張佩敏,鐘其頂*,王道兵,岳紅衛(wèi),李國(guó)輝

1(中國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)研究院,北京,100015) 2(全國(guó)食品發(fā)酵標(biāo)準(zhǔn)化中心,北京,100015)

隨著人民生活水平不斷提高，健康、純天然的高品質(zhì)食品逐漸受到消費(fèi)者青睞。然而，受經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使，一些不法商家為降低成本，采用摻假摻雜、混亂標(biāo)注等手段制造假冒偽劣食品，如葡萄汁中外源添加廉價(jià)糖，用“三精一水”配制“葡萄酒”等[1]。因此，對(duì)食品進(jìn)行真實(shí)性檢驗(yàn)已成為現(xiàn)代食品檢測(cè)研究的重要內(nèi)容[2]，但傳統(tǒng)的理化、感官分析等方法難以解決上述廉價(jià)原料和混亂標(biāo)注問(wèn)題。穩(wěn)定同位素技術(shù)探究食品(或其特征組分)的原子水平信息，可鑒別不同來(lái)源的同種化合物，因此在食品摻假檢測(cè)中發(fā)揮著重要作用[3]，在蜂蜜[4]、果汁[5]、葡萄酒[5]等食品的真?zhèn)舞b別中發(fā)揮著重要作用，其中一些方法已被歐洲標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(Comité Européen de Normalisation，CEN)、美國(guó)分析化學(xué)家協(xié)會(huì)(Association of Official Analytical Chemists，AOAC)采納為標(biāo)準(zhǔn)方法。

分餾是同位素的自然屬性[2]，同類(lèi)食品/化合物的同位素特征也會(huì)在一定范圍內(nèi)波動(dòng)，因此當(dāng)前同位素技術(shù)的應(yīng)用以同位素?cái)?shù)據(jù)庫(kù)的建設(shè)為前提，如CEN建立了歐洲葡萄酒同位素?cái)?shù)據(jù)銀行，國(guó)際果蔬汁行業(yè)協(xié)會(huì)(Sure-Global-Fair，SGF)建立了全球果汁同位素?cái)?shù)據(jù)庫(kù)，但數(shù)據(jù)庫(kù)的構(gòu)建與維護(hù)成本高昂，也難以涵蓋所有樣品。利用同位素內(nèi)源標(biāo)志物建立食品的穩(wěn)定同位素指紋圖譜是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)[2]。內(nèi)源標(biāo)志物(以下簡(jiǎn)稱(chēng)內(nèi)標(biāo)物)是指與目標(biāo)物來(lái)源相同或相關(guān)，且同位素組成具穩(wěn)定、良好的相關(guān)性的一類(lèi)物質(zhì)[6-7]。如蜂蜜和果汁造假時(shí)普遍摻入廉價(jià)糖漿，但蜂蜜的總糖與蛋白質(zhì)δ13CVPDB值密切相關(guān)[8]，果汁的總糖與果肉δ13CVPDB值相近[9]。近年來(lái)，CABANERO[10]和ELFLEIN[11]等人分別研究了蜂蜜中葡萄糖、果糖和蔗糖的碳同位素特征，互相作為內(nèi)標(biāo)物以提高蜂蜜真?zhèn)舞b別能力；GUYON曾分析了20個(gè)法國(guó)葡萄酒樣品的甘油和乙醇的δ13CVPDB特征，但由于甘油在葡萄酒感官體驗(yàn)中的重要作用而易被摻假，因此限制了甘油作為內(nèi)標(biāo)物的應(yīng)用[14]。

酒石酸(tartaric acid)是葡萄汁和葡萄酒中的主要有機(jī)酸和特征酸[13]。雖然GB2760中允許酒石酸作為食品添加劑加入葡萄酒，但如果葡萄汁的糖酸比平衡，就不存在外源添加酒石酸的情況。當(dāng)前一些廠家打出了“完全無(wú)添加”葡萄酒的旗號(hào)，打造高端葡萄酒產(chǎn)品[14]，針對(duì)此類(lèi)葡萄酒中是否含有外源酒精的檢測(cè)問(wèn)題，可以嘗試以酒石酸進(jìn)行碳同位素內(nèi)標(biāo)物的應(yīng)用研究。

