張周菊 張悅 彭翠香 孔菲菲 高佩 梁璐

中圖分類號(hào) R285.5；R283 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）19-2662-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.19.16

摘 要 目的：優(yōu)化蛇歸止癢方提取工藝。方法：以小鼠止癢藥效實(shí)驗(yàn)相關(guān)結(jié)果為指標(biāo)篩選蛇歸止癢方的提取工藝路線（包括醇提、水提等4種工藝），再以收膏率及阿魏酸、芍藥苷、苦參堿、氧化苦參堿含量等組成的綜合評(píng)分為考察指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)篩選乙醇體積分?jǐn)?shù)、加醇量倍數(shù)、提取時(shí)間（次數(shù)）等提取工藝的最優(yōu)參數(shù)，并進(jìn)行工藝驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果：篩選的提取工藝路線為全方采用60%乙醇回流提??；最優(yōu)工藝中各參數(shù)具體為提取2次，第1次加8倍乙醇提取2 h，第2次加8倍乙醇提取1 h。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果顯示，3次試驗(yàn)阿魏酸、芍藥苷、苦參堿、氧化苦參堿的平均含量分別為0.71、22.13、1.92、9.88 mg/g（RSD=2.96%、2.03%、2.55%、1.23%，n=3），平均收膏率為19.22%（RSD=0.96%，n=3）。結(jié)論：優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定、可行。

關(guān)鍵詞 蛇歸止癢方；提取工藝；正交試驗(yàn)；優(yōu)化；止癢藥效實(shí)驗(yàn)；小鼠

ABSTRACT OBJECTIVE： To optimize the extraction technology of Shegui zhiyang formula. METHODS： The extraction technology route （4 technologies such as ethanol extraction， water extraction， etc.） of Shegui zhiyang formula in mice was screened by using related indexes of antipruritic efficacy test. Using comprehensive score of extract yield， the contents of ferulic acid， paeoniflorin， matrine and oxymatrine as indexes， L9（34） orthogonal test was used to screen optimal parameters of extraction technology as volume fraction of ethanol， ethanol fold， extraction time （times）. Validation test was conducted. RESULTS： Screened extraction technology route was medicinal materials were reflux extracted with 60% ethanol. The optimal technology included extracting for 2 times， lasting for 2 h with 8-fold ethanol at first time， lasting for 1 h with 8-fold ethanol at second time. The results of validation tests showed that average contents of ferulic acid， paeoniflorin， matrine and oxymatrine were 0.71， 22.13， 1.92， 9.88 mg/g （RSD=2.96%， 2.03%， 2.55%， 1.23%，n=3）. Average extract yield was 19.22% （RSD=0.96%， n=3）. CONCLUSIONS： The optimized extraction process is stable and feasible.

KEYWORDS Shegui zhiyang formula； Extraction technology； Orthogonal test； Optimization； Antipruritic efficacy test； Mice

中醫(yī)認(rèn)為中老年性皮膚瘙癢癥多為血虛肝旺以致生風(fēng)生燥、肌膚失養(yǎng)而成[1]。蛇歸止癢方由烏梢蛇、當(dāng)歸、赤芍、苦參等6味中藥組成，該方由名老中醫(yī)陳如泉教授（湖北中醫(yī)藥大學(xué)教授、中醫(yī)內(nèi)科專家）根據(jù)中老年人皮膚瘙癢癥病機(jī)、前人臨床實(shí)踐及自己多年行醫(yī)心得，在經(jīng)典古方“當(dāng)歸飲子”基礎(chǔ)上化裁而成。方中當(dāng)歸、赤芍兩藥養(yǎng)血活血[2]、涼血祛瘀[3]，為方中之君藥，該方經(jīng)多年臨床驗(yàn)證適用于血虛風(fēng)燥、肝腎陰虛型的中老年皮膚瘙癢癥[4-6]。

蛇歸止癢方臨床使用方法為煎湯服用，但湯劑煎煮麻煩，且服用量大、不易保存、不便于攜帶，故本團(tuán)隊(duì)擬將該方研制成中藥復(fù)方顆粒劑。為確定合理的提取工藝，保證制劑的質(zhì)量和療效，本研究參考文獻(xiàn)[7-12]，設(shè)計(jì)了多條提取工藝路線，并將各路線得到的提取物參考文獻(xiàn)[13-14]進(jìn)行小鼠止癢藥效實(shí)驗(yàn)，以篩選出能保證療效的提取工藝；再在此基礎(chǔ)上采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法，以收膏率及阿魏酸（當(dāng)歸中主成分）、芍藥苷（赤芍中主成分）、苦參堿和氧化苦參堿（苦參中主成分）的含量等組成的綜合評(píng)分為考察指標(biāo)[15]，優(yōu)化提取工藝參數(shù)，以此為其進(jìn)一步制成顆粒奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

