余杰穎，任軻亮，薛文鵬，林 艷，龍育堂，文曉鵬，陳紅遠(yuǎn)，耿 坤*

(1.貴陽(yáng)市植保植檢站，貴州 貴陽(yáng) 550081；2.清鎮(zhèn)市農(nóng)業(yè)局，貴州 貴陽(yáng) 551400；3. 貴州大學(xué)農(nóng)業(yè)生物工程研究院/生命科學(xué)院，山地植物資源保護(hù)與種質(zhì)創(chuàng)新省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550025;4.貴陽(yáng)市種子管理站，貴州 貴陽(yáng) 550081)

煙草是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物之一，對(duì)我國(guó)社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展起著舉足輕重的作用[1-3]。近年來(lái)，煙草白粉病(Erysiphecichoracearum)在我國(guó)西南各煙草種植區(qū)域持續(xù)發(fā)生危害，又重新成為我國(guó)煙草上的主要病害。目前生產(chǎn)上防治煙草白粉病以化學(xué)藥劑如三唑醇等為主，由于該病發(fā)生特點(diǎn)等問(wèn)題極易導(dǎo)致農(nóng)藥殘留超標(biāo)，研究利用生物藥劑是解決該問(wèn)題的有效方法之一。對(duì)于煙草病蟲(chóng)害生物防治，目前國(guó)內(nèi)許多專家學(xué)者已進(jìn)行了大量研究報(bào)道[4-11]。解淀粉芽孢桿菌與假單胞菌作為一種新型生防微生物,在植物病害的生物防治研究領(lǐng)域越來(lái)越受到關(guān)注[12-17]。國(guó)內(nèi)有關(guān)研究報(bào)道表明，解淀粉芽孢桿菌與假單胞菌對(duì)煙草青枯病、花葉病、黑脛病等有抑制作用[18-21]，但對(duì)煙草白粉病田間防效研究還未見(jiàn)報(bào)道。本研究對(duì)貴州大學(xué)農(nóng)業(yè)生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供的解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)D1、DEB-2及缺陷假單胞菌(Pseudomonasdiminuta)HD13防治煙草白粉病田間防效進(jìn)行了初步研究，以期為煙草白粉病的生物防治及該生防菌的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試作物 供試作物：煙草，2015年品種為南江3號(hào)，2016年品種為云煙85；試驗(yàn)對(duì)象：煙草白粉病(ErysiphecichoracearumDC)。

1.1.2 供試藥劑 解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)D1發(fā)酵液,解淀粉芽孢桿菌DEB-2可濕性粉劑,缺陷假單胞菌(Pseudomonasdiminuta)HD13發(fā)酵液，由貴州大學(xué)農(nóng)業(yè)生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.3 對(duì)照藥劑 5%己唑醇懸浮劑，市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)。

1.2 試驗(yàn)方法 試驗(yàn)分別于2015及2016年2年開(kāi)展。2015年選擇在貴陽(yáng)市清鎮(zhèn)市麥格鄉(xiāng)新寨村煙地進(jìn)行，試驗(yàn)地2 001 m2。2016年選擇在貴陽(yáng)市清鎮(zhèn)市紅楓湖鎮(zhèn)蘆荻哨村煙地進(jìn)行，試驗(yàn)地1 334 m2，種植密度均為1 100株/667m2。

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 2015年實(shí)驗(yàn)設(shè)6個(gè)處理(表1)，每個(gè)處理3次重復(fù)，共18個(gè)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)面積40 m2(植煙2行)，小區(qū)之間設(shè)保護(hù)行(植煙1行)，小區(qū)隨機(jī)排列。

表1 2015年試驗(yàn)處理

2016年實(shí)驗(yàn)設(shè)8個(gè)處理(表2)，每個(gè)處理3次重復(fù)，共24個(gè)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)面積40m2(植煙2行)，小區(qū)之間設(shè)保護(hù)行(植煙1行)，小區(qū)隨機(jī)排列。

表2 2016年試驗(yàn)處理

1.2.2 施藥方法 利用背負(fù)式手動(dòng)噴霧器(3WBD—16A)，容量16L，噴霧壓力0.14～0.4 Mpa，在病害初發(fā)生時(shí)施藥，按1 920kg/hm2藥液噴霧，全株均勻噴霧。處理A、C噴施發(fā)酵液原液，處理B、D噴施稀釋1倍液發(fā)酵液原液，其余處理按照試驗(yàn)制劑量?jī)端畤婌F。2015年第1次施藥時(shí)間為6月23日，第1次藥后7d進(jìn)行第2次施藥。2016年第1次施藥時(shí)間為6月24日，第1次藥后7d進(jìn)行第2次施藥?？蓾裥苑蹌﹥端♂尀樗幰哼M(jìn)行噴霧。

1.2.3 藥效調(diào)查及藥效計(jì)算 2015年試驗(yàn)共調(diào)查2次，第1次施藥后7d及末次藥后7d進(jìn)行調(diào)查；2016年試驗(yàn)共調(diào)查3次，藥前進(jìn)行基數(shù)調(diào)查，第1次施藥后7d及末次藥后7d進(jìn)行調(diào)查。小區(qū)隨機(jī)5點(diǎn)取樣，每點(diǎn)調(diào)查2株全部葉片，每片葉按病斑占葉面積的百分率分級(jí)記錄。計(jì)算病情指數(shù)和防治效果，并對(duì)防治效果進(jìn)行多重比較。