本課題研究了葡萄汁和葡萄酒中總糖、乙醇和酒石酸的同位素分布特征，分析發(fā)酵過(guò)程對(duì)酒石酸碳同位素組成的影響，并探討酒石酸作為葡萄汁中總糖的碳同位素內(nèi)標(biāo)物、作為葡萄酒中乙醇的碳同位素內(nèi)標(biāo)物在摻假檢測(cè)中應(yīng)用的可行性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

氦氣、二氧化碳?xì)怏w(純度99.99%),北京北溫氣體制造廠;丙酮(色譜純)，DUKSAN Pure Chemicals；Ca(OH)2、NaOH和HCl(分析純)，北京化學(xué)試劑廠；乙醇RM(色譜純，國(guó)產(chǎn)，室標(biāo)reference material δ13CVPDB=-10.98‰)；IAEA-CH-6[國(guó)際原子能機(jī)構(gòu)，δ13CVPDB=(-10.45±0.2)‰]；IAEA-601[國(guó)際原子能機(jī)構(gòu)，δ13CVPDB=(-27.77±0.04)‰]；錫杯,Element Microanalysis公司產(chǎn)品。

從4個(gè)莊園收集16個(gè)葡萄酒樣品，其中8個(gè)完全無(wú)添加，8個(gè)添加外源乙醇。2個(gè)標(biāo)識(shí)為有機(jī)葡萄酒(完全無(wú)添加)，購(gòu)于某超市。2016年8～10月，采集4個(gè)不同產(chǎn)區(qū)的釀酒葡萄，每個(gè)產(chǎn)區(qū)取樣2份，共計(jì)8份釀酒葡萄。

1.2 儀器與設(shè)備

氣相色譜-燃燒-穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜儀(GC-C-IRMS)：Delta V Advantage 穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜儀(美國(guó)Thermo Fisher公司)，配備Ultra Trace GC氣相色譜與IsoLink接口，以及Triplus自動(dòng)進(jìn)樣器；HP-INNOwax氣相色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm，安捷倫科技(中國(guó))有限公司)；元素分析儀(EA)：與GC-C-IRMS共用穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜儀，配備Flash 2000元素分析儀；HPLC：Waters 2695 高效液相色譜儀；配備waters 2998 紫外檢測(cè)器(安捷倫科技(中國(guó))有限公司)；LiChrospher 100RP18色譜柱(5 μm×500 mm×30 mm，德國(guó)Merk公司)；陽(yáng)離子交換柱(10 g，Ag50W-X8，200-400 mesh)，陰離子交換柱(10 g，Ag1-X8，200-400 mesh，北京泰澤瑞達(dá)科技有限公司)；離心機(jī)(美國(guó)Sigma公司)；冷凍干燥機(jī)(北京亞泰科隆儀器技術(shù)有限公司)；電熱恒溫水浴箱(北京中慧天誠(chéng)科技有限公司)；十萬(wàn)分之一電子天平(瑞士Mettler-Toledo公司)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

1.3.1.1 乙醇的前處理方法[15]

根據(jù)測(cè)定線性范圍(2～10 V)及色譜條件，用丙酮將樣品稀釋至乙醇含量約8 g/L。

1.3.1.2 總糖提取方法[9]

選取健康無(wú)破損葡萄榨汁后過(guò)濾，取40 mL濾液，加入1.6 g Ca(OH)2粉末，混合均勻并于90 ℃水浴3 min后將上述熱溶液轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，1 400×g離心3 min，去除沉淀，用0.1 mol/L H2SO4溶液調(diào)節(jié)上清液至pH為5.0；將酸化后的上清液置于4 ℃冰箱靜置約15 h，再次離心去除沉淀，將溶液冷凍干燥，并均質(zhì)成粉末后待測(cè)。

1.3.1.3 酒石酸的分離方法[16]

