陳惠嫻 張真真 萬貴平

[摘要] 目的 探討血清中人CXC型趨化因子配體16（CXCL16）對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的診斷價(jià)值。 方法 選取2016年1月～2017年12月，在江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院婦科住院行腹腔鏡手術(shù)的47例患者，其中27例子宮內(nèi)膜異位癥患者及20例無子宮內(nèi)膜異位癥患者。分別測定患者的血清CXCL16水平，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并繪制受試者工作特征曲線（ROC曲線），評(píng)價(jià)其對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的診斷價(jià)值。 結(jié)果 子宮內(nèi)膜異位癥患者的血清CXCL16水平明顯高于無子宮內(nèi)膜異位癥患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；不同月經(jīng)分期（卵泡期、排卵期、黃體期）的子宮內(nèi)膜異位癥患者間CXCL16的表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。Ⅲ、Ⅳ期子宮內(nèi)膜異位癥患者的血清CXCL16水平顯著低于Ⅰ期患者（P < 0.05），且與Ⅱ期患者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。ROC曲線分析顯示ROC曲線下的面積為0.768，CI：0.63～0.905，特異性和敏感性總和最高的截?cái)嘀禐?.9750，特異性為50%，靈敏度為96.3%。 結(jié)論 血清CXCL16是一種有價(jià)值的生物標(biāo)志物，可為子宮內(nèi)膜異位癥提供一種簡單的非侵入性診斷方法。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜異位癥；人CXC型趨化因子配體16；白介素-8；黏附分子

[中圖分類號(hào)] R711.71 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2018）05（c）-0092-04

The expression and diagnostic value of CXCL16 in patients with endometriosis

CHEN Huixian1 ZHANG Zhenzhen2 WAN Guiping2▲

1.The Third Clinical Medicine， Nanjing University of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing 210046； 2.Department of Gynaecology and Obstetrics， Affiliated Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine， Nanjing University of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing 210028

[Abstract] Objective To investigate the diagnostic value of human CXC chemokine ligand 16 （CXCL16） in the diagnosis of endometriosis. Methods Forty-seven patients who underwent laparoscopic surgery from January 2016 to December 2017 in Affiliated Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine， Nanjing University of Chinese Medicine were selected， and were divided into observation group with endometriosis （27 cases） and control group without endometriosis （20 cases）. All the levels of serum CXCL16 were tested and the receiver operating characteristic curve （ROC curve） was drawn in order to evaluate the diagnostic value. Results The serum CXCL16 levels in observation group were significantly higher than those in control group， the difference was statistically significant （P < 0.05）. Patients with different menstrual stages （follicular phase， ovulation phase， luteal phase） was found had no statistically significant difference （P > 0.05）. The CXCL16 leves of patients in stage Ⅲ and Ⅳ endometriosis were significantly lower than that in stage Ⅰ （P < 0.05）， and had no statistical difference with stage stage Ⅱ patients （P > 0.05）. The ROC curve analysis showed that the area under the ROC curve was 0.768， CI：0.63-0.905， and the cutoff value of the highest total of specificity and sensitivity was 0.9750， specificity was 50% and sensitivity was 96.3%. Conclusion The serum CXCL16 is a valuable biomarker and it may provide a simple， non-invasive tool for the diagnosis of endometriosis.

[Key words] Endometriosis； Human CXC chemokine ligand 16； IL-8； CAM

子宮內(nèi)膜異位癥是一種婦科常見疾病，特征在于功能性的子宮內(nèi)膜出現(xiàn)在卵巢、宮底韌帶、腹膜和子宮直腸凹等子宮體以外的部位。其主要臨床表現(xiàn)包括痛經(jīng)、慢性盆腔痛、性交困難、不孕等[1]，在生育期的女性中發(fā)病率為6%～10%[2]，在不孕癥患者中的發(fā)病率甚至高達(dá)35%[3]，且呈逐年升高的趨勢，成為嚴(yán)重影響育齡女性健康的良性疾病之一。目前臨床診斷子宮內(nèi)膜異位癥的金標(biāo)準(zhǔn)是腹腔鏡檢查[4]，然而，這種侵入性的診斷方法會(huì)帶來與手術(shù)相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)，且會(huì)導(dǎo)致平均10年的診斷延遲[5]。非手術(shù)方法如影像學(xué)檢查、血液腫瘤標(biāo)志物檢測等，目前仍不能作為準(zhǔn)確的診斷方法[6]。影像學(xué)檢查包括陰道超聲檢查、盆腔磁共振成像、CT等，但子宮內(nèi)膜異位癥的影像學(xué)表現(xiàn)與其他不同性質(zhì)的盆腔腫物的表現(xiàn)圖像相似，易造成混淆、誤診[7-8]。鑒于臨床子宮內(nèi)膜異位癥的高發(fā)病率及嚴(yán)重的臨床表現(xiàn)，盡早發(fā)現(xiàn)一種用于早期篩查子宮內(nèi)膜異位癥的非手術(shù)方法，例如血清生物標(biāo)志物，已成為近年來研究的重點(diǎn)。

