李小娟　嚴(yán)興科　曹朝霞

摘要：目的 觀察電針對急性期面神經(jīng)損傷兔細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子（SOCS）1、SOCS3蛋白表達(dá)的影響，確定其較佳刺激量。方法 將新西蘭兔面神經(jīng)用特制止血鉗壓榨5 min，損傷長度約2.5 cm，制作面神經(jīng)損傷模型。實(shí)驗(yàn)分為空白組、假手術(shù)組、模型組和電針弱、中、強(qiáng)刺激組。電針各組術(shù)后1 d予不同刺激量治療，連續(xù)7 d，模型組術(shù)后不予任何干預(yù)。治療結(jié)束后截取各組受損面神經(jīng)，采用ABC-ELISA檢測介導(dǎo)JAK-STAT負(fù)反饋調(diào)節(jié)SOCS1、SOCS3的蛋白表達(dá)。結(jié)果 與空白組比較，模型組兔SOCS1、SOCS3蛋白表達(dá)增加（P<0.01）；與模型組比較，電針弱刺激組SOCS1、SOCS3蛋白表達(dá)降低（P<0.01）。結(jié)論 面神經(jīng)損傷急性期電針弱刺激可使SOCS1、SOCS3蛋白表達(dá)趨于正常，電針治療效應(yīng)不隨刺激量的增強(qiáng)而增加。

關(guān)鍵詞：電針；電刺激量；面神經(jīng)損傷；細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1；細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3；兔

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.06.016

中圖分類號：R245 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號：1005-5304（2018）06-0066-03

Effects of Different Stimulation of Electroacupuncture on Protein Expressions of

SOCS1 and SOCS3 in Rabbits with Acute Facial Nerve Injury

LI Xiao-juan， YAN Xing-ke， CAO Zhao-xia， WEI Yu-ting， ZHAO Zhong-ting

Gansu University of Chinese Medicine， Lanzhou 730000， China

Abstract： Objective To investigate the effects of different stimulation of electroacupuncture on the protein expressions of SOCS1 and SOCS3 in rabbits with acute facial nerve injury； To determine the better stimulation. Methods New Zealand rabbits were treated with special hemostatic forceps for 5 min， and the length of the lesion was about 2.5 cm. The model of facial nerve injury was induced. The experiment was divided into blank group， sham-operation group， model group， and electoracupuncture weak-， medium-， and strong-stimulation group. The model group received no intervention after surgery. After treatment， the damaged facial nerve of each group was intercepted. The protein expressions of SOCS1 and SOCS3 mediated by negative feedback regulation of JAK-STAT were detected by ABC-ELISA. Results Compared with the blank group， the protein expressions of SOCS1 and SOCS3 in the model group increased （P<0.01）. Compared with the model group， the protein expressions of SOCS1 and SOCS3 protein in electroacupuncture weak- stimulation group decreased （P<0.01）. Conclusion Electroacupuncture can make SOCS1， SOCS3 protein expressions normal for acute facial nerve injury， and acupuncture treatment effect does not increase with the increase of stimulation.

Keywords： electroacupuncture； electrical stimulation； facial nerve injury； SOCS1； SOCS3； rabbits

面神經(jīng)損傷影響患者的表情運(yùn)動(dòng)等生理功能，且影響患者身心健康及生活質(zhì)量。臨床上電針治療本病療效較好[1-3]。相關(guān)機(jī)制研究已深入開展，其中細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子（SOCS）家族是JAK-STAT通路最重要的抑制信號因子[4]。有研究發(fā)現(xiàn)，SOCS1、SOCS3蛋白與面神經(jīng)修復(fù)密切相關(guān)[5-7]。本實(shí)驗(yàn)以壓榨性損傷模型兔為研究對象，采用ABC-ELISA檢測兔面神經(jīng)組織SOCS1、SOCS3的含量，觀察電針不同刺激量對急性期面神經(jīng)損傷兔SOCS1、SOCS3蛋白表達(dá)的影響，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組

健康成年SPF級新西蘭兔60只，雌雄各半，85～90日齡，體質(zhì)量2～2.5 kg，動(dòng)物許可證號SCXK（川）2013-14，四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專委會(huì)養(yǎng)殖場提供，飼養(yǎng)環(huán)境溫度（20±2）℃，相對濕度（50±10）%，每日光照時(shí)間12 h，自由攝食飲水。本實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格遵循科技部《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》的相關(guān)規(guī)定。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、假手術(shù)組、模型組和電針弱、中、強(qiáng)刺激組，每組10只。

1.2 主要試劑與儀器

華佗牌針灸針、SDZ-V型電針治療儀（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司），注射用青霉素鈉（華北制藥股份有限公司，F(xiàn)4082121）。轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)（德國徠卡），TSJ-Ⅱ型全自動(dòng)封閉式組織脫水機(jī)（常州市中威電子儀器有限公司），BMJ-Ⅲ型包埋機(jī)（常州郊區(qū)中威電子儀器廠），PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀（常州市中威電子儀器有限公司），數(shù)碼三目攝像顯微鏡（BA400Digital，麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司）。

