蒙玉嬌， 李寧飛， 翟春艷， 劉正榮， 李 雪， 底婷婷2, ，趙京霞2, ， 王 燕2, ， 張 璐2, ， 王洪艷2, ， 李 萍, 2, △

(1北京中醫(yī)藥大學， 北京 100029；2銀屑病中醫(yī)臨床基礎研究北京市重點實驗室，北京市中醫(yī)研究所，3首都醫(yī)科大學附屬北京中醫(yī)醫(yī)院， 北京 100010)

銀屑病是由免疫系統(tǒng)、銀屑病相關易感基因位點、自身抗原和環(huán)境等多種因素交互作用引起的，以表皮細胞過度增殖和角化不全為特征的慢性炎癥性皮膚疾病，包括角質細胞、樹突狀細胞和T淋巴細胞等在內的多種細胞參與其中[1-2]。其中，T細胞調節(jié)功能異常對銀屑病的發(fā)生發(fā)展起到了至關重要的作用。銀屑病屬中醫(yī)“白疕”范疇，中醫(yī)藥治療銀屑病療效顯著、毒副作用小，目前依據(jù)患者皮損特點、病程等臨床表現(xiàn)和體征，銀屑病的中醫(yī)證候分布包括血熱證、血燥證和血瘀證[3]。養(yǎng)血解毒方(Yangxue-Jiedu decoction,YXJD)為首都醫(yī)科大學附屬北京中醫(yī)醫(yī)院皮膚科治療血燥型銀屑病的常用方劑，臨床療效頗佳，并且通過前期研究，我們對其部分作用機制有了初步認識[4-5]。為了深入探索和優(yōu)化養(yǎng)血解毒方，我們將其解毒類藥物去除，化裁為養(yǎng)血方(Yangxue decoction,YX)，采用咪喹莫特(imiquimod，IMQ)誘導的銀屑病樣小鼠模型[6-7]，驗證養(yǎng)血方及養(yǎng)血解毒方對銀屑病樣皮損的干預作用，同時觀察2組方劑對此模型干預作用的異同點，為養(yǎng)血解毒方的深入研究和優(yōu)化奠定基礎，為臨床提供實驗數(shù)據(jù)和理論支持。

材 料 和 方 法

1 實驗動物

BALB/c小鼠50只，雄性，6～8周齡，體重18～22 g，由北京華阜康生物科技有限公司提供，動物許可證編號為SCXK(京)2017-0001，IVC飼養(yǎng)，SPF級，濕度40%～60%，室溫25 ℃。

2 主要試劑

養(yǎng)血方(當歸15 g、生地黃15 g、丹參15 g、雞血藤15 g、麥冬10 g、天花粉15 g、蒼術10 g、白蒺藜10 g)及養(yǎng)血解毒方(當歸15 g、生地黃15 g、丹參15 g、雞血藤15 g、麥冬10 g、玄參15 g、天花粉15 g、土茯苓30 g、白花蛇舌草30 g、草河車9 g、蒼術10 g、白蒺藜10 g)由北京中醫(yī)醫(yī)院中藥房提供，制劑室負責質量控制，按照小鼠劑量(20 g體重)=成人劑量(60 kg體重)×12.33換算得到小鼠服用劑量(mg/kg)，用蒸餾水將中藥混勻后浸泡1 h煎煮2次，每次1 h，合并2次濾液濃縮至10只小鼠所用6 d劑量。

咪喹莫特乳膏購自四川明欣藥業(yè)有限責任公司；甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)購自上海信誼藥廠有限公司；抗增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)抗體、抗CD3抗體、血清封閉液、 II抗和DAB顯色液購自中杉金橋生物技術有限公司。

3 主要方法

3.1造模方法及分組 實驗前適應性飼養(yǎng)1周后，50只BALB/c小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(80 mg/kg)麻醉，背部退毛，面積約2 cm×2 cm，單籠飼養(yǎng)。隨機分為空白(control)組、模型(model)組、MTX組、YX組和YXJD組，每組10只?？瞻捉M小鼠背部涂抹凡士林，其余各組每只小鼠背部涂抹5%咪喹莫特乳膏62.5 mg，連續(xù)涂抹6 d；空白組和模型組小鼠蒸餾水灌胃，甲氨蝶呤組給予甲氨蝶呤溶液灌胃(1 mg/kg)，養(yǎng)血方組與養(yǎng)血解毒方組給予相應水煎劑灌胃，用量均為每次0.2 mL，每天1次。造模當天開始給藥，連續(xù)給藥6 d，第7天取材。