血清中人CXC型趨化因子配體16（CXC chemokine ligand 16，CXCL16）作為趨化因子配體家族的成員，具有促炎及增加黏附的作用，可能與子宮內(nèi)膜異位癥的早期黏附種植有關(guān)。本項(xiàng)研究通過檢測子宮內(nèi)膜異位癥患者和無子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中CXCL16的水平，判斷其是否可以作為診斷子宮內(nèi)膜異位癥的可靠非侵入性生物標(biāo)志物。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月～2017年12月在江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院婦科住院（以下簡稱“我院”），行腹腔鏡手術(shù)的患者共47例，27例患者均為腹腔鏡及術(shù)后病理明確診斷的子宮內(nèi)膜異位癥患者，其中腹壁子宮內(nèi)膜異位癥2例，卵巢子宮內(nèi)膜異位癥25例，符合《2015年子宮內(nèi)膜異位癥的診治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]，②無子宮內(nèi)膜異位癥患者20例，其中子宮肌瘤15例，卵巢成熟型畸胎瘤5例，患者均經(jīng)腹腔鏡及術(shù)后病理明確診斷。

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均為年齡在18～50歲的未絕經(jīng)女性，所有入選研究者年齡組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。排除標(biāo)準(zhǔn)：哺乳期、有心肝腎慢性疾病、自身免疫性疾病、惡性腫瘤、傳染性疾病的患者，且術(shù)前3個(gè)月有激素治療史。

按照1995年美國生育協(xié)會(huì)修正分期法（R-AFS）[10]對(duì)患者進(jìn)行分期，在27例子宮內(nèi)膜異位癥患者中，Ⅰ期3例，占11%；Ⅱ期2例，占7%；Ⅲ期11例，占41%；Ⅳ期11例，占41%。本研究方案經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，參與研究者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集及處理 所有入選對(duì)象手術(shù)前抽取靜脈血2～3 mL，靜置2 h后室溫3000 r/min離心10 min，取上層血清進(jìn)行分裝，存放于-80℃冰箱，避免反復(fù)凍融。

1.2.2 主要試劑 CXCL16檢測用上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司酶聯(lián)免疫吸附測定（Elisa）試劑盒，內(nèi)含酶標(biāo)包被板96孔（12孔×8條）、標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、樣品稀釋液、30倍濃縮洗滌液、酶標(biāo)試劑、顯色劑A液、顯色劑B液、終止液、封板膜、密封袋。

1.2.3 主要儀器 臺(tái)式低速離心機(jī)（湖南赫西儀器裝備有限公司）、醫(yī)用高速離心機(jī)（Eppendorf）、醫(yī)用深凍冰箱（Thermo Fisher Scientific）、自動(dòng)分析酶標(biāo)儀（Tecan公司Infinite 200 Pro NanoQuant）。

1.2.4 檢測方法 采用Elisa測定標(biāo)本中的CXCL16濃度。將稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品、1︰5稀釋后的血清樣品加入到酶標(biāo)板孔中，溫育洗滌后加入酶標(biāo)試劑，再次溫育洗滌，依次加入顯色劑A、B，避光37℃顯色10 min后，加入終止液，用酶標(biāo)儀測定450 nm波長各孔的吸光度（OD值），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線來計(jì)算樣品中CXCL16的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩樣本計(jì)量資料比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，多組間比較采用多因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。為了確定CXCL16在診斷子宮內(nèi)膜異位癥中的敏感性和特異性，采用ROC曲線分析，計(jì)算ROC曲線下面積（AUC）和95%CI。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的血清中CXCL16水平比較

子宮內(nèi)膜異位癥患者血清CXCL16水平為（1.7437±0.6614）pg/mL，明顯高于無子宮內(nèi)膜異位癥患者[（1.0700±0.5632）pg/mL]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。

2.2 子宮內(nèi)膜異位癥患者不同月經(jīng)分期、不同疾病分期的血清CXCL16比較

不同月經(jīng)分期（卵泡期、排卵期、黃體期）子宮內(nèi)膜異位癥患者間的CXCL16水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；不同疾病分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期）子宮內(nèi)膜異位癥患者間的CXCL16水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；Ⅲ、Ⅳ期的血清CXCL16水平顯著低于Ⅰ期患者，與Ⅱ期患者比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表1。

2.3 血清CXCL16在子宮內(nèi)膜異位癥診斷中的敏感性與特異性

為進(jìn)一步研究血清CXCL16水平在子宮內(nèi)膜異位癥診斷中的可行性，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行了ROC AUC分析。ROC曲線分析結(jié)果顯示AUC為0.768（CI：0.63～0.905），特異性和敏感性總和最高的截?cái)嘀禐?.9750，提供50%的特異性和96.3%的靈敏度。

