楊 帆，李東豫，袁 藝

(河南省第二人民醫(yī)院 1.婦產(chǎn)科；2.病理科， 河南 新鄭451191)

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，占據(jù)女性惡性腫瘤死亡率第二位，而腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)是其致死的主要因素，早診斷、早治療是提高宮頸癌遠(yuǎn)期生存率的重要方法[1]。已有研究證實(shí)Capn4和Ki-67與結(jié)腸癌等惡性腫瘤的侵襲、發(fā)展密切相關(guān)[2]。本研究通過(guò)檢測(cè)Capn4和Ki-67在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床意義，進(jìn)一步探討宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等過(guò)程的具體機(jī)制[3]。

1 資料與方法

1.1一般資料

于2015年6月-2016年12月，選擇我院擇期行宮頸癌根治術(shù)患者的癌組織病理蠟塊70例作為實(shí)驗(yàn)組，選取因子宮脫垂等其它良性病變行子宮切除術(shù)的正常宮頸組織病理蠟塊35例作為對(duì)照組，所有蠟塊均經(jīng)術(shù)后病理確診。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者臨床資料完整；TNM分期Ⅰ-Ⅳ期；術(shù)前未接受過(guò)任何針對(duì)宮頸癌的治療。實(shí)驗(yàn)組年齡在28-85歲之間，中位數(shù)是60歲；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者40例，未轉(zhuǎn)移者30例；分化級(jí)別高分化31例，中分化28例，低分化11例；TNM分期Ⅰ期和Ⅱ期29例；Ⅲ期和Ⅳ期41例。TNM分期遵循國(guó)際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)(FIGO)及國(guó)際婦產(chǎn)腫瘤協(xié)會(huì)(IGCS)制定的最新《婦科惡性腫瘤分期及臨床實(shí)踐指南》。

1.2方法

實(shí)驗(yàn)組所有病理蠟塊均采用免疫組織化學(xué)S-P法，蠟塊切片水化后，使用蒸餾水和PBS分別沖洗，甩掉多余的血清后分別滴加一抗：濃度為1∶300的兔抗人Capn4多克隆抗體(大連微生物庫(kù)存所)、濃度為1∶100的鼠抗人Ki-67單克隆抗體(大連市金宇生物技術(shù)有限公司，)孵育過(guò)夜，PBS沖洗后滴加二抗，蘇木素染色后顯微鏡下觀察。對(duì)照組使用PBS代替所有其他試劑。

1.3觀察指標(biāo)

Capn4蛋白主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，Ki-67蛋白主要在細(xì)胞核中表達(dá)。細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)是：5個(gè)400倍視野中陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)目所占百分率≤5%記0分，6%-25%記1分，26%-50%記2分，51%-75%記3分，>75%記4分；顯色強(qiáng)度中未著色者記0分，淡黃色記1分，深黃色記2分，深褐色記3分。數(shù)目+顯色記分≥3即為陽(yáng)性。細(xì)胞核陽(yáng)性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)是：5個(gè)高倍鏡視野陽(yáng)性細(xì)胞占百分率≥10%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用 SPSS20.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)及秩和檢驗(yàn)；數(shù)據(jù)間相關(guān)性采用Spearman分析，P<0.05即有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.12組患者Capn4和Ki-67的表達(dá)

宮頸癌組織中Capn4和Ki-67的表達(dá)率分別是72.9%(51/70)、85.7%(60/70)顯著高于正常宮頸組織(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 2組患者Capn4蛋白和Ki-67蛋白的表達(dá)

注：*P<0.05與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2.2宮頸癌組織中Capn4和Ki-67蛋白的表達(dá)水平與其臨床病理特點(diǎn)的相關(guān)性

浸潤(rùn)范圍方面，侵及漿膜層組宮頸癌組織中Capn4和Ki-67蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率分別為85.2%和96.3%，顯著高于未侵及漿膜層組(P<0.05)；TNM分期方面，Ⅲ-Ⅳ期宮頸癌組織中Capn4和Ki-67蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率分別為95.1%和97.6%，顯著高于Ⅰ-Ⅱ期組(P<0.05)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中Capn4和Ki-67蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率分別為95.0%和90.7%，顯著高于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組(P<0.05)，而兩者的表達(dá)水平在患者的年齡及腫瘤分化程度分級(jí)中無(wú)明顯差異(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 Capn4蛋白、Ki-67蛋白表達(dá)與宮頸癌臨床特點(diǎn)的相關(guān)性

3 討論

Capn4是Calpains家族中的一個(gè)小亞基，目前研究證實(shí)，Capn4在維持細(xì)胞的正常功能中起到重要作用[4]，對(duì)細(xì)胞的凋亡起到促進(jìn)和抑制的雙向作用，近幾年研究證實(shí)Capn4在肝癌、腎透明細(xì)胞癌、鼻咽癌、直腸癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等過(guò)程中發(fā)揮重要作用[5]。本研究經(jīng)免疫組化檢測(cè)結(jié)果提示宮頸癌組織中Capn4的表達(dá)率高達(dá)72.9%顯著高于正常宮頸組織(P<0.05)，且其表達(dá)水平與宮頸癌的浸潤(rùn)深度(侵及漿膜層者85.2%)、TNM分期(Ⅲ-Ⅳ期95.1%)、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者95.0%)密切相關(guān)。細(xì)胞核增殖指數(shù)(Ki-67)是細(xì)胞的分裂及增殖活性的標(biāo)志物，其表達(dá)水平越高，提示細(xì)胞的分裂及增殖活性越高[6]，目前已有研究證實(shí)Ki-67在胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌中表達(dá)明顯升高且其表達(dá)水平與惡性腫瘤的浸潤(rùn)范圍、TNM分期及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究中，宮頸癌組織中Ki-67的表達(dá)率高達(dá)85.7%顯著高于正常宮頸組織(P<0.05)，且其表達(dá)水平與宮頸癌的浸潤(rùn)深度(侵及漿膜層者96.3%)、TNM分期(Ⅲ-Ⅳ期97.6%)、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者90.7%)密切相關(guān)，驗(yàn)證了以往研究的結(jié)果，也進(jìn)一步證明了Ki-67在預(yù)測(cè)宮頸癌中的重要價(jià)值。

綜上所述，宮頸癌組織中Capn4和Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率較正常宮頸組織顯著升高且與宮頸癌組織的浸潤(rùn)范圍、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，分期越晚、浸潤(rùn)范圍越廣、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性者其表達(dá)水平越高，提示兩者可能成為預(yù)測(cè)宮頸癌的敏感指標(biāo)且能起到評(píng)估宮頸癌惡性程度的作用，為宮頸癌的早期診斷及治療提供了新的臨床思路。

作者簡(jiǎn)介：楊帆(1982-),女,河南新鄭人，本科學(xué)歷，河南省第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科主治醫(yī)師。