魚粉飼喂虹鱒時(shí)發(fā)現(xiàn)其胃產(chǎn)生了嚴(yán)重的生理病變。本試驗(yàn)中，在飼料組胺水平達(dá)到103.50 mg/kg時(shí)就觀察到了胃黏膜的明顯損傷，這可能是由于魚的種類不同而導(dǎo)致其對(duì)組胺的耐受性有較大的差異。黃顙魚胃黏膜的損傷可能導(dǎo)致胃酸分泌、嘔吐(吐料)的情況，本試驗(yàn)過程中，沒有觀察到明顯的吐料情況，但顯微觀察結(jié)果顯示，高飼料組胺水平組的魚體胃黏膜表面結(jié)構(gòu)有較為嚴(yán)重的損傷。

組胺對(duì)腸道黏膜影響的研究報(bào)告不多。腸道黏膜屏障中，主要依賴黏膜細(xì)胞之間的緊密連接結(jié)構(gòu)、縫隙連接結(jié)構(gòu)等形成完整的物理性結(jié)構(gòu)屏障，這是腸道黏膜通透性保持的物理性結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。本文通過透射電鏡觀察了黃顙魚腸道黏膜細(xì)胞之間的緊密連接結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明，飼料組胺水平對(duì)黃顙魚腸道黏膜細(xì)胞之間的連接結(jié)構(gòu)有一定程度的損傷作用，損傷程度與飼料組胺水平有一定的線性關(guān)系。在H4、H5組黃顙魚腸道黏膜細(xì)胞間的連接結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯的損傷狀態(tài)，這2組飼料中組胺水平大于103.50 mg/kg。段甦等[30]觀察到組胺可以降低人皮膚角化上皮細(xì)胞的屏障功能，與本文的結(jié)果有相似之處。有研究表明，合適劑量的外源性精胺可在腸腔內(nèi)快速被小腸黏膜上皮細(xì)胞吸收[31]，在微顆粒飼料中添加0.10%(1 000 mg/kg)的精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(CynoglossussemilaevisGünther)腸道發(fā)育有促進(jìn)作用,能夠增加其小腸微絨毛長(zhǎng)度和黏膜厚度[32]。本試驗(yàn)飼料生物胺檢測(cè)結(jié)果顯示，飼料精胺含量最高為20.00 mg/kg，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于對(duì)腸道發(fā)揮促進(jìn)作用的0.10%(1 000 mg/kg)精胺添加量，且本試驗(yàn)各組飼料精胺含量無顯著差異，因此本試驗(yàn)中低含量的飼料精胺可能不足以減輕組胺帶來的腸道損傷或者并未起到對(duì)腸道的保護(hù)作用。

綜合上述結(jié)果和分析，表明飼料中低于103.50 mg/kg的組胺水平?jīng)]有對(duì)黃顙魚的胃黏膜表面結(jié)構(gòu)、腸道黏膜細(xì)胞之間的連接結(jié)構(gòu)造成損傷作用，而大于這個(gè)水平則表現(xiàn)出了對(duì)胃黏膜細(xì)胞、腸道黏膜細(xì)胞之間緊密連接結(jié)構(gòu)的損傷作用。

4　結(jié)　論

① 飼料組胺水平對(duì)黃顙魚生長(zhǎng)性能、魚體健康的影響具有劑量效應(yīng)，飼料中低劑量的組胺對(duì)黃顙魚生長(zhǎng)速度、飼料效率、魚體健康等沒有顯著影響。

② 飼料組胺水平達(dá)到103.50 mg/kg及以上時(shí)，黃顙魚的胃黏膜細(xì)胞、腸道黏膜細(xì)胞之間的緊密連接結(jié)構(gòu)出現(xiàn)損傷。

③ 血清總膽汁酸含量隨飼料組胺水平的增加而下降，飼料組胺水平未對(duì)黃顙魚的體色產(chǎn)生不良影響。