楊博學(xué)　李泊巖　姜晨

摘要：通過(guò)研究MS-222對(duì)紅鰭東方鮑（Takifugurubripes）幼魚(yú)血液生化指標(biāo)的影響，以對(duì)其使用安全性及麻醉機(jī)理的分析提供依據(jù)。分別使用20、40、60mg/L等不同濃度的MS-222麻醉紅鰭東方鮑幼魚(yú)，測(cè)定麻醉后1/4、4、8、24h和復(fù)蘇后24h魚(yú)體血糖（GLU），血清中總蛋白（TP）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽紅素（T-BIL）、尿素氮（BUN）等血液生化指標(biāo)和血清溶菌酶（LZM）的活性。結(jié)果表明，使用MS-222麻醉對(duì)紅鰭東方鮑幼魚(yú)的大部分血液生化指標(biāo)和血清溶菌酶活性均有顯著影響，且在高麻醉濃度下，這種影響更加顯著。使用MS-222麻醉復(fù)蘇24h后，紅鰭東方鮑幼魚(yú)的大多數(shù)血液生化指標(biāo)和血清溶菌酶活性尚未恢復(fù)至麻醉前水平。

關(guān)鍵詞：MS-222；紅鰭東方鮑（Takifugu rubripes）；血液生化指標(biāo)

紅鰭東方純（Takifugu rubripes）肉質(zhì)細(xì)嫩、營(yíng)養(yǎng)豐富，是目前國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖較為成功的海水魚(yú)類之一。MS-222全名為間氨基苯甲酸乙酯甲基磺酸鹽，作為水生動(dòng)物麻醉劑具有易處理、效力迅速、安全性高、水溶性好等特點(diǎn)，被美國(guó)國(guó)家食品及藥物管理局（FDA）批準(zhǔn)為漁用麻醉劑。在幼魚(yú)和其他方面當(dāng)中同樣得到廣泛的應(yīng)用，尤其在運(yùn)輸當(dāng)中，有利于對(duì)魚(yú)進(jìn)行相關(guān)操作。

血液生化指標(biāo)可以反應(yīng)魚(yú)類的生理狀況、健康狀況和營(yíng)養(yǎng)水平。為此，通過(guò)測(cè)量紅鰭東方純幼魚(yú)在麻醉過(guò)程中和麻醉復(fù)蘇后血液生化指標(biāo)的變化，著重分析麻醉劑對(duì)試驗(yàn)魚(yú)應(yīng)激及對(duì)肝腎等器官功能造成的影響，以期為MS一222麻醉紅鰭東方純幼魚(yú)的安全及麻醉機(jī)理的分析提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)用魚(yú)

紅鰭東方純幼魚(yú)規(guī)格為40～55g，購(gòu)自大連富谷水產(chǎn)有限公司。魚(yú)體健康、無(wú)病。試驗(yàn)前停食24h。

1.2試驗(yàn)用水

試驗(yàn)海水為經(jīng)過(guò)濾后的大連黑石礁海區(qū)海水。水溫18～20℃，鹽度32‰，溶解氧大于7mg/L，總氨氮小于0.05mg/L，亞硝酸鹽小于0.01mg/L。

1.3試驗(yàn)器材

溶菌酶（LZM）試劑盒（比濁法）購(gòu)自南京建成生物科技公司。麻醉試驗(yàn)用200L塑料圓桶、加水用10L塑料桶、電子秤、移液槍（1mL和5mL）、1mL無(wú)菌注射器、冰盤(pán)、冷凍離心機(jī)、水浴鍋、1.5mL離心管、-80℃冰箱、計(jì)時(shí)器、比色皿（0.5cm和1cm）、722分光光度計(jì)。

1.4試驗(yàn)方法

1.4.1MS-222溶液的配制 試驗(yàn)前將同濃度的溶液一次性配置，準(zhǔn)確稱取相應(yīng)質(zhì)量的藥品，在燒杯中使用玻璃棒攪拌溶解，待全部溶解后加入盛有相應(yīng)體積水的120L塑料箱，混勻后待用。

1.4.2試驗(yàn)濃度的選定及分組 設(shè)定一個(gè)對(duì)照組不麻醉幼魚(yú)，用K表示。MS-222麻醉試驗(yàn)組用M表示，M后第一個(gè)數(shù)字表示濃度，1、2、3分別對(duì)應(yīng)20、40、60mg/L。各組分別在麻醉1/4、4、8、24h和復(fù)蘇后24h時(shí)取血清測(cè)量其生化指標(biāo)和血清溶菌酶濃度。每桶麻醉試驗(yàn)魚(yú)30尾，每個(gè)時(shí)間段隨機(jī)取魚(yú)5尾，采血待測(cè)。

