梁瑞芝

痹癥,中醫(yī)認(rèn)為是風(fēng)寒濕熱之邪氣引起的以肢體關(guān)節(jié)疼痛酸楚、麻木重著以及活動(dòng)障礙為主的臨床痛癥［1-3］。本研究探討將傳統(tǒng)古方中成藥豨桐丸制成豨桐凝膠膏劑,對(duì)尿酸鈉晶體誘導(dǎo)的大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎及其抗炎作用方面的影響。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 50只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD健康雄性大鼠,體重180～220 g,由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供,動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK(粵)-2017-0070。所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始試驗(yàn)。另取健康雄性大鼠40只。

1.2 藥物與試劑 豨桐凝膠膏劑為本院自制外用制劑的一種,采用凝膠化技術(shù),用兩味藥材豨薟草和臭梧桐提取、精制、成型。秋水仙堿(西雙版納藥業(yè)有限責(zé)任公司,國藥準(zhǔn)字 H53021369,批號(hào)150801)。醋酸潑尼松片(浙江仙琚制藥有限公司,批號(hào)030715)。尿酸鈉晶體制備［2］,取尿酸4 g溶于預(yù)熱至60℃的800 ml雙蒸水中,用0.5 mol/L的氫氧化鈉(NaOH)溶液調(diào)節(jié)pH 至8.9,4℃冰箱過夜。4000 r/min離心收集沉淀即為尿酸鈉晶體。高壓滅菌,烘干后備用。

1.3 動(dòng)物分組和造模 ①將50只SD健康雄性大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性組、高劑量組、低劑量組,各10只。每組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提前5 d分別給藥,高劑量組大鼠給予豨桐凝膠膏劑30 g/kg,低劑量組大鼠給予豨桐凝膠膏劑6 g/kg,均涂抹在大鼠足跖關(guān)節(jié),連續(xù)涂抹7 d。陽性組大鼠給予秋水仙堿4 g/kg灌胃,用藥7 d,空白組不給藥。用6號(hào)注射針在受試大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)背側(cè)從45°方向插入肌腱內(nèi)側(cè),將0.2 ml尿酸鈉溶液注入模型組、高劑量組、低劑量組、陽性組,造成急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型。②另將40只健康雄性大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、陽性A組、高劑量A組、低劑量A組,各10只。每組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前5 d分別給藥,對(duì)照組不給藥,后三組給藥分別同上述陽性組、高劑量組、低劑量組。用記號(hào)筆在大鼠右后肢關(guān)節(jié)周圍作一標(biāo)記,按毛細(xì)管放大法測(cè)定每只大鼠右后足體積2次,取平均值為各鼠給藥前正常值。給各組大鼠再給藥1次,30 min后給各組中每只大鼠(包括對(duì)照組)右后足足跖皮下注射0.1%蛋清0.1 ml致炎,分別在致炎30、60、120 min后測(cè)量右后足體積,給藥前后足跖體積之差為腫脹度。

1.4 觀察指標(biāo) 觀測(cè)大鼠體毛、活動(dòng)、飲食、排便情況。五組大鼠在造模前、造模后、治療后分別測(cè)試受試關(guān)節(jié)的體積,觀察大鼠足跖關(guān)節(jié)腫脹度。比較四組大鼠致炎30、60、120 min后足腫脹度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況 空白組、高劑量組、低劑量組大鼠毛皮光滑,精神均佳,飲食、大小便正常,眼、鼻無分泌物,黏膜無充血。呼吸、心跳正常,體重增長(zhǎng)在正常范圍內(nèi)。陽性組和模型組自發(fā)活動(dòng)減少,倦臥不動(dòng),個(gè)別大鼠出現(xiàn)緊張不安,反應(yīng)遲鈍。模型組大鼠攝食及飲水次數(shù)也明顯減少,局部關(guān)節(jié)皮膚溫度增高,活動(dòng)明顯減少。

2.2 大鼠足跖關(guān)節(jié)腫脹度 造模前,各組大鼠足跖關(guān)節(jié)腫脹度比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；造模后及治療后,模型組、陽性組、高劑量組、低劑量組足跖關(guān)節(jié)腫脹度體積大于空白組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；治療后,陽性組、高劑量組、低劑量組足跖關(guān)節(jié)腫脹度體積小于模型組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 五組大鼠足跖關(guān)節(jié)腫脹度比較(±s,ml)

表1 五組大鼠足跖關(guān)節(jié)腫脹度比較(±s,ml)

注：與空白組比較,aP＜0.05；與模型組比較,bP＜0.05

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2.3 大鼠足腫脹度 致炎30 min后,陽性A組足腫脹度與對(duì)照組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。致炎60、120 min后,高劑量A組、低劑量A組、陽性A組足腫脹度與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 四組大鼠足腫脹度比較(±s,cm)

注：與對(duì)照組比較,aP＜0.05

對(duì)照組 10 0.55±0.28 1.16±0.30 1.23±0.32陽性A組 10 0.21±0.14a 0.37±0.26a 0.42±0.28a高劑量A組 10 0.67±7.54 0.54±0.26a 0.49±0.17a低劑量A組 10 0.88±5.32 0.87±0.23a 0.84±0.20a

3 討論

豨薟草味苦,性寒,歸肝、腎經(jīng),具有祛風(fēng)濕、強(qiáng)筋骨、利關(guān)節(jié)之效［4,5］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,豨薟草有抗感染和較好的鎮(zhèn)痛作用,對(duì)細(xì)胞免疫、體液免疫及非特異性免疫均有抑制作用,可通過調(diào)整機(jī)體免疫功能,改善局部病理反應(yīng)而達(dá)到抗風(fēng)濕作用；臭梧桐性味苦、辛,入肝經(jīng),具有祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)之效［6,7］。本研究按照古方豨桐丸原方組成比例,制成凝膠膏劑,探索豨桐凝膠膏劑的臨床前主要藥效。

本研究利用尿酸鈉晶體誘導(dǎo)的大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型,證明了豨桐凝膠膏劑可改善大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的足腫脹和關(guān)節(jié)功能；用豨桐凝膠膏劑涂抹大鼠右后足足跖皮膚,后用蛋清致炎,豨桐凝膠膏劑高低劑量組對(duì)比對(duì)照組大鼠足腫脹程度明顯減輕。提示豨桐凝膠膏劑有一定的抗炎作用。

綜上所述,豨桐凝膠膏劑可改善尿酸鈉晶體誘導(dǎo)的大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎,并且具有一定的抗炎作用,望本研究為臨床應(yīng)用豨桐凝膠膏劑治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎等痹癥提供一定的依據(jù)。