鄭龍榮

【摘要】 目的：對(duì)九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體早期檢測(cè)的臨床意義進(jìn)行探究。方法：從2014年9月-2017年8月筆者所在醫(yī)院收治的疑似呼吸道感染患者中抽取9 432例為研究對(duì)象，抽取靜脈血檢測(cè)九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體，并對(duì)結(jié)果與意義進(jìn)行分析。結(jié)果：9 432例疑似呼吸道感染患者的檢出率為26.59%（2 508/9 432），其中嗜肺軍團(tuán)菌血清1型-IgM（LP）陽(yáng)性占陽(yáng)性病例百分率為0，肺炎支原體-IgM（MP）為67.26%、Q熱立克次體-IgM（COX）為0.56%、肺炎衣原體-IgM（CP）為1.48%、腺病毒-IgM（ADV）為1.24%、呼吸道合胞病毒-IgM（RSV）為1.87%、甲型流感病毒-IgM（IN-FA）為0.60%、乙型流感病毒-IgM（IN-FB）為7.41%、副流感病毒-IgM（PIV）為19.58%。結(jié)論：九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體早期檢出陽(yáng)性率高，病原體種類(lèi)多，對(duì)呼吸道感染的診斷與治療具有重要臨床意義。

【關(guān)鍵詞】 呼吸道感染； 病原體； 熒光抗體技術(shù)； 間接； IgM抗體

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.11.025 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2018）11-0052-02

呼吸道感染在臨床上具有較高的發(fā)病率，主要誘因?yàn)榧?xì)菌等病原體感染。臨床資料證實(shí)，超過(guò)90%的上呼吸道感染患者發(fā)病原因?yàn)椴《靖腥綶1-2]。該病病原學(xué)比較復(fù)雜，并且具有季節(jié)流行特征。探究更為迅速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方式對(duì)于呼吸道感染的診斷與治療意義重大。本次研究將筆者所在醫(yī)院9 432例疑似呼吸道感染患者作為研究對(duì)象，對(duì)九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體早期檢測(cè)的臨床意義進(jìn)行探究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

于2014年9月-2017年8月筆者所在醫(yī)院收治的疑似呼吸道感染患者中抽取9 432例為研究對(duì)象，所選患者均有明顯呼吸道感染的臨床表現(xiàn)，排除合并嚴(yán)重心肝腎等器官功能障礙患者?；颊呔げ杉瘮?shù)據(jù)的目的和用途，研究獲得患者同意，研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。其中男5 561例、女3 871例，年齡60 d～105歲，平均（23.6±0.9）歲。臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、咽部充血、喘息、肺部濕啰音、扁桃體腫大者分別有5 214、3 624、2 154、7 489、1 478、4 157例。

1.2 方法

患者靜脈抽血，抽血量為2.0 ml，血清樣本采集后在8 h內(nèi)檢測(cè)，否則應(yīng)在2 ℃～8 ℃冷藏，如7 d內(nèi)不檢測(cè)，則應(yīng)冷凍（<-20 ℃）保存。采用間接免疫熒光法。

1.2.1 檢測(cè)試劑 試劑為西班牙VIRCELL公司原裝進(jìn)口產(chǎn)品，購(gòu)自鄭州安圖生物有限公司。將九種抗原吸附在載玻片上，包括嗜肺軍團(tuán)菌血清1型-IgM（LP）、肺炎支原體-IgM（MP）、Q熱立克次體-IgM（COX）、肺炎衣原體-IgM（CP）、腺病毒-IgM（ADV）、呼吸道合胞病毒-IgM（RSV）、甲型流感病毒-IgM（IN-FA）、乙型流感病毒-IgM（IN-FB）、副流感病毒-IgM（PIV）。檢測(cè)人血清中相應(yīng)的呼吸道感染病原體IgM抗體，待測(cè)樣本中的IgM抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生特異性反應(yīng)，再與熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白反應(yīng)，形成抗原-抗體-抗人IgM-FITC復(fù)合物，最后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。其他試劑還包括抗人IgM磷酸緩沖液、吸附劑、PBS溶液等。

1.2.2 檢測(cè)儀器 熒光顯微鏡[產(chǎn)品型號(hào)：CX23LEDRFS1C；生產(chǎn)單位：奧林巴斯（廣州）工業(yè)有限公司]，恒溫水浴箱（型號(hào)：TL型電熱恒溫水浴箱；生產(chǎn)單位：姜堰市天力醫(yī)療器械有限公司），水平搖床（型號(hào)：KJ-201BD型水平搖床；生產(chǎn)單位：江蘇康健醫(yī)療用品有限公司），低速離心機(jī)（型號(hào)：DD-5M；生產(chǎn)單位：湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司），臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（型號(hào)：TGL-16；生產(chǎn)單位：湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司）。