病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 23222-2008進(jìn)行：0級(jí)：無(wú)病斑；1級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積5%以下；3級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積6%～10%；5級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積11%～20%；7級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積21%～40%；9級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積41%以上。

CK0為對(duì)照區(qū)藥前病指；CK1為對(duì)照區(qū)藥后病指；

Pt0為處理區(qū)藥前病指；Pt1為處理區(qū)藥后病指；

1.2.4 藥害調(diào)查 觀察各試驗(yàn)藥劑對(duì)煙草有無(wú)藥害，記錄藥害的類(lèi)型和程度。藥害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：-：無(wú) 藥 害；+：輕度藥害，不影響作物正常生長(zhǎng)；++：中度藥害，可復(fù)原，不會(huì)造成作物減產(chǎn)；+++：重度藥害，影響作物正常生長(zhǎng)，對(duì)作物產(chǎn)量和質(zhì)量造成一定程度的損失；++++：嚴(yán)重藥害，作物生長(zhǎng)受阻，產(chǎn)量和質(zhì)量損失嚴(yán)重。

2 結(jié)果與分析

2.1 田間防效 2015與2016年試驗(yàn)結(jié)果表明(表3、4)，解淀粉芽孢桿菌D1發(fā)酵液原液、缺陷假單胞菌HD13發(fā)酵液原液、解淀粉芽孢桿菌DEB-2可濕性粉劑對(duì)煙草白粉病均有較好防治效果，在第1次藥后7d及末次藥后7d防效均在60%以上，解淀粉芽孢桿菌D1發(fā)酵液原液(128L/667m2)、缺陷假單胞菌HD13發(fā)酵液原液(128L/667m2)、解淀粉芽孢桿菌DEB-2可濕性粉劑(160g/667m2)對(duì)煙草白粉病防效均在70%以上，與解淀粉芽孢桿菌D1發(fā)酵液原液(64L/667m2)、缺陷假單胞菌HD13發(fā)酵液原液(64L/667m2)、解淀粉芽孢桿菌DEB-2可濕性粉劑(80g/667m2)對(duì)煙草白粉病防效差異極顯著，與對(duì)照藥劑5%己唑醇懸浮劑差異不顯著，防治效果相當(dāng)。

表3 2015年解淀粉芽孢桿菌D1及缺陷假單胞菌HD13防治煙草白粉病試驗(yàn)結(jié)果

注:表中不同大、小寫(xiě)字母分別表示差異達(dá)極顯著(P<0.01)和顯著(P<0.05)水平。

表4 2016年解淀粉芽孢桿菌D1、DEB-2及缺陷假單胞菌HD13防治煙草白粉病試驗(yàn)結(jié)果

注:表中不同大、小寫(xiě)字母分別表示差異達(dá)極顯著(P<0.01)和顯著(P<0.05)水平。

2.2 藥劑對(duì)煙草的安全性觀察 試驗(yàn)期間，對(duì)各小區(qū)煙草進(jìn)行綜合觀察，各藥劑處理區(qū)的煙草長(zhǎng)勢(shì)、株高、葉片形狀和顏色與空白對(duì)照區(qū)的煙草長(zhǎng)勢(shì)、株高、葉片形狀和顏色無(wú)明顯差異，各藥劑處理區(qū)在試驗(yàn)期間未發(fā)生藥害，表明各試驗(yàn)藥劑對(duì)煙草安全。

3 討論與結(jié)論

解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)與缺陷假單胞菌(Pseudomonasdiminuta)為貴州大學(xué)農(nóng)業(yè)生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室從藥用植物組織內(nèi)及分離出的內(nèi)生菌，內(nèi)生菌對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性直接影響到其對(duì)有害生物的控制效果[19]。本研究通過(guò)定植試驗(yàn)證明，三種生防菌對(duì)煙草白粉病均有較好的防治效果。

自2006年提出“公共植保、綠色植?！币詠?lái)，綠色防控作為發(fā)展現(xiàn)代農(nóng)業(yè)、建設(shè)資源節(jié)約、環(huán)境友好型農(nóng)業(yè)，促進(jìn)農(nóng)業(yè)增收、農(nóng)民增收、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)安全，農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全、農(nóng)業(yè)生態(tài)安全的有效途徑,一直為我國(guó)植保工作者所倡導(dǎo)。生物防治作為綠色防控的主要措施之一，在農(nóng)作物病蟲(chóng)綠色防控中起著重要的作用。

本研究結(jié)果表明，解淀粉芽孢桿菌D1發(fā)酵液、缺陷假單胞菌HD13發(fā)酵液、解淀粉芽孢桿菌DEB-2可濕性粉劑3種生防菌對(duì)煙草白粉病均有較好防治效果，對(duì)煙草生產(chǎn)安全。建議在生產(chǎn)中推廣使用解淀粉芽孢桿菌D1發(fā)酵液、缺陷假單胞菌HD13發(fā)酵液、解淀粉芽孢桿菌DEB-2可濕性粉劑，推薦劑量分別為128L/667m2、128L/667m2、160g/667m2。但解淀粉芽孢桿菌D1發(fā)酵液、缺陷假單胞菌HD13發(fā)酵液使用量大，不便于運(yùn)輸，應(yīng)進(jìn)一步改進(jìn)生產(chǎn)工藝，研發(fā)優(yōu)化劑型，使其更適宜在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)際中應(yīng)用。