應(yīng)用5 mol/L的HCl溶液活化陽(yáng)離子交換柱(10 g，Ag50W-X8，200-400 mesh)后，將葡萄酒或發(fā)酵液離心取上清液50 mL，用5 mol/L的HCl溶液調(diào)節(jié)至pH為1.7后上樣，用100 mL的25 mmol/L HCl溶液洗脫，氨基酸等陽(yáng)離子保留于柱體內(nèi)，收集完整的洗脫液并用5 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至 7.0，在陽(yáng)離子交換柱(10 g，Ag1-X8，200-400 mesh)(活化條件同上)上樣,用200 mL超純水淋洗，做快速測(cè)試(顏色反應(yīng))，確保所有糖均被洗脫。將完全洗脫的糖，應(yīng)用100 mL 1 mol/L HCl溶液洗脫，將該洗脫液在60 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至2.5 mL左右，過(guò)0.22 μm濾膜，根據(jù)檢測(cè)信號(hào)在線收集整個(gè)酒石酸峰的餾出液，備用。

1.3.1.4 葡萄汁發(fā)酵

葡萄榨汁取200 mL，加入0.04 g偏重亞硫酸鉀(防止發(fā)酵過(guò)程雜菌干擾)，加入1 g活性干酵母在30 ℃條件下恒溫厭氧發(fā)酵至恒重，每種樣品重復(fù)發(fā)酵2次。

1.3.2 儀器條件

1.3.2.1 GC條件[15]

載氣為氦氣，柱流速1.2 mL/min；進(jìn)樣口溫度240～270 ℃；升溫程序?yàn)椋浩鹗紲囟?0 ℃，保持5 min，以1 ℃/min 升溫至50 ℃后保持1 min，再以15 ℃/min 升溫至250 ℃并保持2 min；進(jìn)樣體積1 μL；分流比10∶1。

1.3.2.2 乙醇轉(zhuǎn)化條件

燃燒轉(zhuǎn)化裝置(IsoLink)中配備陶瓷(Al2O3)氧化管(填料為CuO，NiO和Pt)，工作溫度為1 000 ℃。

1.3.2.3 EA條件[9]

氧化管溫度980 ℃，還原管溫度680 ℃，柱溫60 ℃，氦氣流速100 mL/min，氧氣充入時(shí)長(zhǎng)為3 s(流速250 mL/min)；稱(chēng)取0.1 mg有機(jī)物于錫杯中，包樣后測(cè)定。

1.3.2.4 HPLC制備條件[16]

流動(dòng)相20 mmol/L H3PO4；柱溫30 ℃；流速3 mL/min。

1.3.2.5 IRMS條件

離子源電壓2.97 kV，真空度1.8×10-6mbar，轟擊電壓120.8 eV。

1.4 校準(zhǔn)與計(jì)算

基于國(guó)際基準(zhǔn)物質(zhì)V-PDB(Vienna Pee Dee Belemnite Standard，13C/12C=0.011 237 2)得出樣品中組分δ13CVPDB值(‰)：δ13CVPDB=(13C/12C)樣品值/(13C/12C)參考值。IAEA-CH-6(δ13CVPDB)作為實(shí)際測(cè)定中的參考物質(zhì)。

采用Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用Origin 9.0繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄汁中酒石酸與總糖碳同位素特征

收集不同產(chǎn)地的釀酒葡萄樣品，按照1.3方法測(cè)定葡萄汁總糖和酒石酸的δ13CVPDB值，每個(gè)樣品測(cè)定2次，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 葡萄汁總糖、酒石酸δ13CVPDB值比較Table 1 Comparison δ13CVPDB values of sugar content and tartaric acid in musts

