何 鈺， 林紹霞， 陳迎麗， 王 睿， 楊鴻波

(貴州省分析測(cè)試研究院，貴州 貴陽(yáng) 550002)

引 言

苯醚甲環(huán)唑(difenoconazole)由瑞士Ciba-Geigy(現(xiàn)先正達(dá))公司開(kāi)發(fā)，其機(jī)理為內(nèi)吸性，抑制真菌細(xì)胞壁生長(zhǎng)，因而具有很強(qiáng)的殺菌活性，殺菌范圍也很廣泛[1]?？┚?fludioxonil)是一種安全高效低毒的新型殺菌劑，其作用機(jī)理主要通過(guò)抑制真菌細(xì)胞內(nèi)與葡萄糖磷酰化有關(guān)的反應(yīng)，菌絲體的生長(zhǎng)遭到限制，從而消滅致病菌，尤其對(duì)灰葡萄孢菌作用明顯，屬于非內(nèi)吸性苯基吡咯類殺菌劑，可以應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的大部分真菌病害的防治工作[2]。

在近幾年的相關(guān)報(bào)道中，苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈的分析方法主要為高效液相色譜(HPLC)法[3]，而采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈混配劑的分析方法則未見(jiàn)報(bào)道。本文使用反相高效液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀，通過(guò)色譜及質(zhì)譜條件的優(yōu)化分離苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈，并對(duì)混合制劑中的苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈進(jìn)行定量分析。以建立簡(jiǎn)單方便、快捷準(zhǔn)確的含量分析方法，并具有良好分離、靈敏度高等特點(diǎn)，為完善產(chǎn)品質(zhì)量體系建設(shè)提供支持。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑和溶液

甲醇(色譜純)；超純水(電阻率18.2 MΩ·cm，25 ℃)； 甲酸(色譜純)；苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)樣品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.7%)；咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)樣品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.0%)。 標(biāo)準(zhǔn)品均由農(nóng)業(yè)部提供。

1.2 儀器

Agilent 1290-6470A超高壓高效液相色譜-三重四級(jí)桿色譜儀；Masshunter色譜質(zhì)譜定量定性處理軟件；明澈超純水制備系統(tǒng)；色譜柱： Agilent Eclipse Plus-C18，50 mm×2.1 mm、1.8 μm。

1.3 儀器操作條件

1.3.1 液相色譜操作條件

流動(dòng)相：22%水溶液(含0.1%甲酸)+78%甲醇；流量0.2 mL/min；柱溫35 ℃；進(jìn)樣體積1 μL；保留時(shí)間：咯菌腈1.2 min，苯醚甲環(huán)唑2.2 min。

1.3.2 MSD操作條件

離子源：ESI源(帶Agilent Jet Steam技術(shù))；離子源參數(shù)：干燥氣，N2；干燥氣溫度，250 ℃；干燥氣流速，5 L/min；鞘氣：N2；鞘氣溫度：250 ℃；鞘氣流速：11 L/min；監(jiān)測(cè)模式：MRM。監(jiān)測(cè)離子參數(shù)見(jiàn)第49頁(yè)表1。

表1 MRM監(jiān)測(cè)離子參數(shù)

以上儀器操作條件作為基礎(chǔ)條件，在實(shí)際操作中可依據(jù)其他儀器的相應(yīng)特點(diǎn)，恰當(dāng)調(diào)整儀器的操作條件參數(shù)，以便獲取最優(yōu)分離及響應(yīng)值?？┚婧捅矫鸭篆h(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)樣品的典型定量離子對(duì)色譜圖及定性離子對(duì)色譜圖如圖1、圖2所示。

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取咯菌腈和苯醚甲環(huán)唑的標(biāo)準(zhǔn)樣品各0.01 g(精確至0.000 1 g)，用甲醇溶解并稀釋定容至100 mL，得到咯菌腈和苯醚甲環(huán)唑的標(biāo)準(zhǔn)樣品儲(chǔ)備液。

圖2 苯醚甲環(huán)唑典型定量離子對(duì)(406.1->251.0)色譜圖及定性離子對(duì)色譜圖

1.4.2 校正曲線系列溶液配制

取1.4.1配制的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，混合，用50%甲醇溶液稀釋定容，得到混合標(biāo)準(zhǔn)母液，再吸取適量該混合標(biāo)準(zhǔn)母液，稀釋后得到一系列濃度梯度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4.3 試樣溶液的配制

稱取試樣4.8%苯醚甲環(huán)唑咯菌腈種子處理懸浮劑約0.03 g(精確至0.000 1 g)，以甲醇為溶劑，溶解并稀釋試樣至100 mL，超聲1 min后搖勻備用。

1.4.4 測(cè)定

將儀器調(diào)整至1.3所設(shè)置的操作條件參數(shù)下，待儀器平衡足夠時(shí)間，基線跑平，對(duì)同一標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行測(cè)定，待相鄰2次進(jìn)樣所產(chǎn)生的目標(biāo)物對(duì)應(yīng)峰面積的相對(duì)變化小于2.0%后，進(jìn)行樣品測(cè)定。

1.4.5 計(jì)算

對(duì)標(biāo)樣與試樣中咯菌腈或苯醚甲環(huán)唑峰面積進(jìn)行測(cè)量。以外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 分析方法的線性相關(guān)性實(shí)驗(yàn)

取1.4.2配制的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按1.3儀器操作條件進(jìn)行分析測(cè)定， 以目標(biāo)物濃度為橫坐標(biāo)，目標(biāo)物對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)作圖，并進(jìn)行線性方程擬合，所得結(jié)果列于表2。從表2可以看到，咯菌腈與苯醚甲環(huán)唑的線性方程相關(guān)系數(shù)非常接近于1，表明咯菌腈和苯醚甲環(huán)唑分別在測(cè)試質(zhì)量濃度范圍內(nèi)其濃度與響應(yīng)值之間具有良好的線性關(guān)系。

表2 分析方法的線性方程、相關(guān)系數(shù)(r2)、檢出限(LOD)及定量下限(LOQ)結(jié)果

2.2 分析方法的精密度實(shí)驗(yàn)

在1.3儀器操作條件下，對(duì)試樣進(jìn)行分析測(cè)定，做6個(gè)平行，進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn)。測(cè)得咯菌腈和苯醚甲環(huán)唑的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.16和0.32，變異系數(shù)為1.41%和1.45%(見(jiàn)表3)。

表3 分析方法的精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 分析方法的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

分析方法的準(zhǔn)確度以加標(biāo)回收率評(píng)價(jià)。稱取試樣4.8%苯醚甲環(huán)唑咯菌腈種子處理懸浮劑配制得到試樣溶液，加入一定量的咯菌腈和苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)樣品，做5個(gè)平行。在1.3.1儀器操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)得咯菌腈的平均回收率為75.64%，苯醚甲環(huán)唑的平均回收率為110.51%， 如表4所示。

表4 分析方法準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立了苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈的有效分析方法。結(jié)果顯示，在測(cè)試濃度范圍內(nèi)苯醚甲環(huán)唑和咯菌腈的具有良好濃度與響應(yīng)之間線性關(guān)系，方法重復(fù)性好、檢出限低、準(zhǔn)確度高，同時(shí),方法操作簡(jiǎn)單，運(yùn)行時(shí)間短，可應(yīng)用于產(chǎn)品質(zhì)量高通量檢測(cè)，為水體、土壤中苯醚甲環(huán)唑和咯菌腈痕量分析提供參考。