王亞南 (蘇州市立醫(yī)院南京醫(yī)科大學附屬蘇州醫(yī)院檢驗科，江蘇蘇州 215002)

降鈣素原(procalcitonin，PCT)是由116個氨基酸組成的糖蛋白，是降鈣素(calcitonin，CT)的前體。當機體發(fā)生細菌感染后血液中PCT水平會明顯升高［1］，PCT檢測細菌感染時靈敏度較高，特異性較強，尤其在敗血癥以及膿毒癥的早期診斷中具有十分重要的意義，在臨床上的應用日益廣泛［2～5］。固相免疫層析法檢測 PCT，簡便快捷，但在實際臨床檢測過程中常會遇到溶血的標本。產(chǎn)品說明書中雖然提到溶血樣本對PCT結果有干擾，但表述的十分模糊。目前標本溶血對固相免疫層析法檢測PCT影響的文獻比較少，檢驗醫(yī)生對臨床醫(yī)生進行結果解釋時由于沒有充足的文獻支持，不能給出更客觀的解釋。故本文就樣本溶血對固相免疫層析法檢測PCT結果的影響進行了實驗評估，旨在提供量化的數(shù)據(jù)說明。

1 材料與方法

1.1 實驗樣本 2016年11月收集我院住院病人無溶血標本共66例，其中PCT＜0.5 ng/ml組為22例，0.5 ng/ml≤PCT＜10 ng/ml組為 22 例，PCT≥10 ng/ml組22例，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會同意并簽署病人知情同意書。采集病人外周血標本2 ml于EDTA-K2抗凝管中，分離血漿，置4℃低溫保存待測。

1.2 試劑和儀器 本實驗使用的降鈣素原(PCT)檢測試劑盒(免疫層析法，血漿型)和免疫定量分析儀(MD-QMT001)來自武漢明德生物科技股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 溶血樣本制備:收集4個PCT值為0.1 ng/ml的無溶血血液標本，靜置后吸去血漿，將這4個棄去血漿后的標本充分混勻(混勻后標本量約為3 ml)。將混勻后的標本加生理鹽水(37 ml)，3000 r/min離心5 min后吸去上清。如此反復洗滌3次，最后得到3 ml左右的紅細胞懸液。加2 ml蒸餾水使其溶血，然后置－20℃凍存。在凍存當日下午和隔日上午再各凍融一次，使其完全溶血。經(jīng)洗滌、加蒸餾水及反復凍融使其完全溶血，制備成血紅蛋白濃度為150 g/L的樣本，作干擾物待用。將66例無溶血標本制備成不同血紅蛋白濃度(0，3，6，9，12，15 g/L)的溶血樣本，見表 1。3000 r/min離心5 min后取50 μl血漿進行PCT檢測。將血紅蛋白干擾濃度為0 g/L的標本作為對照組。

表1 不同血紅蛋白濃度的溶血樣本制備表

1.3.2 PCT檢測方法:①打開免疫定量分析儀及PCT檢測操作程序。②將PCT檢測卡從密封的鋁箔袋中取出，置于干凈平坦的臺面上。③用加樣槍垂直滴加50 μl血漿于檢測卡加樣孔內(nèi)。④上機檢測:加樣后的檢測卡靜置10 s即可放入測試窗(加樣孔側靠近操作者)，點擊“孵育檢測”，15 min后自動讀取定量結果，并將檢測結果顯示在電腦屏幕上。

1.4 統(tǒng)計學分析 運用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計和數(shù)據(jù)分析，對數(shù)據(jù)采用單樣本 Kolmogorov-Smirnov檢驗法作正態(tài)性分布檢驗，符合正態(tài)性分布的兩組樣本比較，采用成組設計的兩樣本t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 PCT＜0.5 ng/ml組不同血紅蛋白濃度干擾實驗檢測結果 見表2。不同血紅蛋白濃度干擾后的PCT值與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

表2 PCT＜0.5 ng/ml組不同血紅蛋白濃度干擾實驗檢測結果(珋x±s)

2.2 0.5 ng/ml≤PCT＜10 ng/ml組不同血紅蛋白濃度干擾實驗檢測結果 見表3。當血紅蛋白濃度為12，15 g/L時，PCT值與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。PCT值是溶血前PCT值的65%和56%。

表3 0.5 ng/ml≤PCT＜10 ng/ml組不同血紅蛋白濃度干擾實驗檢測結果(珋x±s)

2.3 PCT≥10 ng/ml組不同血紅蛋白濃度干擾實驗檢測結果 見表4。當血紅蛋白濃度為9，12，15 g/L時，PCT值與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。PCT值是溶血前PCT值的73%，61%和53%。。

表4 PCT≥10ng/ml組不同血紅蛋白濃度干擾實驗檢測結果(珋x±s)

3 討論降鈣素原(PCT)對于快速鑒別感染與非感染所致的炎性反應具有重要的意義，檢測PCT對臨床的診療具有非常大的幫助［6～9］。隨著生物技術的發(fā)展，降鈣素原固相免疫層析法的靈敏度得到提高，因其簡便、快速，在門急診檢驗應用較廣。但在臨床實際使用過程中往往會遇到溶血的標本，特別是新生兒發(fā)生感染需要檢測PCT時，由于采血難度大，很容易造成標本溶血。目前這些溶血標本對固相免疫層析法檢測PCT的影響相關報道較少，產(chǎn)品說明書中雖然提到溶血樣本對檢測結果有干擾，但表述的十分籠統(tǒng)模糊。目前對PCT在感染性疾病臨床早期診斷價值方面研究的文章較多［10～12］，而對于檢測時溶血對固相免疫層析法檢測PCT的影響的文獻則很少。在日常檢驗工作中檢測PCT時，對樣本溶血影響PCT檢測結果，檢驗醫(yī)生和臨床醫(yī)生溝通時苦于沒有文獻支持，無法提供客觀的數(shù)據(jù)說明。這就更迫切的需要進行溶血干擾對固相免疫層析法檢測PCT檢測影響的評估。本文就此問題進行了研究。用5個不同血紅蛋白濃度和3個不同PCT濃度組進行實驗分析，實驗結果表明，溶血對PCT檢測有干擾，溶血程度越嚴重對PCT檢測的干擾作用越大，使得PCT值假性偏低。目前臨床上設定的PCT的正常參考值為＜0.5 ng/ml，而我們的干擾實驗研究證明，對于PCT≥0.5 ng/ml的標本，當血紅蛋白濃度增高時，對PCT檢測會產(chǎn)生干擾。由于溶血產(chǎn)生的干擾現(xiàn)象，使得PCT假性偏低，最多的可降低至溶血前PCT值的53%，導致了PCT的假陰性結果，這會延誤臨床醫(yī)生對患者感染的早期治療時機，對患者的疾病診治造成一定的影響。臨床上由于采血方式方法的不當、標本運送環(huán)節(jié)及離心分離血漿過程中操作不當，都會造成溶血的發(fā)生。我們通過研究將樣本中溶血干擾因子對固相免疫層析法檢測PCT的研究結果量化表示，提醒我們檢驗醫(yī)務人員在采樣過程中一定要熟練操作，減少人為因素導致的標本溶血，并且在標本運送及整個檢測過程中做到一絲不茍，認真負責地對待每一份標本。對溶血標本應及時通知臨床退檢，保證PCT檢測的準確性。同時和臨床做好充分的溝通和解釋工作，有利于患者疾病的正確診治。