表1數(shù)據(jù)表明，4個(gè)產(chǎn)地的樣品具有不同的同位素特征，總糖和酒石酸δ13CVPDB的分布范圍分別為-28.13‰～-23.25‰和-24.48‰～-20.02‰，這是由于釀酒葡萄取自我國(guó)4個(gè)不同產(chǎn)區(qū)，各產(chǎn)區(qū)氣候條件相差較大，影響了同位素的分餾。對(duì)比酒石酸和總糖，酒石酸δ13CVPDB明顯比總糖偏正，這是因?yàn)槠咸焉L(zhǎng)過(guò)程中以葡萄糖(C6H12O6)為底物在相關(guān)酶的作用下產(chǎn)生酒石酸(C4H6O6)，該過(guò)程有碳原子損失。根據(jù)Rossmann的研究結(jié)果[17]，葡萄糖上6個(gè)碳位點(diǎn)上的13C/12C比值為非統(tǒng)計(jì)學(xué)分布，相對(duì)于葡萄糖分子的δ13CVPDB值，C3偏正1.9‰，C4偏正6.3‰，而C1偏負(fù)1.3‰，C2偏負(fù)0.9‰，C5偏負(fù)1.1‰，C6偏負(fù)4.5‰；葡萄糖代謝產(chǎn)生含有6個(gè)碳的L-抗壞血酸，6個(gè)碳原子均來(lái)源于葡萄糖，因此同位素豐度不變，L-抗壞血酸經(jīng)五步代謝過(guò)程得到L-酒石酸，中間物質(zhì)依次為2-酮-L-葡萄糖酸、L-艾杜糖酸、5-酮-D-葡萄糖酸、L-threo-tetruronate[5]，最后通過(guò)C4～C5裂解途徑產(chǎn)生酒石酸與乙醇酸[18]，5號(hào)碳與6號(hào)碳的損失導(dǎo)致酒石酸相對(duì)葡萄糖δ13CVPDB偏正。但是二者差異并非固定值，這可能與葡萄生長(zhǎng)環(huán)境導(dǎo)致葡萄糖6個(gè)碳位點(diǎn)上13C/12C比值不同有關(guān)。

圖1 葡萄汁中總糖和酒石酸δ13CVPDB值之間的相關(guān)性Fig.1 Correlation of δ13CVPDB values between sugar content and tartaric acid in musts

以總糖δ13CVPDB值為橫坐標(biāo)，酒石酸δ13CVPDB值為縱坐標(biāo)，繪制其相關(guān)性曲線，圖1表明總糖與酒石酸碳同位素值存有差異，但二者具有良好相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)R2=0.944 9)。選擇A產(chǎn)區(qū)的葡萄汁樣品，以C4糖和蒸餾水為基礎(chǔ)配制與葡萄汁濃度相同的糖水溶液，按等比例向葡萄汁樣品中加入上述糖水溶液，混合均勻后測(cè)定總糖與酒石酸δ13CVPDB值，可以看出總糖δ13CVPDB呈現(xiàn)逐步偏正的趨勢(shì)，但酒石酸δ13CVPDB值并未出現(xiàn)變化(見(jiàn)圖2)，說(shuō)明酒石酸可以作為總糖的碳同位素內(nèi)標(biāo)物對(duì)葡萄汁進(jìn)行摻糖檢測(cè)。

圖2 添加不同比例的C4糖后葡萄汁中總糖與酒石酸δ13CVPDB變化Fig.2 Change curve of the δ13CVPDB value of sugar content and tartaric acid with different ratio of C4 sugar

2.2 酒精發(fā)酵對(duì)葡萄汁中酒石酸δ13CVPDB影響

為探究酒精發(fā)酵對(duì)葡萄汁中酒石酸δ13CVPDB影響，按照1.3中方法發(fā)酵4個(gè)產(chǎn)區(qū)的葡萄汁，每個(gè)產(chǎn)區(qū)選取1個(gè)樣品，每個(gè)樣品發(fā)酵2份并重復(fù)測(cè)定3次，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 酒精發(fā)酵前后酒石酸δ13CVPDB值的變化Table 2 Change of δ13CVPDB values of tartaric acid during fermentation

由表2可知，盡管4個(gè)莊園葡萄汁/葡萄酒的酒石酸δ13CVPDB值不同，但葡萄汁發(fā)酵前后酒石酸的δ13CVPDB值基本不變(|Δ13CVPDB|<0.1‰)，這說(shuō)明發(fā)酵過(guò)程中不會(huì)改變葡萄汁中酒石酸的碳同位素組成特征。