Ab265S十萬(wàn)分之一電子天平、AL204萬(wàn)分之一電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；AT20高效液相色譜儀（日本島津公司）；DL-360B超聲波清洗器（上海之信儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

烏梢蛇（批號(hào)：140901）、苦參（批號(hào)：140101）、當(dāng)歸（批號(hào)：1506863）、赤芍（批號(hào)：1506835）等藥材均購(gòu)自湖北格林藥業(yè)有限公司，上述藥材經(jīng)檢驗(yàn)，其質(zhì)量均符合2015年版《中國(guó)藥典》（一部）各藥材項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定；阿魏酸（批號(hào)：110773-201313，純度：99.6%）、芍藥苷（批號(hào)：110736-201438，純度：96.4%）、苦參堿（批號(hào)：110805- 200508，純度：99.9%）、氧化苦參堿（批號(hào)：110780- 2001007，純度：92.5%）對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；右旋糖酐40葡萄糖注射液（四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：T15082204，規(guī)格：500 mL/瓶，含30 g右旋糖酐40與25 g葡萄糖）；鹽酸苯海拉明片（臨汾寶珠制藥有限公司，批號(hào)：20151005，規(guī)格：25 mg/片）；乙腈、甲醇、磷酸均為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純，水為蒸餾水。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)KM小鼠，4～6周齡，體質(zhì)量18～22 g；由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（鄂）2015-0018。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取工藝路線的初篩

2.1.1 提取工藝的設(shè)計(jì)與提取物制備 本研究在提取工藝參數(shù)篩選前進(jìn)行了藥材提取工藝路線的初篩。文獻(xiàn)資料報(bào)道本方藥材提取主要有水煎煮提取和乙醇提取方法[7-12]，在此基礎(chǔ)上，本研究工藝初篩設(shè)計(jì)了4條工藝路線。（1）工藝Ⅰ：全方藥材水煎煮提??；（2）工藝Ⅱ：方中苦參、赤芍等藥材水煎煮提取，另將烏梢蛇、當(dāng)歸采用60%乙醇回流提??；（3）工藝Ⅲ：烏梢蛇、當(dāng)歸、苦參、赤芍采用60%乙醇回流提取，其余藥材水煎煮提取；（4）工藝Ⅳ：全方藥材60%乙醇回流提取。提取后分別得到提取物濃溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，均含1 g/mL（以生藥計(jì)，下同）。

2.1.2 止癢藥效實(shí)驗(yàn)方法 止癢藥效模型為：靜脈注射右旋糖酐40誘發(fā)小鼠皮膚瘙癢模型[16-18]。取小鼠分為以下7組：陰性對(duì)照組、不同工藝提取物組和陽(yáng)性對(duì)照藥低、高劑量組，每組11只。不同工藝提取物組：小鼠灌胃給藥量均為18 mL/kg（人日服用量為1 g/kg，以臨床2倍劑量給藥，折算成小鼠給藥量為18 g/kg[19-20]，即小鼠給藥量為18 mL/kg）。陽(yáng)性藥對(duì)照組：鹽酸苯海拉明片[13][用水制備成低、高劑量（0.625、1.25 mg/mL）溶液 ，以灌胃給藥量18 mL/kg計(jì)，低劑量組給藥量為11.25 mg/kg（相當(dāng)于人臨床劑量），高劑量組給藥量為22.5 mg/kg（相當(dāng)于人臨床劑量的2倍）]。陰性對(duì)照組：給予同體積蒸餾水（18 mL/kg）。以上各組小鼠均每天給藥1次，連續(xù)7 d。末次給藥后1 h，小鼠尾靜脈注射右旋糖酐40（1.25 mg/kg）。以小鼠前爪搔抓頭部、后爪搔抓軀干、嘴咬全身各部位作為瘙癢指征。錄像儀觀察記錄，以瘙抓潛伏期（注射右旋糖苷40結(jié)束至第1次搔抓開始的時(shí)間）及注射右旋糖苷40結(jié)束后30 min內(nèi)小鼠搔抓次數(shù)作為止癢效果的評(píng)價(jià)指標(biāo)。若30 min內(nèi)未出現(xiàn)搔抓指征的動(dòng)物，搔抓次數(shù)按0次計(jì)，搔抓潛伏期按1 800 s計(jì)。各組抓搔小鼠只數(shù)的比較采用SPSS 19.0行χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.1.3 止癢藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果 陰性對(duì)照組小鼠均出現(xiàn)搔抓，表明造模成功。各給藥組小鼠搔抓指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果見表1。

