文生萍，竇永芳，黃 晶

（青海畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，青海湟源 812100）

青貯牧草不僅可以維持牧草的營養(yǎng)價(jià)值，還可以彌補(bǔ)冬春季節(jié)飼草料的不足，因此，青貯對牛羊等反芻動物具有重要意義。牧草表面天然附著有少量乳酸菌，可以幫助牧草自然發(fā)酵（侯美玲，2017）。然而，不同牧草表面附著的天然乳酸菌數(shù)量和種類差異較大，需要在制作青貯的過程中人為補(bǔ)充外源乳酸菌添加劑，幫助青貯飼料迅速進(jìn)入乳酸發(fā)酵過程，以得到優(yōu)良的青貯飼料（韋方鴻等，2017）。乳酸菌添加劑的主要作用在于調(diào)節(jié)青貯系統(tǒng)內(nèi)的微生物區(qū)系，加速乳酸菌等有益菌的繁殖，抑制需氧菌等有害菌的繁殖，調(diào)控青貯發(fā)酵過程，維持飼料營養(yǎng)價(jià)值（苗芳，2017）。許多研究表明，對于不同飼料類型，添加不同類型的乳酸菌添加劑對其青貯品質(zhì)具有不同效果（孫茜等，2018；賈婷婷等，2018a；賈婷婷等，2018b；韋方鴻等，2017）。而對于不同乳酸菌添加劑對于羊草青貯的影響研究較少。研究表明，不同切割長度對飼料青貯質(zhì)量具有顯著影響（張華琦等，2016；侯建建等，2016；葉方，2013）。而關(guān)于不同切割長度對羊草青貯品質(zhì)的影響研究較少。因此，本試驗(yàn)以羊草為研究對象，研究不同類型的乳酸菌添加劑和切割長度對羊草青貯品質(zhì)的影響，以期為生產(chǎn)中羊草青貯提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 選擇當(dāng)?shù)胤N植的羊草作為青貯原料。試驗(yàn)用乳酸菌添加劑為植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌，均購自于XX公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 本試驗(yàn)采用2×2兩因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，其中乳酸菌添加劑分別為植物乳桿菌和鼠李糖乳桿菌，切割長度分別為1.5 cm和3 cm，共分為4個(gè)處理組，每組3個(gè)重復(fù)。

1.3 青貯方法 將羊草用青貯鍘切機(jī)切割成不同長度，加入不同的乳酸菌添加劑，混合均勻后裝入聚乙烯青貯袋，用青貯打包機(jī)壓實(shí)和抽真空后封口，于室溫放置60 d后開封，采集樣品并進(jìn)行后續(xù)分析。

1.4 測定指標(biāo)和方法

1.4.1 青貯牧草的感官品質(zhì)評價(jià) 青貯袋開封后，分別從青貯袋的上、中、下三層取出同等數(shù)量的樣品（各300 g），按照《青貯飼料質(zhì)量評定標(biāo)準(zhǔn)》，根據(jù)色澤、氣味和質(zhì)地等感官指標(biāo)進(jìn)行現(xiàn)場評定。

1.4.2 青貯牧草的酸度測定 從經(jīng)過感官品質(zhì)評定的青貯牧草中，采用四分法準(zhǔn)確稱取20 g樣品放入300 mL燒杯中，加入180 mL蒸餾水，用玻璃棒攪拌均勻，置于4℃冰箱中浸提24 h，先后用4層紗布和定性濾紙進(jìn)行過濾，收集濾液。用pH測定儀測定濾液的pH（李平等，2012）。

1.4.3 青貯牧草的有機(jī)酸測定 將收集的濾液經(jīng)3500 g/min，離心15 min得到上清液。使用高效液相色譜法分析乳酸、乙酸、丙酸和丁酸含量（KC-811column，Shodex；Shimadzu，日本）。具體參數(shù)設(shè)置參考（許慶方，2005）的方法。

1.4.4 青貯牧草的氨態(tài)氮測定 采用苯酚－次氯酸鈉比色法進(jìn)行測定（Broderick and Kang，1980）。

1.4.5 青貯牧草的營養(yǎng)成分測定 采用烘干法，在鼓風(fēng)干燥箱中在65℃條件下烘干48 h測定干物質(zhì)含量（DM）；采用凱氏定氮法，利用FOSS全自動凱氏定氮儀測定粗蛋白質(zhì)含量（CP）；采用蒽酮-硫酸法測定可溶性碳水化合物（WSC）（Mcdonald and Henderson，2010）； 采 用 Van Soest（Van等，1991）的方法測定中性洗滌纖維（NDF）和酸性洗滌纖維（ADF）的含量。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 采用SAS 9.2 統(tǒng)計(jì)軟件的兩因素方差分析過程進(jìn)行分析，用Duncan’s法進(jìn)行多重比較，以P＜0.05為差異顯著。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 不同乳酸菌添加劑和切割長度對青貯牧草感官指標(biāo)及pH的影響 由表1可以看出，在袋裝青貯結(jié)束后，各處理組間牧草青貯顏色基本一致，均呈黃綠色。1.5 cm切割長度組牧草青貯的質(zhì)地比3 cm組的稍好，且酸香味比較強(qiáng)烈。各組合處理組間牧草青貯沒有發(fā)霉氣味。各處理組的牧草的莖葉結(jié)構(gòu)大都保存完好，但1.5 cm切割長度組的莖葉結(jié)構(gòu)比3 cm組的要更加清晰和完整。