2.3 酒石酸與乙醇碳同位素特征相關(guān)性分析

按照1.3與1.4前處理步驟，測(cè)定發(fā)酵液中乙醇δ13CVPDB，對(duì)比酒石酸與乙醇結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3數(shù)據(jù)可知，發(fā)酵前葡萄汁總糖δ13CVPDB值分布范圍為-28.65‰～-22.91‰，發(fā)酵后乙醇δ13CVPDB值分布范圍為-29.93‰～-24.23‰，發(fā)酵糖δ13CVPDB與對(duì)應(yīng)發(fā)酵液中乙醇δ13CVPDB也不完全一致，差異分布范圍為-2.03‰～-1.10‰，乙醇比原料葡萄汁總糖的δ13CVPDB值更偏負(fù)。盡管如此，乙醇與總糖之間具有明顯的正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)可達(dá)0.98，既然在葡萄汁中，酒石酸可作為總糖的內(nèi)標(biāo)物，且2.2的研究表明發(fā)酵過(guò)程不影響酒石酸δ13CVPDB值，則酒石酸與乙醇之間必然存在良好相關(guān)性。為探究葡萄酒中酒石酸與乙醇的關(guān)系，以酒石酸δ13CVPDB值為橫坐標(biāo)，乙醇δ13CVPDB值為縱坐標(biāo)，繪制相關(guān)性曲線，結(jié)果見(jiàn)圖3。由圖3可知，在發(fā)酵液中，乙醇與酒石酸具有良好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)可達(dá)0.96。

表3 葡萄汁總糖、發(fā)酵液中乙醇與酒石酸δ13CVPDB值的比較Table 3 Comparison δ13CVPDB values of sugar content in musts and ethanol， tartaric acid in fermentation liquor

圖3 發(fā)酵液中乙醇和酒石酸δ13CVPDB值之間的相關(guān)性Fig.3 Correlation of δ13CVPDB values between ethanol and tartaric acid in fermentation liquor

以玉米酒精和蒸餾水為基礎(chǔ)配制與葡萄酒濃度相同的乙醇水溶液，按等比例向葡萄酒樣品中加入上述乙醇水溶液，混合均勻后測(cè)定乙醇與酒石酸δ13CVPDB值，結(jié)果如圖4所示?？梢钥闯鲆掖鸡?3CVPDB呈現(xiàn)逐步偏正的趨勢(shì)，但酒石酸δ13CVPDB值并未出現(xiàn)變化，說(shuō)明酒石酸可以作為乙醇的碳同位素內(nèi)標(biāo)物對(duì)葡萄酒進(jìn)行摻乙醇檢測(cè)。

圖4 添加不同比例的玉米酒精后葡萄酒中乙醇與酒石酸δ13CVPDB變化Fig.4 Change curve of the δ13CVPDB value of ethanol and tartaric acid with different ratio of exogenous ethanol addition

針對(duì)內(nèi)標(biāo)物在食品摻假檢測(cè)中的應(yīng)用，JAMIN等人應(yīng)用差值法建立了蘋(píng)果酸作為糖類(lèi)內(nèi)標(biāo)物的簡(jiǎn)單模型[16]，同時(shí)應(yīng)用比值法建立了橙汁中水和乙醇的數(shù)學(xué)模型[12]，該模型可對(duì)橙汁進(jìn)行鑒別分析。本研究在借鑒JAMIN差值與比值模型的基礎(chǔ)上分析了發(fā)酵液中乙醇δ13CVPDB與酒石酸δ13CVPDB的差值與比值，乙醇與酒石酸的δ13CVPDB差值范圍在-5.20‰±0.39‰之間，比值范圍在1.23±0.02之間，差值模型的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.56，比值模型的標(biāo)準(zhǔn)偏差僅為0.02?；诖?，建立了差值模型與比值模型用于檢測(cè)葡萄酒中是否有外源乙醇的添加。

2.4 葡萄酒樣品分析

16個(gè)葡萄酒樣品，其中8個(gè)完全無(wú)添加，8個(gè)添加了外源乙醇。測(cè)定樣品中酒石酸與乙醇δ13CVPDB(n=3)，并分別計(jì)算酒石酸與乙醇δ13CVPDB的差值和比值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖5與圖6。

圖5 16個(gè)真實(shí)樣品差值模型分布圖Fig.5 The distribution of 16 true samples in difference model

圖6 16個(gè)真實(shí)樣品比值模型分布圖Fig.6 The distribution of 16 true samples in ratio model

