山綠茶(Ilex hainanensis Merr)屬冬青科冬青屬植物，多用其干燥葉，具有清熱解毒，平肝潛陽，活血化瘀的功效［1］，用于降血壓、降血脂、降膽固醇及冠心病、腦血管意外所致的偏癱以及風(fēng)熱感冒、肺熱咳嗽、咽喉水腫、扁桃體炎、痢疾等病癥［2］。其主要化學(xué)成分包含黃酮類、三萜酸類、綠原酸及山綠茶苷等，而經(jīng)過不同方法炮制后的山綠茶中化學(xué)成分含量也各不相同。近年對糖尿病小鼠、高脂鵪鶉以及麻醉貓進行降血糖、降血脂、降血壓的研究，結(jié)果顯示山綠茶醇提物具有降糖，降脂，降壓作用，且降血糖作用機制可能與胰島素分泌增加有關(guān)［3-4］。本課題早期研究發(fā)現(xiàn)不同炮制方法的醇提物總黃酮含量不同，以清炒炮制含量最高，本研究以此為基礎(chǔ)，對山綠茶3種不同炮制品的醇提物對正常小鼠糖耐量可能產(chǎn)生的影響進行研究。

1 材料與方法

1.1動物SPF級昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g，廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物許可證號：SCXK桂2014-001，飼養(yǎng)環(huán)境：恒溫恒濕。

1.2儀器與試劑TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；配套放免專用冷凍離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)；LG16-W型離心機(北京醫(yī)用離心機廠)；AE100型1/10000電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；葡萄糖(Glu，石家莊市華營聯(lián)合Glu廠，批號：023974)；鹽酸腎上腺素注射液(Adr，天津金耀氨基酸有限公司，批號：021121，規(guī)格：l mg/mL)；Glu試劑盒(四川省邁克科技有限責(zé)任公司，批號：0941365)。

1.3醇提物本藥材經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)陳勇教授鑒定，符合廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)(1990年版)山綠茶項下藥材品種，鑒定為冬青科冬青屬植物海南冬青的干燥葉。清炒炮制法：將山綠茶鮮葉置于炒鍋中，用中火或武火加熱，炒至藥材表面呈焦黃或焦褐色，內(nèi)部顏色加深，有焦香氣味時即可取出，后用70%乙醇回流提取2次，分別為10倍乙醇10小時和8倍乙醇1.5小時，合并濾液，回收乙醇濃縮后備用；傳統(tǒng)炮制法：將山綠茶的鮮葉用熱鍋(260～280℃)翻炒 5分鐘，殺青，后用手揉搓，其次復(fù)炒2～3次，至葉色呈暗綠色，略有光澤為宜，取出，放涼，醇提方法同前；陰干炮制法：將山綠茶鮮藥材放在陰涼處晾干即可，醇提方法同前。后以綠原酸和蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)采用高效液相色譜法測其黃酮類成分含量，見表1。

表1 山綠茶3種不同炮制品中蘆丁和綠原酸含量 mg/g

1.4實驗方法［5］

1.4.1 對口服葡萄糖致瞬時高血糖(Glu性)小鼠糖耐量的影響 正常小鼠120只，隨機分為12組，灌胃給藥含生藥 20、15、10 g/kg藥物，其中15 g/kg為早期預(yù)實驗結(jié)果提示的山綠茶對小鼠血糖的有效濃度，在此基礎(chǔ)上，增加和減小相應(yīng)濃度觀察各炮制品藥效學(xué)。給藥14天后禁食12小時，然后各組小鼠給藥0.5小時后，眼眶取血測空腹0小時(即時)血糖。0.5小時后除空白組小鼠腹腔注射(ig)等量生理鹽水外，其余小鼠均ig Glu溶液2.5g/kg，眼眶取血測定給予Glu后0.5、1、2小時的血糖值。按Glu試劑盒GOD-POD法測空腹血糖值。并以空腹血糖值作為零時，計算不同時間血糖值的變化。