3.2小鼠銀屑病樣皮損動態(tài)觀察及銀屑病面積和嚴重程度指數(shù)(psoriasis area and severity index，PASI)評分 采用數(shù)碼相機每日拍照的方式記錄小鼠背部皮膚變化，動態(tài)觀察皮損進展情況，并根據(jù)銀屑病面積和嚴重程度指數(shù)評分標準，對小鼠鱗屑、浸潤和紅斑情況進行評分，并將三者總和作為總積分，分別繪制PASI評分趨勢線。

3.3小鼠皮膚油脂和水分檢測 造模前，采用皮膚水分油分測試筆，選取小鼠背部相同位置皮膚，測量3次，取平均值；第7天，取材前再次對小鼠皮膚油脂和水分進行檢測，分析銀屑病小鼠皮膚水分/油分丟失情況。

3.4小鼠皮膚HE染色及皮膚厚度檢測 造模第7天，取小鼠背部皮膚，固定脫水后石蠟包埋、切片，經(jīng)HE染色，顯微鏡下觀察小鼠皮膚組織形態(tài)學變化并采用IPP 6.0軟件測量表皮厚度。

3.5免疫組化法檢測小鼠皮損表皮異常PCNA的表達 小鼠皮膚石蠟包埋切片后，免疫組化法檢測皮損表皮中PCNA的表達。計數(shù)PCNA陽性表達的細胞。

3.6免疫組化法檢測小鼠皮損處真皮CD3+T淋巴細胞浸潤 小鼠皮膚石蠟包埋切片后，免疫組化法檢測皮損真皮中CD3+T淋巴細胞的數(shù)量。

3.7Real-time PCR法檢測小鼠皮損中白細胞介素(interleukin,IL)-17、IL-23和IL-1β的mRNA表達水平 Real-time PCR法檢測小鼠皮損中IL-17、IL-23 和IL-1β的mRNA相對表達量?？瞻讓φ战M小鼠取與模型組相同部位同等大小的皮膚，采用TRIzol總RNA提取試劑盒進行皮膚RNA提取，cDNA反轉錄通過PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser 進行，ABI7500型熒光定量PCR儀用于擴增，2-ΔΔCt法進行數(shù)據(jù)的相對定量分析，引物序列詳見表1。

4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 18.0進行統(tǒng)計學分析，計量資料采用均數(shù)±標準差(mean±SD)表示，兩組比較采用t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

表1 Real-time PCR 引物序列

F: forward; R: reverse.

結 果

1 養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方對銀屑病樣小鼠背部皮損作用的動態(tài)觀察

小鼠背部皮膚變化動態(tài)觀察顯示，空白組小鼠皮膚光滑、柔軟，無鱗屑和紅斑；背部涂抹咪喹莫特后，小鼠皮膚逐漸變紅并形成紅斑，并有白色鱗屑長出，鱗屑黏著不易脫落，隨著涂抹天數(shù)的增加，鱗屑增多，紅斑變大顏色加深，且皮膚不斷增厚，浸潤嚴重，小鼠出現(xiàn)搔抓行為，與臨床銀屑病患者皮損表現(xiàn)類似；與模型組相比，用藥組小鼠鱗屑明顯變薄、減少，鱗屑厚度減輕，紅斑色淺面積小，皮膚增厚程度輕，浸潤不明顯，皮損癥狀均有所緩解；與養(yǎng)血組相比，養(yǎng)血解毒組和甲氨蝶呤組皮損處白色鱗屑稀少，皮膚較光滑、柔軟，浸潤輕，見圖1。

Figure 1. Skin lesions of the psoriasis-like mice in each group on the 7th day.

對小鼠背部皮損情況進行PASI評分，與空白組相比，背部涂抹咪喹莫特的小鼠第2天即有鱗屑、浸潤和紅斑表現(xiàn)，隨著涂抹天數(shù)的增加，鱗屑、浸潤、紅斑及總分都呈現(xiàn)上升趨勢，提示皮損不斷加重，其中第3～4天鱗屑增加程度最大，浸潤在第3～5天增加程度明顯，紅斑在第2～3天和第4～5天增加明顯；與模型組相比，用藥組皮損鱗屑、浸潤、紅斑評分及總分均明顯減少，上升趨勢緩慢；與養(yǎng)血方組相比，養(yǎng)血解毒方組和甲氨蝶呤組皮損處鱗屑增加緩慢，紅斑出現(xiàn)時間晚，面積小，顏色淺，見圖2。

Figure 2. PASI scores of the mice with psoriasis in each group.