1.3 造模

造模兔耳緣靜脈注射1%戊巴比妥鈉（5 mL/kg）麻醉，嚴(yán)格消毒鋪巾，于耳根與嘴角連線的中點(diǎn)，瞳孔下方2 cm處、正對神經(jīng)干處，面頰部弧形切口，剪開皮膚、肌肉層，暴露頭部筋膜，鈍性分離面神經(jīng)，再用特制止血鉗滿扣夾閉面神經(jīng)5 min，損傷長度約2.5 cm[8-9]；假手術(shù)組操作步驟同上，但不做夾閉處理；空白組不做任何處理。

1.4 干預(yù)

兔盒式夾固定后，參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[10]腧穴定位，選取術(shù)側(cè)“地倉”“頰車”“顴髎”“翳風(fēng)”“合谷”進(jìn)行電針治療。用25 mm×0.32 mm華佗牌一次性毫針，“翳風(fēng)”直刺10 mm，“地倉”向“頰車”透刺10 mm，“顴髎”向“地倉”透刺10 mm，“合谷”直刺5 mm。電針弱、中、強(qiáng)刺激組電刺激量參數(shù)見表1，每日1次，連續(xù)治療7 d。

1.5 觀察指標(biāo)

耳緣靜脈注射空氣處死兔，取兔面神經(jīng)樣本，固定、洗滌、梯度脫水、透明、包埋處理，石蠟切片，常規(guī)HE染色，染色成功后蓋玻片封蓋，備檢。免疫熒光鏡下觀察、測量積分吸光度，ABC-ELISA檢測組織SOCS1、SOCS3蛋白表達(dá)，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以—x±s表示，多組間比較采用方差分析，方差齊用LSD檢驗(yàn)，方差不齊用Tamhane's T2檢驗(yàn)；若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，則采用W-H秩和檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病理觀察變化

假手術(shù)組細(xì)胞漿染色與空白組接近，模型組細(xì)胞漿染色加深，弱刺激組細(xì)胞漿染色較淺，中刺激組和強(qiáng)刺激組染色較深。見圖1、圖2。

2.2 電針對模型兔面神經(jīng)細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1、3蛋白表達(dá)的影響

與空白組比較，模型組兔SOCS1、SOCS3蛋白表達(dá)顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與模型組比較，電針弱刺激組SOCS1、SOCS3蛋白表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），電針中、強(qiáng)刺激組SOCS1、SOCS3蛋白表達(dá)無明顯變化。見圖3。

3 討論

中醫(yī)認(rèn)為，面神經(jīng)損傷主要為機(jī)體過度勞累致氣血不暢，身體脈絡(luò)無力，機(jī)體免疫力下降，風(fēng)、寒之邪侵襲而發(fā)病。相關(guān)研究顯示，電針可用于面神經(jīng)損傷急性期的治療，電針通過低頻脈沖電流刺激穴位，可調(diào)整人體組織功能，促進(jìn)氣血的循環(huán)，調(diào)整肌張力[11]，但電刺激量大小與效應(yīng)不成正比[12]，控制不當(dāng)易加重炎癥水腫[13]，引起血管痙攣，影響面神經(jīng)傳導(dǎo)而發(fā)生面部肌肉抽動(dòng)，預(yù)后不佳。目前雖有關(guān)于電針刺激量的臨床研究，但對其差異產(chǎn)生的生物學(xué)機(jī)制研究相對較少。

JAK-STAT通路是電針促進(jìn)面神經(jīng)損傷修復(fù)的重要通路，其受多種因素的調(diào)節(jié)，在信息下調(diào)途徑中，SOCS是抑制JAK-STAT通路的重要蛋白[4]，參與多種細(xì)胞因子、生長因子和激素的信號調(diào)節(jié)，而SOCS1、SOCS3在神經(jīng)再生中有重要作用。SOCS1通過泛素化和降解JAK2和STAT1來抑制JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[5-6]，SOCS3與特異性細(xì)胞因子結(jié)合后，通過JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)而誘導(dǎo)表達(dá)，其表達(dá)產(chǎn)物又反過來特異性地抑制細(xì)胞因子介導(dǎo)的JAK-STAT信號通路[7]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，電針治療面神經(jīng)損傷兔時(shí)，電針弱刺激可抑制細(xì)胞因子SOCS1、SOCS3的異?；罨?，即針刺弱刺激可使面神經(jīng)損傷表達(dá)亢進(jìn)的SOCS1、SOCS3下調(diào)，與正常水平接近，以達(dá)到促進(jìn)面神經(jīng)損傷修復(fù)的治療作用。電針中刺激組和電針強(qiáng)刺激組對細(xì)胞因子SOCS1、SOCS3的異常活化基本無調(diào)節(jié)作用，甚則SOCS1、SOCS3因?yàn)殡娽樦写碳ず碗娽槒?qiáng)刺激而進(jìn)一步活化，該結(jié)果表明，針刺中刺激和強(qiáng)刺激在面神經(jīng)損傷急性期應(yīng)用時(shí)，會(huì)進(jìn)一步加重?fù)p傷，不利于面神經(jīng)損傷的修復(fù)。

綜上，面神經(jīng)損傷急性期電針弱刺激可使SOCS1、SOCS3蛋白表達(dá)水平趨于正常，進(jìn)而促進(jìn)面神經(jīng)損傷的修復(fù)，而電針療效不隨刺激量的增長而增加，而以弱刺激量為佳，故電針治療需要把握“中病即止”的原則。

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（收稿日期：2017-05-12）

（修回日期：2017-07-15；編輯：華強(qiáng)）