1.4.3采血及測(cè)定 取特定麻醉時(shí)間段試驗(yàn)魚(yú)，放人鋪好紗布的冰盤(pán)中，用濕紗布將試驗(yàn)魚(yú)頭部蒙住，再用1mL一次性無(wú)菌注射器在試驗(yàn)魚(yú)尾部采血，分裝入4～5個(gè)離心管，在4℃冷凍離心機(jī)中12000r/min離心10min后取3份大于300肚L的上清液樣品送至大連市體檢中心。測(cè)量血清生化指標(biāo)：血糖、總蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素、尿素氮。余下血清待測(cè)溶菌酶（LZM），酶的測(cè)定使用南京建成有限公司試劑盒，采用比濁法中的自身對(duì)照法測(cè)定，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行相關(guān)操作，溶菌酶1g=80U。

1.5數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果用SPSS statistics17.0進(jìn)行處理，在單因素方差分析的基礎(chǔ)上采用Duncan多重比較分析數(shù)據(jù)，試驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，P<0.05時(shí)差異顯著。

2結(jié)果與分析

2.1麻醉劑對(duì)紅鰭東方純幼魚(yú)血糖（GLU）的影響

由表1所示，部分麻醉組與對(duì)照組GLU有顯著差異。對(duì)照組GLU在24h內(nèi)較穩(wěn)定，48h后各組GLU較麻醉1/4h時(shí)均降低。麻醉組在麻醉過(guò)程中只有M3組一直與對(duì)照組差異不顯著，其他各組均顯示為1/4h時(shí)GLU升高。M1組麻醉4、8h時(shí)與對(duì)照組GLU差異不顯著。M2組在麻醉4、8h時(shí)GLU均顯著高于對(duì)照組，M1、M2組在麻醉24h時(shí)GLU顯著低于對(duì)照組，且在復(fù)蘇后24h時(shí)GLU顯著高于對(duì)照組。

2.2麻醉劑對(duì)紅鰭東方純幼魚(yú)血清總蛋白（TP）的影響

由表2所示，麻醉1/4h時(shí)各組血清TP與對(duì)照組無(wú)顯著差異。麻醉4、8、24h時(shí)M3組血清TP顯著低于對(duì)照組，M1、M2組麻醉24h時(shí)血清TP顯著低于對(duì)照組，其他各組麻醉時(shí)間內(nèi)血清TP與對(duì)照組差異不顯著。復(fù)蘇24h后各組血清TP與對(duì)照組差異不顯著。

2.3麻醉劑對(duì)紅鰭東方純幼魚(yú)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）的影響

由表3所示，麻醉組試驗(yàn)魚(yú)在麻醉1/4h時(shí)ALT活性與對(duì)照組差異不顯著。M1、M2組與對(duì)照組無(wú)顯著差異，M3組從麻醉4h開(kāi)始血清中ALT要顯著高于對(duì)照組。復(fù)蘇24h后，M3組血清中ALT濃度仍顯著高于對(duì)照組。2.4麻醉劑對(duì)紅鰭東方純幼魚(yú)血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）的影響

由表4所示，麻醉組試驗(yàn)魚(yú)在麻醉1/4h時(shí)AST活性與對(duì)照組差異不顯著，麻醉4h、8h和24h時(shí)M3組AST活性顯著高于對(duì)照組。M2組在麻醉24h時(shí)AST活性顯著高于對(duì)照組。復(fù)蘇24h后各組AST活性均與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

2.5麻醉劑對(duì)紅鰭東方純幼魚(yú)血清總膽紅素（T-BIk）的影響

由表5所示，麻醉各組麻醉時(shí)T-BIL均顯著高于對(duì)照組。復(fù)蘇24h后各組與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

2.6麻醉劑對(duì)紅鰭東方純幼魚(yú)血清尿素氦（BUN）的影響

由表6所示，試驗(yàn)魚(yú)在麻醉4、8h時(shí)，M3組血清BUN顯著低于對(duì)照組，其他組差異不明顯。試驗(yàn)魚(yú)在麻醉24h時(shí)麻醉各組BUN顯著低于對(duì)照組；試驗(yàn)魚(yú)在復(fù)蘇24h后M2、M3組BUN顯著低于對(duì)照組。

2.7麻醉劑對(duì)紅鰭東方純幼魚(yú)血清溶菌酶（LZM）的影響

由表7所示，試驗(yàn)魚(yú)在麻醉期間，M1組血清中LZM活性魚(yú)對(duì)照組始終無(wú)顯著差異，M2、M3組血清中LZM活性顯著高于對(duì)照組。復(fù)蘇24h后各組LZM活性均顯著高于對(duì)照組。