1.4.2 對腹腔注射腎上腺素致瞬時高血糖(Adr性)小鼠糖耐量的影響 正常小鼠120只，隨機分為12組，分組、給藥及給藥劑量同“1.4.1”項下方法，給藥14天后禁食12小時，然后各組小鼠給藥0.5小時，取血測空腹0小時(即時)血糖。0.5小時后除空白組小鼠ig等量生理鹽水外，其余小鼠均 ig Adr 240 mg/kg，測定給予 Adr 后 0.5、1、2 小時的血糖值。按Glu試劑盒GOD-POD法測空腹血糖值，并以空腹血糖值作為零時，計算不同時間血糖值的變化。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 13.0軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以(±s)表示，采用t檢驗，方差不齊采用t檢驗校正公式，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1山綠茶3種不同炮制品醇提物對G l u性小鼠糖耐量的影響模型組較空白組血糖升高(P＜0.01)，給藥前各給藥組間血糖比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，說明葡萄糖負(fù)荷成功；與模型組比較，灌胃Glu后0.5小時，傳統(tǒng)品(20、15g/kg)組以及清炒品和陰干品各劑量組對Glu引起高血糖小鼠血糖升高均有抑制作用(P＜0.01)。給藥后1，2 小時時傳統(tǒng)品(20、15g/kg)組、清炒品(20g/kg)組、陰干品(20、15 g/kg)組仍有抑制血糖升高的作用(P＜0.05)，提示山綠茶3種不同炮制品醇提物對Glu性高血糖小鼠均有治療作用，見表2。

表2 山綠茶3種不同炮制品對G l u性高血糖小鼠血糖的影響

2.2山綠茶3種不同炮制品醇提物對A dr性小鼠糖耐量的影響模型組較空白組血糖升高(P＜0.01)，且給藥前各給藥組間比較無明顯差異(P＞0.05)，說明造模成功；與模型組比較，ig Adr后0.5、1 小時傳統(tǒng)品(20、15 g/kg)劑量組、清炒品(20、15 g/kg)組和陰干品(20 g/kg)組對Adr引起高血糖小鼠血糖升高均有抑制作用(P＜0.01)。ig Adr后1小時3個炮制品低劑量(10 g/kg)組對高血糖小鼠血糖升高無降低作用(P＞0.05)。提示山綠茶3種不同炮制品醇提物對Adr性高血糖小鼠均有治療作用，見表3。

表3 山綠茶3種不同炮制品對A dr性小鼠血糖的影響

3 討論

糖耐量減低是糖尿病發(fā)展過程中的一個中間階段，若干年后這些人群大多數(shù)可能會發(fā)展為糖尿病［6］，而且糖耐量減低人群大血管病變的發(fā)生率較普通人群高。因此，防止由糖耐量減低發(fā)展為糖尿病，甚至使之恢復(fù)到正常糖耐量是防治糖尿病的一項重要措施，也是評價糖尿病防治藥物的一個重要指標(biāo)［7］。在血糖濃度調(diào)節(jié)中，肝臟是一重要器官，其工作受神經(jīng)和激素控制，其中包括胰島素、胰高血糖素、Adr等。本研究探討山綠茶3種不同炮制品的醇提物對正常小鼠糖耐量的干預(yù)作用，結(jié)果表明山綠茶3種不同炮制品醇提物可抵抗Adr性糖尿病小鼠血糖上升，并且抑制外源性Glu引起的血糖升高，結(jié)合山綠茶富含黃酮類、三萜及其皂苷類、咖啡?？鼘幩犷惡桶胼栖疹惖然瘜W(xué)成分［8-9］，提示其降糖作用與山綠茶3種不同炮制品中總黃酮有關(guān)［10-11］。在已發(fā)現(xiàn)黃酮類中，蘆丁和綠原酸的作用是清除細(xì)胞活性氧自由基，而蘆丁與綠原酸已成為山綠茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用較多的對照品［12］。本研究結(jié)果表明清炒組的綠原酸和蘆丁的含量最高，但其具體耐糖機理并不十分清楚。本研究后期發(fā)現(xiàn)山綠茶降糖機制可能與增加正常小鼠肝糖元的貯存，減少肝糖元分解，促進糖的有氧氧化而加速糖元合成等因素有關(guān)。這一發(fā)現(xiàn)為山綠茶進一步開發(fā)成為防治糖尿病的藥物提供了一定理論依據(jù)。