由表1結(jié)果表明，與陰性對(duì)照組比較，工藝Ⅲ提取物組與工藝Ⅳ提取物組發(fā)生搔抓小鼠的只數(shù)更少，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），工藝Ⅳ提取物組小鼠瘙抓潛伏期延長(zhǎng)，瘙抓次數(shù)減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），即工藝Ⅳ所得提取物對(duì)右旋糖酐40誘發(fā)的小鼠全身瘙癢的止癢效果優(yōu)于其他工藝所得提取物。故本研究確定本方的提取工藝為工藝Ⅳ，即全方以60%乙醇回流提取。

2.2 阿魏酸含量測(cè)定

參考文獻(xiàn)[15]方法進(jìn)行測(cè)定。

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸溶液（17 ∶ 83，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：316 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。取“2.2.2”～“2.2.4”項(xiàng)下對(duì)照品、供試品和缺當(dāng)歸陰性樣品溶液進(jìn)樣分析，理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)應(yīng)不低于5 000。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜見圖1。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置于棕色量瓶中，加70%甲醇制成每mL含阿魏酸12 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取提取物（工藝Ⅳ）干燥后所得浸膏粉0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲（240 W，50 kHz）提取20 min，70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置；取上清液濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 缺當(dāng)歸陰性樣品溶液的制備 取缺當(dāng)歸的蛇歸止癢方，全方按工藝Ⅳ以60%乙醇回流提取，得陰性樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下操作方法制得缺當(dāng)歸陰性樣品溶液。

2.2.5 線性范圍考察 取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置于棕色量瓶中，加70%甲醇制成質(zhì)量濃度為0.12 mg/mL的對(duì)照品貯備液。 分別精密吸取對(duì)照品貯備液0.1、0.5、1、1.5、2 mL，置于10 mL棕色量瓶中，得質(zhì)量濃度分別為1.25、6.23、12.46、18.69、24.92 μg/mL的對(duì)照品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）、峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸，得阿魏酸回歸方程為y=46 134x+ 48 544（r=0.999 6），表明阿魏酸檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為1.25～24.92 μg/mL。

2.2.6 精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和加樣回收試驗(yàn) 按相關(guān)方法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果，精密度試驗(yàn)中峰面積的RSD為0.15%（n=6），重復(fù)性試驗(yàn)中峰面積的RSD為1.23%（n=6），穩(wěn)定性試驗(yàn)中供試品溶液放置24 h內(nèi)含量的RSD為1.59%（n=6），平均加樣回收率為101.21%（RSD=1.36%，n=6），均符合相關(guān)要求。

2.3 芍藥苷含量測(cè)定

參考文獻(xiàn)[15]方法測(cè)定。

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（40 ∶ 65，V/V）；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm。進(jìn)樣量：10 μL。取“2.3.2”～“2.3.4”項(xiàng)下對(duì)照品、供試品和缺赤芍陰性樣品溶液，進(jìn)樣分析，理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)應(yīng)不低于3 000。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜見圖2。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥36 h的芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每mL含芍藥苷0.5 mg的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取提取物（工藝Ⅳ）干浸膏粉1.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理20 min，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 缺赤芍陰性樣品溶液的制備 取缺赤芍的蛇歸止癢方，全方按工藝Ⅳ以60%乙醇回流提取，得陰性樣品，按“2.3.3”項(xiàng)下操作方法制得缺赤芍陰性樣品溶液。

2.3.5 線性范圍考察 取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，置于量瓶中，加甲醇制成質(zhì)量濃度為5 mg/mL的對(duì)照品貯備液。分別精密吸取貯備液0.1、0.5、1、1.5、2 mL，置于10 mL量瓶中，制備成質(zhì)量濃度分別為54.1、270.5、541.0、811.5、1 082.0 μg/mL的對(duì)照品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）、峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸，得芍藥苷線性回歸方程為y= 16 552x-68 719（r=0.999 6），表明芍藥苷檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為54.1～1 082.0 μg/mL。

2.3.6 精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和加樣回收試驗(yàn) 按相關(guān)方法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果，精密度試驗(yàn)中芍藥苷峰面積的RSD為0.20%（n=6），重復(fù)性試驗(yàn)中峰面積的RSD為1.33%（n=6），穩(wěn)定性試驗(yàn)中供試品溶液放置24 h內(nèi)含量的RSD為1.99%（n=6），平均加樣回收率為98.91%（RSD=1.95%，n=6），均符合相關(guān)要求。