2 養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方對銀屑病樣小鼠皮膚水分/油分含量的影響

造模前皮膚水分/油分檢測結果示，造模前各組小鼠背部皮膚水分/油分含量的差異無統(tǒng)計學顯著性；造模第7天，與空白組相比，模型組背部皮膚干燥，水分丟失嚴重(P<0.01)，油分含量明顯減少(P<0.01)；與模型組相比，養(yǎng)血解毒方組小鼠皮膚干燥程度低，水分/油分含量高(P<0.05)，養(yǎng)血方組、甲氨蝶呤組與模型組比較無顯著差異，見圖3。

Figure 3. The changes of Water-oil content of the back skin of the mice with psoriasis in each group. Mean±SD.n=10.** P<0.01vscontrol group;#P<0.05vsmodel group;△P<0.05vsYX group.

3 養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方對銀屑病樣小鼠皮損病理改變及表皮厚度的影響

顯微鏡下觀察HE染色結果，空白組表皮薄、細胞浸潤稀少；模型組表皮規(guī)則增生明顯，棘層肥厚，表皮同時存在角化不全與角化過度，角質層存在蓄積大量中性粒細胞和變性表皮細胞的Munro微膿腫，真皮層炎性細胞浸潤明顯，皮損病理特點表現(xiàn)與銀屑病患者類似；應用養(yǎng)血方、養(yǎng)血解毒方和甲氨蝶呤后，真皮層炎性細胞數(shù)目減少，表皮增生減輕，皮損組織的病理表現(xiàn)有所改善，且養(yǎng)血解毒方組和甲氨蝶呤組對表皮增生的改善作用更明顯，見圖4A。

使用IPP 6.0軟件測量HE染色后各組表皮垂直厚度，模型組明顯高于空白組(P<0.01)，養(yǎng)血方組與養(yǎng)血解毒方組低于模型組(P<0.05)，養(yǎng)血解毒方組與甲氨蝶呤組比較無顯著差異，見圖4B。

Figure 4. The histopathological observation of skin lesions (A; HE staining,×400) and epidermal thickness of skin lesions (B) in each group. Mean±SD.n=10.** P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group;△P<0.05vsYX group.

4 養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方對銀屑病樣小鼠皮損表皮PCNA表達的影響

免疫組化結果顯示，空白組表皮PCNA正常表達，于基底層呈線性分布，棘層較少甚至無表達；模型組表達量明顯增多，廣布于表皮層，顯微鏡(×400視野)下PCNA表達陽性細胞統(tǒng)計顯示，模型組表皮PCNA表達陽性細胞數(shù)明顯高于空白組(P<0.05),養(yǎng)血方組、養(yǎng)血解毒方組和甲氨蝶呤組PCNA陽性細胞數(shù)低于模型組(P<0.05)，養(yǎng)血解毒方組與養(yǎng)血方組比較，PCNA陽性細胞數(shù)明顯降低(P<0.05)，養(yǎng)血解毒方組PCNA陽性細胞數(shù)低于甲氨蝶呤組，但差異無統(tǒng)計學意義，見圖5。

5 養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方對銀屑病樣小鼠皮損真皮CD3表達的影響

免疫組化結果顯示，空白組皮損真皮層的CD3+T細胞水平低，零星分布；模型組分布較多，顯微鏡(×400)下CD3+T細胞的數(shù)量統(tǒng)計顯示，模型組明顯高于空白組(P<0.05)；養(yǎng)血方組、養(yǎng)血解毒方組和甲氨蝶呤組CD3+T細胞數(shù)量均低于模型組(P<0.05)；養(yǎng)血解毒方組的CD3+T細胞數(shù)量明顯低于養(yǎng)血方組(P<0.05)；養(yǎng)血解毒方組優(yōu)于甲氨蝶呤組，但差異無統(tǒng)計學意義,見圖6。

6 養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方對銀屑病樣小鼠皮損中IL-17、IL-23和IL-1β mRNA相對表達量的影響

Real-time PCR結果顯示，模型組皮損中IL-17、IL-23 和IL-1β的mRNA相對表達量均顯著高于空白組(P<0.01);應用養(yǎng)血方、養(yǎng)血解毒方和甲氨蝶呤后，3種細胞因子的mRNA相對表達較模型組均明顯降低(P<0.05)，養(yǎng)血解毒方組3種細胞因子mRNA相對表達量降低的程度高于養(yǎng)血方組(P<0.05)和甲氨蝶呤組(P<0.05)，見圖7。

Figure 5. The PCNA expression in the skin lesions and the quantitative analysis of the PCNA staining positive cell numbers in the skin lesions of each group (IHC,×400). Mean±SD.n=10.**P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group;△P<0.05vsYX group.