由圖5可知，在差值模型中，有7個(gè)完全無(wú)添加葡萄酒樣品的差值處于(-5.20±0.39)‰范圍內(nèi)，有4個(gè)添加乙醇的樣品處于該范圍外，差值模型識(shí)別正確率為68.75%。由圖6可知，在比值模型中，7個(gè)完全無(wú)添加葡萄酒樣品的比值處于1.23±0.02范圍內(nèi)，有6個(gè)添加乙醇的樣品處于該范圍外，比值模型識(shí)別率達(dá)到81.25%。由于真實(shí)樣品數(shù)量極為有限，只能初步表明，比值模型與差值模型具有顯著性差異(p<0.05)，乙醇與酒石酸δ13CVPDB比值模型識(shí)別率更高，比值的規(guī)律性研究可應(yīng)用于驗(yàn)證“非添加”葡萄酒中是否有外源添加的乙醇。需要說(shuō)明的是，若樣品滿足此模型，不能完全說(shuō)明該樣品一定為“非添加”葡萄酒，可能存在摻入乙醇后其同位素值仍然滿足該模型的情況；而不滿足該模型的樣品，說(shuō)明其具有摻假行為，具體摻入物質(zhì)定性與定量分析還需進(jìn)一步討論。

2.5 市售葡萄酒的測(cè)定結(jié)果與分析

收集2個(gè)標(biāo)識(shí)為有機(jī)葡萄酒的樣品(完全無(wú)添加)(1#～2#)。測(cè)定結(jié)果在比值模型中的分布如圖7所示。1號(hào)樣品符合比值模型，認(rèn)為該樣品無(wú)外源乙醇摻入；2號(hào)樣品不符合比值模型，為可疑樣品，認(rèn)為樣品生產(chǎn)過(guò)程中存在摻入行為。由于本模型未探究外源乙醇摻入量與模型比值的關(guān)系，同時(shí)考慮到檢測(cè)的不確定度，因此具體摻入物質(zhì)的含量無(wú)法得出，需要進(jìn)一步探討。

圖7 2個(gè)葡萄酒樣品乙醇與酒石酸δ13CVPDB比值分布Fig.7 The distribution of 2 wines samples in ratio model

3 討論

本實(shí)驗(yàn)探究了葡萄汁中總糖、酒石酸，以及發(fā)酵液中乙醇、酒石酸的δ13CVPDB值分布特征，及其之間的相關(guān)性規(guī)律。葡萄汁中，酒石酸δ13CVPDB比總糖偏正，但與后者呈現(xiàn)良好線性正相關(guān)關(guān)系(R2=0.94)，模擬摻糖試驗(yàn)則驗(yàn)證了此相關(guān)性可用于檢測(cè)葡萄汁中外源添加C4植物糖。在發(fā)酵液中，酒石酸δ13CVPDB值不變，乙醇δ13CVPDB值與原料葡萄汁總糖具有明顯的正相關(guān)性(R2=0.98)，既然在葡萄汁中，酒石酸可作為總糖的內(nèi)標(biāo)物，則酒石酸與乙醇之間必然存在良好相關(guān)性(R2=0.96)。模擬摻乙醇試驗(yàn)驗(yàn)證了此相關(guān)性可驗(yàn)證“完全無(wú)添加”葡萄酒中是否添加外源乙醇。初步建立了葡萄酒中乙醇與酒石酸的比值模型和差值模型，結(jié)果表明比值模型識(shí)別率更高。

本試驗(yàn)雖然證明了在無(wú)外源糖添加條件下，酒精發(fā)酵過(guò)程中酒石酸碳同位素特征不變，但是為實(shí)現(xiàn)檢測(cè)葡萄酒在發(fā)酵前是否添加外源糖，需要進(jìn)一步驗(yàn)證酒石酸碳同位素值是否受發(fā)酵前添加外源糖的影響，即設(shè)計(jì)試驗(yàn)添加C4糖后發(fā)酵再測(cè)定，這也是接下來(lái)研究的重點(diǎn)。

需要說(shuō)明的是本研究?jī)H調(diào)查分析了部分產(chǎn)區(qū)的葡萄樣品及葡萄酒特征，由于植物糖分、有機(jī)酸中碳同位素分布受眾多因素影響，選擇酒石酸δ13CVPDB值作為乙醇內(nèi)標(biāo)物建立數(shù)學(xué)模型還需詳盡數(shù)據(jù)作為應(yīng)用基礎(chǔ)。