2.4 苦參堿及氧化苦參堿的含量測(cè)定

按參考文獻(xiàn)[9]方法測(cè)定。

2.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：GP-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液（80 ∶ 10 ∶ 10，V/V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10 μL。取“2.4.2”～“2.4.4”項(xiàng)下對(duì)照品、供試品和缺苦參陰性樣品溶液，進(jìn)樣分析，理論板數(shù)按氧化苦參堿峰計(jì)應(yīng)不低于2 000。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜見圖3。

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備 取苦參堿對(duì)照品、氧化苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，加乙腈-無(wú)水乙醇（80 ∶ 20，V/V）混合溶液分別制成每mL含苦參堿50 μg、氧化苦參堿0.15 mg的溶液，即得。

2.4.3 供試品溶液的制備 取提取物（工藝Ⅳ）干浸膏粉末約2.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加濃氨試液0.5 mL，精密加入三氯甲烷20 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲（功率：250 W，頻率：33 kHz）處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液5 mL，加在中性氧化鋁柱（100～200目5 g，內(nèi)徑1 cm）中，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇（7 ∶ 3，V/V）混合溶液各20 mL洗脫，合并收集洗脫液，回收溶劑；殘?jiān)訜o(wú)水乙醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.4.4 缺苦參陰性樣品溶液的制備 取缺苦參的蛇歸止癢方，全方按工藝Ⅳ以60%乙醇回流提取，得陰性樣品，按“2.4.3”項(xiàng)下操作方法制得缺苦參陰性樣品溶液。

2.4.5 線性范圍與定量限考察 取苦參堿和氧化苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，分別置于量瓶中，加乙腈-無(wú)水乙醇（80 ∶ 20，V/V）混合溶液制成質(zhì)量濃度0.5、1.5 mg/mL的苦參堿和氧化苦參堿對(duì)照品貯備液。分別精密吸取苦參堿對(duì)照品貯備液0.1、0.5、1、1.5、2 mL，置于10 mL量瓶中，制成質(zhì)量濃度為5.0、24.9、49.8 、74.7、99.6 μg/mL的苦參堿對(duì)照品溶液；同法制備質(zhì)量濃度為15.4、77.2、154.3、231.5、308.6 μg/mL的氧化苦參堿對(duì)照品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）、峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸，得苦參堿和氧化苦參堿的回歸方程分別為y=5 799x+4 843.1（r=0.999 1）、y=6 685.8x-25 325（r=0.999 4），表明苦參堿和氧化苦參堿檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為5.0～99.6、15.4～308.6 μg/mL。

按相關(guān)方法操作，苦參堿與氧化苦參堿定量限分別為4.99、10.26 ng。

2.4.6 精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和加樣回收試驗(yàn) 按相關(guān)方法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果，精密度試驗(yàn)中苦參堿、氧化苦參堿峰面積的 RSD分別為0.99%、0.19%（n=6），重復(fù)性試驗(yàn)中峰面積的RSD分別為1.55%、1.15%（n=6）；穩(wěn)定性試驗(yàn)中供試品溶液放置 24 h內(nèi)含量的RSD分別為1.44%、0.65%（n=6），平均加樣回收率分別為99.90%、98.33%（RSD分別為1.85%、1.71%，n=6），均符合相關(guān)要求。

2.5 正交試驗(yàn)優(yōu)選乙醇提取工藝

2.5.1 藥材吸液量考察 稱取烏梢蛇、赤芍、當(dāng)歸、苦參等6味藥材共120 g，加500 mL的60%乙醇，浸泡過(guò)夜，濾過(guò)，得濾液，量得濾液體積。計(jì)算吸液量[吸液量=（500-濾液體積）/藥材質(zhì)量]。重復(fù)3次試驗(yàn)。結(jié)果藥材吸液量為1倍（1 mL/g）。根據(jù)此試驗(yàn)結(jié)果，藥材提取時(shí)先加入1倍（1 mL/g）溶劑補(bǔ)足藥材吸液量，再加第1次提取用的溶劑。