2.2 不同乳酸菌添加劑和切割長度對青貯牧草發(fā)酵品質(zhì)的影響 由表2可以看出，不同乳酸菌添加劑和不同切割長度對青貯牧草的發(fā)酵品質(zhì)具有顯著影響，且交互作用顯著。其中，植物乳桿菌添加組青貯牧草的乳酸含量、乙酸含量顯著高于鼠李糖乳桿菌添加組（P＜0.05），而丙酸和丁酸含量與鼠李糖乳桿菌添加組差異不顯著（P＞0.05）。1.5 cm切割長度添加組青貯牧草的揮發(fā)性脂肪酸含量顯著高于3 cm組（P＜0.05）。植物乳桿菌添加組青貯牧草的pH顯著低于鼠李糖添加組（P＜0.05），1.5 cm長度組青貯牧草的pH顯著低于3 cm長度組（P＜0.05）。切割長度對青貯牧草的氨態(tài)氮含量具有顯著影響，其中1.5 cm切割長度組的氨態(tài)氮含量顯著低于3 cm切割長度組（P＜0.05）。植物乳桿菌添加組氨態(tài)氮含量顯著低于鼠李糖乳桿菌添加組（P＜0.05）。

表1 不同乳酸菌添加劑和牧草切割長度對牧草青貯感官指標(biāo)的影響

表2 不同乳酸菌添加劑和牧草切割長度對青貯羊草發(fā)酵品質(zhì)的影響

2.3 不同乳酸菌添加劑和切割長度對青貯牧草營養(yǎng)成分含量的影響 由表3可以看出，乳酸菌添加劑和切割長度對青貯羊草的干物質(zhì)、可溶性糖和粗蛋白質(zhì)含量均無顯著影響（P＞0.05），而對中性洗滌纖維和酸性洗滌含量具有顯著影響（P＜0.05）。隨著切割長度的增加，青貯羊草的可溶性糖含量呈增加趨勢，其中植物乳桿菌添加組青貯羊草的可溶性糖含量低于鼠李糖乳桿菌添加組。植物乳桿菌添加組青貯羊草的中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維顯著低于鼠李糖乳桿菌添加組，分別低2.63%和3.21%（P＜0.05）。1.5 cm切割長度組的中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量顯著低于3.0 cm切割長度組，分別低2.68%和3.52%（P＜ 0.05）。

表3 不同乳酸菌添加劑和牧草切割長度對青貯牧草營養(yǎng)成分含量的影響（DM基礎(chǔ)） %

3 討論

本試驗(yàn)中各處理組合中青貯羊草的感官品質(zhì)均達(dá)到優(yōu)良標(biāo)準(zhǔn)以上，且pH值在3.8～4.2，說明各組的青貯羊草質(zhì)量較好。研究表明，優(yōu)良青貯飼料的pH在3.8～4.2，當(dāng)pH下降到4.2以下時(shí)，乳酸菌等有益菌發(fā)揮主要作用，低pH有利于抑制其他有害菌的繁殖（邵新慶等，2014）。本試驗(yàn)中，1.5 cm切割長度組的pH顯著低于3.0 cm切割長度組，這表明適當(dāng)切短的羊草有利于青貯過程中的物料壓實(shí)狀態(tài)，更好的排除空氣，加快乳酸菌繁殖，迅速降低pH（張華琦等，2016；葉方，2013）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，植物乳桿菌添加劑組青貯羊草的pH顯著低于鼠李糖乳桿菌添加劑組，與賴玉嬌等（2014）和李雁冰等（2015）的研究結(jié)果一致。這可能是由于植物乳桿菌有效抑制有害微生物的繁殖，加快乳酸菌增殖，產(chǎn)生大量乳酸有關(guān)（樊振等，2014；邵新慶等，2014）。研究表明，飼料中氨態(tài)氮占總氮的比例反映了青貯飼料中蛋白質(zhì)和氨基酸分解的程度，較高的氨態(tài)氮表明，飼料中氨基酸和蛋白質(zhì)分解增加，青貯飼料的質(zhì)量降低。本研究結(jié)果表明，1.5 cm切割長度組青貯羊草的氨態(tài)氮含量顯著低于3.0 cm切割長度組，表明適當(dāng)降低切割長度有利于提高青貯羊草的質(zhì)量。本試驗(yàn)結(jié)果與侯建建等（2016）和張華琦等（2016）的研究結(jié)果一致。研究表明，青貯飼料中的乳酸含量是評價(jià)青貯過程和青貯質(zhì)量的重要指標(biāo)，乳酸含量高表明青貯發(fā)酵完全，乳酸菌數(shù)量占優(yōu)勢，而丁酸含量代表有害菌繁殖的程度和數(shù)量（李雁冰等，2015；賴玉嬌等，2014）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，適當(dāng)切短羊草顯著提高了乳酸含量，降低了丁酸含量，與王安奎等（2005）、李昌茂等（2008）、葉方等（2009）的研究結(jié)果一致。這可能與較短的羊草有利于青貯袋的壓實(shí)，減少氧氣含量，抑制需氧菌的繁殖，加速乳酸菌等厭氧菌的增殖，迅速形成較低的酸性環(huán)境有關(guān)。飼料中適當(dāng)?shù)目扇苄蕴呛渴怯绊懬噘A的重要因素，乳酸菌的增殖離不開可溶性糖。本試驗(yàn)中，植物乳桿菌組青貯羊草的可溶性糖含量低于鼠李糖乳桿菌組，表明植物乳桿菌組乳酸發(fā)酵高于鼠李糖乳桿菌組。同時(shí)，本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌添加劑和1.5 cm切割長度可以顯著降低中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維的含量，提高青貯羊草的質(zhì)量。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，羊草青貯過程中添加乳酸菌可以提高青貯羊草的質(zhì)量，其中以添加植物乳桿菌的改善效果較好。另外，羊草青貯建議切割成1.5 cm的長度進(jìn)行青貯能達(dá)到較好的青貯效果。