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥是一種婦科慢性炎性疾病，在某些方面具有與惡性腫瘤相似的特點(diǎn)：進(jìn)行性和浸潤性生長、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移傾向。目前診斷子宮內(nèi)膜異位癥的方法包括腹腔鏡手術(shù)、病理活檢、影像學(xué)檢查等，這些方法均不能在疾病早期提示病情的發(fā)生，甚至腹腔鏡會(huì)導(dǎo)致延遲10年的診斷。血清腫瘤標(biāo)志物如CA125在臨床診斷子宮內(nèi)膜異位癥中應(yīng)用廣泛，近年來研究發(fā)現(xiàn)血清CA125水平可用于輔助進(jìn)行R-AFS分期和確診病變部位，可作為鑒別子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢囊腫及子宮腺肌癥的輔助診斷指標(biāo)，但其對(duì)早期疾病的診斷以及相關(guān)疾病的鑒別診斷仍缺乏敏感性和特異性[11]。與此同時(shí)，子宮內(nèi)膜異位癥有多種發(fā)病學(xué)說，包括經(jīng)血逆流、體腔上皮化生、免疫缺陷等[12]，由于其病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未明確，也成為早期診斷子宮內(nèi)膜異位癥的主要障礙。因此，臨床上迫切需要一種高效、敏感、非侵入性的診斷方法。以往研究在尋找合適的標(biāo)志物時(shí)是通過可能相關(guān)的生物標(biāo)志物在血清中的水平的檢測，并與無子宮內(nèi)膜異位癥患者比較分析后從中篩選出合適的結(jié)果，但結(jié)果經(jīng)常不一致。

CXCL16是趨化因子配體家族的成員，通過與受體CXCR6結(jié)合后能夠促進(jìn)細(xì)胞的生長、遷移、侵襲[13]。CXCL16的可溶性形式可作為化學(xué)引誘劑促進(jìn)細(xì)胞遷移[14]，跨膜CXCL16可以作為表達(dá)CXCR6的細(xì)胞的細(xì)胞黏附分子[15]。有研究提示CXCL16在動(dòng)脈粥樣硬化中有增加內(nèi)皮黏附及促炎作用，與疾病發(fā)展有關(guān)，可用于冠心病的臨床診斷[16]；還與腎病的炎性反應(yīng)、纖維化有關(guān)[17]。在宮頸癌患者中，其血清CXCL16水平與腫瘤的生長、侵襲有關(guān)[18]，近年來已成為多種臨床疾病的研究熱點(diǎn)。本研究檢測了子宮內(nèi)膜異位癥和無子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中CXCL16的水平，判斷其是否可以作為非侵入性生物標(biāo)志物，用于子宮內(nèi)膜異位癥的診斷；判斷其診斷子宮內(nèi)膜異位癥的敏感性與特異性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥患者的血清CXCL16水平與無子宮內(nèi)膜異位癥患者比較明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），提示血清CXCL16水平可用于區(qū)分子宮內(nèi)膜異位癥和無子宮內(nèi)膜異位癥患者。相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)，CXCL16在異位內(nèi)膜的間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，能促進(jìn)IL-8的分泌，通過調(diào)控子宮內(nèi)膜異位癥的炎性反應(yīng)及細(xì)胞增殖，參與疾病的發(fā)生發(fā)展[19]，這些研究發(fā)現(xiàn)CXCL16能促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞IL-8的分泌，而IL-8又能調(diào)控細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）和血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）的表達(dá)[20]，ICAM-1及VCAM-1作為黏附分子參與異位內(nèi)膜的黏附種植，故血清CXCL16水平在早期診斷子宮內(nèi)膜異位癥中具有臨床意義。不同月經(jīng)分期（卵泡期、排卵期、黃體期）的子宮內(nèi)膜異位癥患者間CXCL16水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），提示血清CXCL16作為診斷子宮內(nèi)膜異位癥的標(biāo)志物具有穩(wěn)定性。比較不同分期子宮內(nèi)膜異位癥患者血清CXCL16水平，發(fā)現(xiàn)Ⅲ、Ⅳ期患者顯著低于Ⅰ期患者（P < 0.05），且與Ⅱ期患者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。ROC曲線分析顯示AUC為0.768，CI：0.63～0.905，特異性和敏感性總和最高的截?cái)嘀禐?.9750，提供50%的特異性和96.3%的靈敏度，提示CXCL16可以作為子宮內(nèi)膜異位癥早期診斷的穩(wěn)定的生物學(xué)標(biāo)志物，且具有較高的特異性及敏感性。

綜上所述，本研究提供了新的證據(jù)表明，血清CXCL16是一種診斷子宮內(nèi)膜異位癥的有價(jià)值的新型生物標(biāo)志物，但樣本量相對(duì)較小，需謹(jǐn)慎參考結(jié)果，同時(shí)需要在其他獨(dú)立的患者樣本中進(jìn)行驗(yàn)證和校準(zhǔn)。此次研究優(yōu)勢在于具有專門研究子宮內(nèi)膜異位癥的課題組，使試驗(yàn)?zāi)軌蜥槍?duì)候選生物標(biāo)志物的檢測結(jié)果進(jìn)行大樣本的研究分析，從而進(jìn)一步確定是否可以使用血清CXCL16水平作為診斷子宮內(nèi)膜異位癥的非侵入性方法，避免目前流行的診斷方法所致的延誤和手術(shù)損傷。

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（收稿日期：2018-04-12 本文編輯：任 念）