3討論

3.1麻醉劑對(duì)紅鰭東方純幼魚(yú)血液生化指標(biāo)的影響

血糖是一個(gè)應(yīng)激指標(biāo)，受攝食狀態(tài)和環(huán)境條件等因素的干擾，試驗(yàn)魚(yú)試驗(yàn)前全部停食24h，使試驗(yàn)魚(yú)達(dá)到消化吸收后狀態(tài)。表1所示對(duì)照組試驗(yàn)魚(yú)血糖24h內(nèi)一直處于較穩(wěn)定的狀態(tài)，在復(fù)蘇后24h有所降低。說(shuō)明試驗(yàn)魚(yú)在未受到麻醉等外界因素脅迫時(shí)血糖24h內(nèi)處于較穩(wěn)定的狀態(tài)，48h時(shí)血糖略有降低。而麻醉組除M3組外其他各組在麻醉1/4h時(shí)血糖濃度均顯著高于對(duì)照組。這可能與試驗(yàn)魚(yú)受到外界環(huán)境突變產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)，一方面試驗(yàn)魚(yú)需要耗能來(lái)維持機(jī)體穩(wěn)定，加快了肝糖原和肌糖原的分解，另一方面，試驗(yàn)魚(yú)被麻醉活動(dòng)耗能并受到抑制。M2組4、8h時(shí)要顯著高于對(duì)照組，導(dǎo)致此結(jié)果可能是由應(yīng)激加快糖原分解的速度與代謝消耗的不平衡導(dǎo)致。M1組由于麻醉劑濃度較低，試驗(yàn)魚(yú)對(duì)其慢慢適應(yīng)，與對(duì)照組差異不顯著，故此濃度不能長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)達(dá)到麻醉效果。而M3組血糖整體處于下降趨勢(shì)，與對(duì)照組無(wú)顯著影響，可能由于MS-222濃度過(guò)高導(dǎo)致在短時(shí)間內(nèi)使試驗(yàn)魚(yú)達(dá)到深度麻醉狀態(tài)，抑制代謝耗能的同時(shí)抑制了神經(jīng)中樞，從而抑制糖原的分解。且復(fù)蘇后糖原水平要明顯低于對(duì)照組水平，說(shuō)明高濃度的麻醉劑對(duì)試驗(yàn)魚(yú)產(chǎn)生了短期內(nèi)的較嚴(yán)重影響。

肝臟是機(jī)體代謝的重要器官，血清蛋白主要在肝臟中合成的，血清總蛋白可以間接反映出肝臟的健康狀況。試驗(yàn)結(jié)果顯示，在4～24h時(shí)間段內(nèi)，血清總蛋白顯著低于對(duì)照組，說(shuō)明此濃度下麻醉劑在麻醉1/4h時(shí)對(duì)試驗(yàn)魚(yú)肝臟的影響小，麻醉4～24h時(shí)，麻醉劑對(duì)試驗(yàn)魚(yú)肝臟的影響顯著。M2組在麻醉1/4～8h時(shí)試驗(yàn)魚(yú)血清總蛋白與對(duì)照組差異不顯著，麻醉24h時(shí)試驗(yàn)魚(yú)血清總蛋白顯著低于對(duì)照組。說(shuō)明隨麻醉時(shí)間的延長(zhǎng)，試驗(yàn)魚(yú)肝臟受影響程度加深。

MS-222對(duì)紅鰭東方純幼魚(yú)血清ALT影響結(jié)果表明，在1/4h時(shí)麻醉組試驗(yàn)魚(yú)谷丙轉(zhuǎn)氨酶與對(duì)照組差異不顯著，徐濱對(duì)鱘魚(yú)類麻醉3min，10min后取樣得出MS-222組ALT與對(duì)照組差異不顯著，這個(gè)結(jié)果與本試驗(yàn)相同。本試驗(yàn)M1、M2組與對(duì)照組無(wú)顯著差異，此結(jié)果說(shuō)明MS-222濃度不超過(guò)40mg/L則不會(huì)造成影響。M3組從4h開(kāi)始ALT顯著高于對(duì)照組，結(jié)果說(shuō)明較高濃度的MS-222溶液較長(zhǎng)時(shí)間麻醉會(huì)造成組織細(xì)胞的受損。當(dāng)MS-222濃度為60mg/L時(shí)麻醉24h，麻醉過(guò)程中試驗(yàn)魚(yú)部分組織細(xì)胞受損使血液中ALT濃度增加，復(fù)蘇24h后可以恢復(fù)到正常水平，這與徐啟明研究結(jié)果相同。MS-222對(duì)紅鰭東方純幼魚(yú)血清AST影響結(jié)果與ALT結(jié)果一致，說(shuō)明使用較高濃度的MS-222較長(zhǎng)時(shí)間的麻醉（>4h）會(huì)使試驗(yàn)魚(yú)的肝臟、心臟中某些組織受損，這與齊紅莉等對(duì)美洲鰣的研究結(jié)果一致。

3.2麻醉劑對(duì)紅鰭東方純幼魚(yú)血清溶菌酶的影響

溶菌酶是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶，能夠水解細(xì)菌的細(xì)胞壁，使細(xì)菌溶解。溶菌酶還可與帶浮點(diǎn)的病毒蛋白直接結(jié)合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活，擔(dān)負(fù)機(jī)體內(nèi)的防御。試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)魚(yú)在麻醉時(shí)間內(nèi)M1組血清中溶菌酶活性與對(duì)照組始終無(wú)顯著差異，說(shuō)明較低濃度的麻醉劑對(duì)紅鰭東方純幼魚(yú)血清中溶菌酶的活性無(wú)影響。M2、M3組血清中溶菌酶活性顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明MS-222濃度40～60mg/L時(shí)，試驗(yàn)魚(yú)產(chǎn)生代償性應(yīng)激，進(jìn)而增強(qiáng)免疫力。

（收稿日期：2017-12-16）