討 論

銀屑病俗稱“牛皮癬”，特征性損害為銀白色鱗屑、紅斑等，是臨床常見的慢性炎癥性皮膚疾病，其病情反復遷延，皮損、鱗屑和瘙癢等癥狀使患者承受著巨大的心理負擔，同時面臨體力活動、認知功能和生活質量等方面的降低。銀屑病的發(fā)病原因復雜多樣，主要是由遺傳易感性和多種環(huán)境刺激下引起的皮膚中異常免疫應答所驅動，患者體內以T細胞為代表的的免疫細胞常呈高度活化狀態(tài)，抑制細胞增殖及其下游細胞因子的分泌可以有效緩解銀屑病，在過去20年的研究也明確了IL-23/IL-17-T細胞軸在銀屑病發(fā)病機制中的中心作用[8]。其中輔助T細胞17(Th17)作為與自身免疫性疾病發(fā)病相關性極強的T細胞亞群，在銀屑病的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。與其相關的細胞因子IL-17和IL-23水平與疾病的嚴重程度與轉歸密切相關[9]。

IL-23主要由活化的樹突狀細胞分泌，是銀屑病發(fā)病的獨立危險因素之一，小鼠真皮注射IL-23可誘導角質細胞過度增殖、皮膚炎癥反應和銀屑病樣皮損。同時作為促Th17細胞因子，IL-23具有使記憶T細胞分泌IL-17，促進Th17細胞分化、增殖的作用，銀屑病患者的外周血中存在著IL-23和Th17類細胞因子的升高，在銀屑病患者皮損處，IL-23mRNA和IL-17mRNA大量存在，明顯高于正常皮膚[10]。IL-1β由T細胞活化產(chǎn)生，在銀屑病發(fā)生發(fā)展的多個環(huán)節(jié)中發(fā)揮重要作用，已有研究表明IL-1β表達程度與皮損嚴重程度有關[11]。

目前廣泛應用的銀屑病研究模型為咪喹莫特誘導的小鼠模型，可快速誘導出與人類銀屑病相似的皮膚表現(xiàn)。咪喹莫特為治療尖銳濕疣的臨床藥物，作用在于促進皮膚炎癥因子產(chǎn)生而發(fā)揮抗病毒功效。在模型建立過程中，咪喹莫特通過激活Toll樣受體，激活T淋巴細胞，誘導小鼠皮膚出現(xiàn)銀屑病樣改變，在臨床特征、組織病理和發(fā)病分子學特征方面，與人類銀屑病發(fā)病機制極為相似，操作簡單、重復性好，同時存在T細胞高度活化的狀態(tài)，可用于闡明銀屑病發(fā)病機制和驗證藥物的療效[12]。

Figure 6. CD3+cells in the skin lesions and the quantitative analysis of CD3+positive cell numbers in the skin lesions in each group (IHC，×400). Mean±SD.n=10.** P<0.01vscontrol group;#P<0.05vsmodel group;△P<0.05vsYX group.

Figure 7. The relative mRNA expression of IL-1β, IL-17 and IL-23 in the skin lesions of each group. Mean±SD.n=10.** P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group;△P<0.05vsYX group;▲P<0.05vsMTX group.

