◎ 張 麗，祝偉霞，李繼利，趙國(guó)興

（1.河南檢驗(yàn)檢疫鑒定咨詢中心，河南 鄭州 450003；2.洛陽(yáng)理工學(xué)院材料科學(xué)與工程學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471023）

多抗霉素B又稱多氧霉素，是光譜抗生素類生物源農(nóng)藥，它是可可鏈霉素阿蘇變種產(chǎn)生的代謝物，具有較好的內(nèi)吸傳導(dǎo)作用。該藥主要對(duì)小麥白粉病、煙草赤星病、黃瓜霜霉病、瓜類枯萎病、人參黑斑病、甜菜褐斑病、水稻紋枯病、蘋果早期落葉病、林木枯梢病和梨黑斑病等多種真菌性病害具有良好的防治效果。

隨著多抗霉素在水果蔬菜病蟲(chóng)害防治上的廣泛應(yīng)用，由其引起的環(huán)境和食品安全問(wèn)題日益突顯，因此研究多抗霉素在水果蔬菜中的殘留檢測(cè)方法具有十分重要的意義。目前我國(guó)暫未制定多抗霉素在水果蔬菜中殘留限量；日本制定了大米（糙米）中多氧霉素的最高殘留限量（MRL）為0.06 mg/kg。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)多抗霉素的研究多集中在病蟲(chóng)害防治方面，已有文獻(xiàn)報(bào)道的關(guān)于多抗霉素的分析有生物效價(jià)[1-2]、毛細(xì)管電泳法[3]，這些方法均操作繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，準(zhǔn)確度低，精密度差，不適合用于食品檢測(cè)及市場(chǎng)監(jiān)督檢測(cè)。陶寧等[4]建立了稻田土壤及水中多抗霉素殘留量的高效液相色譜分析，檢出限為0.05 mg/L。呂靜建立了其在煙草中的分析方法[5]，但目前并未見(jiàn)其在水果蔬菜等農(nóng)產(chǎn)品中的殘留檢測(cè)報(bào)道。本文建立了水果蔬菜中多抗霉素B的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。與生物測(cè)定法、高效液相色譜法等相比，超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法具有靈敏度高、干擾小、分析速度快等顯著優(yōu)點(diǎn)，可為多抗霉素B在水果蔬菜中的殘留分析研究提供技術(shù)支持。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

LC-MS/MS 8050高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀(電噴霧離子源）；Millipore型純水系統(tǒng)。

多抗霉素儲(chǔ)備液的制備：稱取10.0 mg多抗霉素B（CAS：19396-06-6）于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，于-18 ℃下保存待用。甲醇、乙腈為色譜純。其他試劑為分析純。

1.2 工作條件

1.2.1 色譜條件

TYPE1:4色譜柱，（5μm，2.0×150 mm）；柱溫40 ℃；流動(dòng)相B為乙腈，A為20 mmol/L乙酸銨溶液；流量0.3 mL/min；進(jìn)樣量10 μL。梯度洗脫程序：0～1 min時(shí)，B為90%；1～2 min時(shí)，B由90%降至40%；2～4 min時(shí)，B保持40%，4～5 min時(shí)，B由40%升至90%，保持2 min。

1.2.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源正離子（ESI＋）掃描模式；噴霧電壓4.0 kV；加熱模塊溫度400 ℃；離子源溫度300 ℃；DL溫度250 ℃；噴霧流量2.5 L/min；加熱氣流量10 L/min；干燥器流量10 L/min；每個(gè)離子對(duì)駐留時(shí)間200 ms。定量離子366.0，定性離子490.2，碰撞能量分別為29、30。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

稱取5.0 g樣品置于50 mL具塞離心管中，加入15 mL甲醇-水（3∶7）渦旋混勻10 min，超聲提取5 min，以4000 r/min離心5 min，取上清液過(guò)WCX柱，取上清過(guò)0.22 μm濾膜供LC-MS/MS測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜行為

多抗霉素TIC圖如圖1所示。

圖1 多抗霉素TlC圖

2.2 提取劑的選擇

多抗霉素易溶于水，微溶于甲醇、丙酮等有機(jī)溶劑，在酸性和中性溶液中穩(wěn)定，在堿性溶液中不穩(wěn)定，常溫下貯存穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)分別考察了甲醇、乙腈、甲醇-水、0.1%甲酸水對(duì)多抗霉素的提取效率，0.1%甲酸水會(huì)提取出來(lái)較多的糖類和色素，干擾較大；甲醇、乙腈提取時(shí)回收率沒(méi)有甲醇-水高，因此試驗(yàn)選用甲醇水作為提取劑。

2.3 色譜柱的選擇

由于多抗霉素極性很強(qiáng)，在普通的C18柱上沒(méi)有保留，很快就出峰，故選擇資生堂的Hilic柱和CAPCELL PAK CR 1:4柱進(jìn)行考察，使用Hilic柱發(fā)現(xiàn)，其靈敏度和峰性均不如CAPCELL PAK CR 1:4柱，故選擇CAPCELL PAK CR 1:4柱。

2.4 流動(dòng)相的選擇

根據(jù)多抗霉素在酸性和中性條件下穩(wěn)定的性質(zhì)，由于選擇的CAPCELL PAK CR 1:4柱的特殊性，需避免使用甲醇作為流動(dòng)相，故考察了乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水、乙腈-20 mmoL乙酸銨體系下目標(biāo)物的峰形和分離度。直接采用乙腈-水作為流動(dòng)相，樣品不穩(wěn)定，容易發(fā)生分解；對(duì)比之下，乙腈-20 mmoL乙酸銨峰形最好，靈敏度最高，故選擇乙腈-20 mmoL乙酸銨為流動(dòng)相。

2.5 線性關(guān)系及檢出限

準(zhǔn)確吸取多抗霉素B標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用空白基質(zhì)溶 液 稀 釋為 0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2 mg/L和0.5 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。在上述分析條件下進(jìn)樣測(cè)定，以定量離子峰面積對(duì)多抗霉素B質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸。在0.01～0.5 mg/L濃度范圍內(nèi)，回歸方程為y=121.114x-531.79，相關(guān)系數(shù)為0.995。按10倍信噪比得出多抗霉素B在果蔬樣品中定量限為0.01 mg/kg，按3倍信噪比得出檢出限為0.005 mg/kg。

2.6 回收率和精密度

采用標(biāo)準(zhǔn)添加法，在蘋果空白樣品中添加0.01、0.02、0.05 mg/kg3個(gè)濃度水平的多抗霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)添加水平平行測(cè)定6次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，方法的回收率為71.6%～111.2%，精密度（以RSD計(jì)）為5.6%～10.9%。

表1 回收率和精密度結(jié)果表

3 結(jié)論

本文采用甲醇-水提，WCX柱凈化，HPLC-MS/MS方法測(cè)定果蔬中多抗霉素B殘留的分析方法，本法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，具有良好的靈敏度和精密度，有較大的實(shí)用價(jià)值，可對(duì)農(nóng)藥殘留進(jìn)行有效檢測(cè)。