2.5.2 正交試驗(yàn)方法與結(jié)果 按處方比例稱取藥材9份，每份300 g，選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)（A，%）、加醇量（B，倍）、回流提取時(shí)間及次數(shù)（C，h）作為考察因素[21-22]，按照L9（34）正交試驗(yàn)分別進(jìn)行提取，得提取液分別減壓濃縮至干膏，計(jì)算收膏率（干膏量/投料量×100%）。以芍藥苷、阿魏酸、苦參堿、氧化苦參堿含量及收膏率組成的綜合評(píng)分[綜合評(píng)分=（阿魏酸含量×0.15/阿魏酸含量最大值+芍藥苷含量×0.15/芍藥苷含量最大值+苦參堿含量×0.1/苦參堿含量最大值+氧化苦參堿含量×0.1/氧化苦參堿含量最大值+收膏率×0.5/收膏率最大值）×100]為考察指標(biāo)，優(yōu)選工藝參數(shù)。因素與水平見表2，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表3，方差分析結(jié)果見表4。

由表3、表4可知，各因素對(duì)綜合評(píng)分的影響大小依次為A>B>C，最優(yōu)工藝為A2B3C2：即加入16倍量的60%乙醇提取2次，每次8倍量，提取時(shí)間分別為2、1 h。在實(shí)際提取時(shí)，將補(bǔ)足吸液量所需1倍溶劑與第1次提取所需8倍量溶劑合并一起加入進(jìn)行第1次提取。

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn)

按處方比例稱取烏梢蛇、當(dāng)歸、赤芍、苦參等藥材共1 200 g，按以上確定的最優(yōu)工藝進(jìn)行回流提取，即在藥材中加入16倍量60%乙醇，提取2次，第1次提取前加1倍量60%乙醇補(bǔ)足吸液量，再加8倍量60%乙醇提取2 h；第2次加8倍量60%乙醇提取1 h，合并2次提取液，回收乙醇，減壓濃縮至干浸膏。重復(fù)試驗(yàn)3次，結(jié)果3次試驗(yàn)的平均收膏率為19.22%（RSD=0.96%，n=3），阿魏酸平均含量為0.71 mg/g（RSD=2.96%，n=3）；芍藥苷平均含量為22.13 mg/g （RSD=2.03%，n=3）；苦參堿平均含量為1.92 mg/g（RSD=2.55%，n=3））；氧化苦參堿平均含量為9.88 mg/g（RSD=1.23%，n=3），各指標(biāo)3次試驗(yàn)的RSD均在3%以內(nèi)，表明工藝穩(wěn)定可行。

3 討論

3.1 提取工藝參數(shù)優(yōu)化方法的改進(jìn)

本研究為保證終產(chǎn)品的療效，先以藥效學(xué)結(jié)果為考察指標(biāo)對(duì)全方進(jìn)行了提取工藝路線初篩。發(fā)現(xiàn)各工藝組均對(duì)右旋糖酐40誘發(fā)的小鼠全身瘙癢有止癢效果，其中全方以60%乙醇回流提取效果最優(yōu)，因此確定了藥材全方采用60%乙醇回流提取的工藝路線。之后采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選乙醇回流提取工藝參數(shù)，以阿魏酸、芍藥苷、苦參堿與氧化苦參堿含量以及收膏率等組成的綜合評(píng)分結(jié)果為考察指標(biāo)進(jìn)行乙醇提取工藝參數(shù)的篩選。因考慮到中藥藥效一般多為全方提取物，即各藥材多種成分協(xié)同作用的結(jié)果，故收膏率應(yīng)做為評(píng)價(jià)工藝的關(guān)鍵指標(biāo)，因此設(shè)定綜合評(píng)分公式中收膏率的權(quán)重系數(shù)為0.5，其他指標(biāo)性成分含量的權(quán)重系數(shù)共占0.5，以此來(lái)優(yōu)化提取工藝參數(shù)更為合理。

3.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法的改進(jìn)

提取次數(shù)為影響中藥提取率的因素之一，所以在中藥提取時(shí)必須進(jìn)行提取次數(shù)的考察，但在L9（34）表中，提取次數(shù)作為一個(gè)因素會(huì)與其他因素產(chǎn)生交互作用，在實(shí)際操作過(guò)程中會(huì)引起其他水平的變化[23]。目前已經(jīng)有較多文獻(xiàn)[24-26]不將提取次數(shù)作為影響因素放入正交設(shè)計(jì)表中，而是先考察提取次數(shù)，提取次數(shù)確定后，再采用正交試驗(yàn)考察其他因素，這樣就可避免交互作用的影響，但是試驗(yàn)次數(shù)會(huì)有所增加。在本研究提取工藝的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)中，則將提取次數(shù)和提取時(shí)間合并為一個(gè)因素，在不增加試驗(yàn)次數(shù)和不引起其他因素項(xiàng)下水平變化的情況下同時(shí)考察了提取時(shí)間和提取次數(shù)。

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（收稿日期：2018-04-18 修回日期：2018-06-15）

（編輯：劉 萍）