祖國醫(yī)學歷代醫(yī)家對銀屑病的病因病機多論述為血虛燥熱、皮膚失養(yǎng)，并總結出以血熱、血燥與血瘀為主的內在病因，可知“血分”為銀屑病研究的切入點[13]。外邪或內傷等致病因素入侵，蘊久化熱，熱入營血，熱邪蒸津灼血，血瘀血滯，瘀久成毒，毒損血絡，進一步灼傷營血，化燥生風，導致肌膚失養(yǎng)，因此血分蘊毒體現(xiàn)了銀屑病的實質病機，而血燥與毒熱又貫穿了銀屑病的始終，臨床治療遵循從血論治，采用具有養(yǎng)血和解毒功效的中藥對血燥證銀屑病具有較好療效[14]。養(yǎng)血解毒方是北京中醫(yī)醫(yī)院臨床治療銀屑病的有效方劑，由當歸、生地黃、丹參、雞血藤、麥冬、玄參、天花粉、土茯苓、白花蛇舌草等組成，其中土茯苓和雞血藤為君藥，土茯苓甘淡平，涼血解毒利濕，雞血藤溫苦甘，養(yǎng)血活血通絡；當歸、生地、丹參養(yǎng)血活血，板藍根、白花蛇舌草清熱解毒，玄參、麥冬、天花粉清熱養(yǎng)陰，全方共奏養(yǎng)營血、清毒熱之效[15]。為了進一步研究養(yǎng)血解毒方的作用機制，對其組成進行深入探索，以利于臨床用藥優(yōu)化，我們將養(yǎng)血解毒方篩選出養(yǎng)血類藥物組成養(yǎng)血方，由當歸、生地黃、丹參、雞血藤、麥冬、天花粉等組成。

本次研究中，對銀屑病樣小鼠皮損發(fā)展動態(tài)觀察顯示，模型組小鼠背部涂抹咪喹莫特后逐漸出現(xiàn)白色鱗屑、紅色斑點和皮膚增厚，并隨著涂抹天數(shù)的增加，鱗屑逐漸增大，紅斑面積增加、顏色變深，甚至有出血點，皮膚浸潤肥厚嚴重，且皮損干燥程度嚴重，小鼠搔抓行為增多，符合臨床銀屑病患者的表現(xiàn)；同時，HE染色觀察皮損病理表現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，模型組表皮細胞過度增殖與角化不全大量存在，表皮厚度增加。應用養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方后，對小鼠皮損癥狀均有改善作用，從鱗屑表現(xiàn)，紅斑顏色、面積，皮膚增厚程度來看，養(yǎng)血解毒方效果優(yōu)于養(yǎng)血方，鱗屑薄且少，皮損表現(xiàn)較光滑、柔軟，紅斑色淺、面積小，浸潤程度更輕。臨床常用PASI評分評估藥物對銀屑病的療效作用，根據(jù)PASI評分標準對小鼠進行評分的結果顯示，模型組皮損積分呈現(xiàn)逐步上升的趨勢，且從第3天開始，疾病的發(fā)展速度加快，皮損加重的程度更大，開始出現(xiàn)銀屑病發(fā)展的高峰期。應用養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方后，兩者都可以降低小鼠鱗屑、浸潤和紅斑的積分，皮損發(fā)展趨勢均比模型組緩慢且癥狀輕；養(yǎng)血解毒方與養(yǎng)血方比較，其疾病嚴重程度更低，同時在降低疾病發(fā)展速度、減輕皮損加重程度上，養(yǎng)血解毒方優(yōu)于養(yǎng)血方。HE染色顯示，養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方均可以減少表皮厚度，對角質細胞的過度增殖和角化不全有抑制作用，其中，養(yǎng)血解毒方對減輕表皮厚度的程度明顯大于養(yǎng)血方。

皮膚是人體的第一道防線，對維持人體內環(huán)境的穩(wěn)態(tài)以及抵御外界有害因素的損傷有著不可或缺的作用，完整的皮膚屏障是皮膚發(fā)揮物理和化學屏障功能的先決條件，它可為機體隔離外界有害因素，抵抗機體所受的侵襲和損傷，同時防止體內營養(yǎng)物質、水分的丟失[16]。對于炎癥性皮膚疾病，表皮屏障功能破壞會導致表皮的增生，炎性細胞浸潤增加，局部炎癥反應更加劇烈，銀屑病患者皮損長期炎癥反應及物理搔抓會導致皮膚表皮屏障功能嚴重降低[17]。表皮水分、油脂含量是反映表皮屏障功能的重要指標，實驗中皮膚水分/油分含量檢測結果顯示，養(yǎng)血解毒方可以降低水分/油分散失的水平，對維護表皮屏障功能、減少經(jīng)皮水分丟失程度有作用，而養(yǎng)血方與模型組比較無差異。結合銀屑病由血分熱毒蘊結引發(fā)血虛風燥、肌膚失養(yǎng)的發(fā)病機制，以及患者表皮細胞消化不全、炎性細胞過度浸潤等表皮屏障功能下降的臨床表現(xiàn)，提示養(yǎng)血解毒方以養(yǎng)血類藥物配伍土茯苓、板藍根、白花蛇舌草為代表的解毒類藥物對皮膚屏障功能的恢復具有一定的作用。