1.2.3 檢測(cè)方式 使用PBS洗液將25 μl血清等比例稀釋?zhuān)缓髮⑾♂尯蟮臉悠?0 μl與150 μl吸附劑充分緩和均勻，在13 000 r/min的速度下離心10 min，防止檢測(cè)被其他因素干擾，將沉淀去除。將使用吸附劑處理后的血清放入載玻片的孔中，15 μl/孔。將未稀釋的15 μl陽(yáng)性對(duì)照放入一個(gè)載玻片的每個(gè)孔中，然后將未稀釋的15 μl陰性對(duì)照放入另一個(gè)載玻片的每個(gè)孔中。把載玻片放入37 ℃的濕盒中培育1.5 h。使用PBS洗液對(duì)載玻片進(jìn)行沖洗，然后將載玻片浸泡在PBS洗液中，使用水平搖床輕輕搖動(dòng)10 min。將載玻片在蒸餾水中簡(jiǎn)單蘸洗，然后自然晾干。每孔加入15 μl抗人IgM FITC結(jié)合物溶液（不需稀釋?zhuān)演d玻片放入37 ℃的濕盒中溫育0.5 h。將前面洗滌晾干步驟重復(fù)進(jìn)行，然后將封閉介質(zhì)加入，蓋上蓋玻片。盡快用熒光顯微鏡在400倍放大率下對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察。ADV、IN-FA、IN-FB、RSV、PIV陽(yáng)性表現(xiàn)為：陽(yáng)性血清1%～15%細(xì)胞的細(xì)胞核、胞漿為蘋(píng)果綠色熒光；LP、CP、COX陽(yáng)性表現(xiàn)為：全部細(xì)菌為蘋(píng)果綠色熒光；MP陽(yáng)性表現(xiàn)為：細(xì)胞外圍為蘋(píng)果綠色熒光。

2 結(jié)果

9 432例疑似呼吸道感染患者中，檢出率為26.59%（2 508/

9 432），其中LP陽(yáng)性占陽(yáng)性病例百分率為0，MP為67.26%、COX為0.56%、CP為1.48%、ADV為1.24%、RSV為1.87%、IN-FA為0.60%、IN-FB為7.41%、PIV為19.58%，見(jiàn)表1。

3 討論

誘發(fā)呼吸道感染的病原菌種類(lèi)多樣，例如病毒、衣原體、支原體等[3-4]。當(dāng)前人類(lèi)生活環(huán)境的持續(xù)惡化使得病原微生物毒性與病原性隨之變化，加上臨床上多種抗生素應(yīng)用范圍的拓寬，細(xì)菌性感染率有所下降，但病毒性感染率卻有所上升，病原體感染所占比例也發(fā)生了變化，提升了用藥準(zhǔn)確、對(duì)癥治療的難度[5-6]。九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體早期檢測(cè)只使用一份血清樣本就能實(shí)現(xiàn)九項(xiàng)病原體檢測(cè)，具有重要的臨床價(jià)值。檢測(cè)這些病原體有很多方式，例如分離培養(yǎng)、PCR等[7-8]。呼吸道感染，尤其是下呼吸道感染的診斷通常使用實(shí)驗(yàn)室檢查的方式，但并不能達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。分離培養(yǎng)的方式過(guò)去雖然被大多數(shù)臨床工作者認(rèn)可，但需要花費(fèi)較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間，并具有較高的技術(shù)難度，已經(jīng)被分子生物學(xué)的檢測(cè)方式取代[9-10]。但分子生物學(xué)需要較高的實(shí)驗(yàn)室條件，不能實(shí)現(xiàn)大多數(shù)的病原菌檢測(cè)[11-12]。當(dāng)前血清學(xué)檢測(cè)操作便捷、經(jīng)濟(jì)，使用范圍逐漸拓寬[13]。

郭紅仙等[8]研究顯示，九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體早期檢測(cè)結(jié)果中MP陽(yáng)性率最高，陽(yáng)性感染率為30.2%，其次為IN-FB（15.8%）。提示引發(fā)呼吸道感染的病毒主要為MP。本次研究結(jié)果顯示，9 432例疑似呼吸道感染患者中，檢出率為26.59%（2 508/9 432），在陽(yáng)性例數(shù)中，其中LP占陽(yáng)性病例百分率為0，MP為67.26%、COX為0.56%、CP為1.48%、ADV為1.24%、RSV為1.87%、IN-FA為0.60%、IN-FB為7.41%、PIV為19.58%。在引發(fā)呼吸道感染的病毒中，MP最為常見(jiàn)，是感染率最高的呼吸道病原體，引發(fā)上呼吸道感染與肺炎；其次是PIV，可導(dǎo)致呼吸道疾病，突然發(fā)熱，輕微呼吸道感染；然后依次為IN-FB、RSV、CP、ADV、IN-FA、COX，LP檢出率為0，可能是由于該次研究樣本數(shù)量不足，需要進(jìn)一步選取大數(shù)量樣本深入探索。

綜上所述，九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體早期檢測(cè)能實(shí)現(xiàn)較高的陽(yáng)性檢出率，在呼吸道感染的診斷與治療中能夠發(fā)揮重要的臨床作用。

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（收稿日期：2017-11-02）