角質細胞的異常增殖與活化作為銀屑病皮損主要病理表現(xiàn)，是引起表皮異常增厚的重要原因，PCNA是反映細胞增殖情況的指標[18]，免疫組化法檢測皮損表皮層細胞活躍程度發(fā)現(xiàn)，模型組PCNA含量明顯高于空白組，皮損表皮層細胞活躍程度高，大量存在細胞的過度增殖，養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方應用后可以抑制表皮細胞增殖，將表皮細胞增殖局限于基底層，而養(yǎng)血解毒方組與養(yǎng)血方組比較，養(yǎng)血解毒方組在調節(jié)表皮細胞分化方面優(yōu)于養(yǎng)血方組。

T淋巴細胞異常活化和浸潤導致的過度免疫反應是銀屑病典型特征[19]，免疫組化法檢測真皮層T細胞浸潤情況發(fā)現(xiàn)，與空白組相比，模型組皮損真皮層CD3+T細胞浸潤明顯；養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方應用后可以減少真皮層CD3+T淋巴細胞浸潤，而養(yǎng)血解毒方組與養(yǎng)血方組比較，養(yǎng)血解毒方組在抑制真皮層T細胞浸潤方面均優(yōu)于養(yǎng)血方組，表明養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方均可以抑制T細胞增殖，減輕小鼠皮膚免疫反應，達到緩解癥狀的目的，而養(yǎng)血解毒方效果優(yōu)于養(yǎng)血方。

基于文獻與前期研究基礎，我們明確皮損炎癥相關因子IL-23、IL-17和IL-1β處于免疫信號通路下游，可作用于角質細胞、內皮細胞等介導皮膚炎癥反應，促進銀屑病樣皮損的形成[20]。采用real-time PCR法檢測銀屑病樣小鼠皮損中IL-17、IL-23和IL-1β的mRNA表達水平發(fā)現(xiàn)，模型組IL-17、IL-23和IL-1β的mRNA相對表達量均明顯上升，這與我們前期研究及文獻報道一致。養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方能夠降低IL-17、IL-23和IL-1β的mRNA相對表達量，其中養(yǎng)血解毒方組IL-1β的mRNA相對表達量低于養(yǎng)血方組，這表明養(yǎng)血解毒方與養(yǎng)血方對Th17細胞通路具有明顯的抑制作用，而養(yǎng)血解毒方的作用更明顯。

本次研究中，我們通過建立咪喹莫特誘導的銀屑病樣小鼠模型，觀察到養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方對小鼠皮損的緩解作用，并對作用機制進行探討后發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)血方與養(yǎng)血解毒方可通過減少T細胞浸潤，抑制Th17通路，減輕免疫反應，降低皮損內相關炎癥細胞與炎癥因子水平達到治療目的。養(yǎng)血解毒方在治療銀屑病小鼠方面效果更佳，作用更全面，在阻斷IL-17/IL-23-T細胞軸炎癥反應時，養(yǎng)血解毒方中養(yǎng)血類藥物與解毒類藥物起到了協(xié)同作用；同時，養(yǎng)血解毒方可改善銀屑病表皮屏障功能，而養(yǎng)血方不具備此作用，這是由解毒類藥物單獨發(fā)揮此作用，或養(yǎng)血藥物與解毒藥物配伍發(fā)揮作用，仍待進一步探索。甲氨蝶呤是臨床治療銀屑病常用的免疫抑制劑，該藥可改善患者癥狀，但安全性較差，易引起諸多不良反應而導致患者依從性差、治療中斷等，出現(xiàn)病情反復甚至加重現(xiàn)象，難以達到預期療效。本次研究顯示，養(yǎng)血解毒方與甲氨蝶呤相比，對于改善皮損表現(xiàn)差異不明顯，但在提高皮膚屏障功能、降低炎癥因子表達水平方面，養(yǎng)血解毒方優(yōu)于甲氨蝶呤。針對銀屑病病因未完全明確、無特效藥物的現(xiàn)狀，復方中藥因臨床療效確切且不良反應少成為研究熱點，具體作用機制亟待我們深入探索。以上研究為中醫(yī)藥臨床治療提供了基礎理論依據(jù)，并為方劑的優(yōu)化提供方向。