国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

膠體金免疫層析法快速定量檢測(cè)糙米中重金屬離子鉛

2018-09-10 16:07劉美辰路宏博趙小旭等
糧食科技與經(jīng)濟(jì) 2018年2期
關(guān)鍵詞:微孔重復(fù)性試劑

劉美辰 路宏博 趙小旭等

[摘要]本研究建立了快速定量檢測(cè)糙米中重金屬離子鉛的膠體金免疫層析試紙條分析方法。通過(guò)一系列的實(shí)驗(yàn)研究了該方法的靈敏度、重復(fù)性和特異性。結(jié)果表明用免疫膠體金法測(cè)定糙米中鉛的檢出限為0.041mg/kg,定量限為0.097mg/kg,方法重現(xiàn)性較好,使用膠體金免疫層析法和原子吸收光譜法同時(shí)檢測(cè)加標(biāo)樣品,結(jié)果一致。因此,該方法適用于糙米中重金屬離子鉛的快速定量檢測(cè)。

[關(guān)鍵詞]鉛;膠體金免疫層析法;乳制品

中圖分類(lèi)號(hào):S511 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A DOI:10.16465/j.gste.cn431252ts.20180213

在自然情況下,土壤中重金屬含量較低,一般情況下不會(huì)對(duì)人體及生態(tài)環(huán)境造成很大的危害。但是,隨著我國(guó)工業(yè)的發(fā)展,固體廢棄物不斷增加,河流污染嚴(yán)重,同時(shí)農(nóng)業(yè)化肥和農(nóng)藥的大量使用也加劇了重金屬在土壤中的大量累積。目前我國(guó)耕地重金屬污染嚴(yán)重,被污染的耕地面積也在不斷增加。鉛是受污染糧食中的有毒重金屬之一,對(duì)人的神經(jīng)系統(tǒng)、骨髓造血機(jī)能、消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等都有明顯毒害作用且具有積累性,重金屬鉛能與人體中多種酶結(jié)合進(jìn)而干擾人體多方面的生理活動(dòng)。當(dāng)人體中鉛含量升高時(shí),會(huì)破壞血紅蛋白的合成,造成貧血、血壓增高、腎損傷,造成孕婦流產(chǎn)和墮胎,破壞神經(jīng)中樞,影響腦發(fā)育、影響生育能力,造成小孩發(fā)育遲緩和行為沖動(dòng)。糧食作為人們飲食的主要食物來(lái)源,其安全性對(duì)于國(guó)民的健康至關(guān)重要。

目前常見(jiàn)的重金屬離子鉛的檢測(cè)方法主要是石墨爐原子吸收光譜法、原子熒光光譜法、電感耦合等離子體質(zhì)譜法等,這些方法需要費(fèi)用高昂的大型儀器設(shè)備、專(zhuān)門(mén)的實(shí)驗(yàn)室、專(zhuān)業(yè)的操作技術(shù)人員和復(fù)雜的樣品前處理過(guò)程,不適合現(xiàn)場(chǎng)快速篩選檢測(cè)。

目前檢測(cè)重金屬鉛的方法多為儀器法,利用膠體金免疫層析法檢測(cè)重金屬離子鉛較少,因此本文基于膠體金免疫層析技術(shù),檢測(cè)主要的糧食類(lèi)別之一:糙米中重金屬鉛的含量具有必要性,并且對(duì)于糧庫(kù)等機(jī)構(gòu)來(lái)說(shuō)具有實(shí)際意義。

1材料與方法

1.1主要儀器

干式加熱器(HMG-GS北京華安麥科生物技術(shù)有限公司)、膠體金讀數(shù)儀(BMZ 6000北京美正生物科技有限公司)、200μL移液器(賽多利斯(上海)貿(mào)易有限公司)、計(jì)時(shí)器(北京華安麥科生物技術(shù)有限公司)、離心管(50mL,20mL,潔特)、槍頭(BIOFIL)、一次性手套(麥迪康)、離心機(jī)(DM0412大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器(北京)有限公司)、原子吸收光譜儀(PinAAcle 900T perkinelmer公司)、渦旋混合器(TZL-5013蘇州珀西瓦爾實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)、分析天平(PL-602E梅特勒一托利多分析天平),20目篩網(wǎng)。

1.2主要試劑

超純水、硝酸、硫酸、EDTA、乙酸乙酯、甲醇、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鈉等。

1.3方法

1.3.1檢測(cè)原理

重金屬鉛檢測(cè)試紙條應(yīng)用了競(jìng)爭(zhēng)抑制膠體金免疫層析的原理(結(jié)構(gòu)如圖1所示)。將金標(biāo)抗體結(jié)合在金標(biāo)墊/微孔中,將抗原(T線)和二抗(C線)固定于NC膜上,當(dāng)待測(cè)樣品加到樣品墊/微孔中后,樣本中抗原與金標(biāo)抗體結(jié)合,通過(guò)層析作用向前移動(dòng)。當(dāng)移至(T線)區(qū)域時(shí),偶聯(lián)抗原和未結(jié)合金標(biāo)抗體結(jié)合而被截留,聚集在檢測(cè)線(T線)上,剩余金標(biāo)抗體越過(guò)檢測(cè)線(T線),在質(zhì)控線(C線)處與二抗結(jié)合顯色。配合儀器讀取結(jié)果如圖1所示。

1.3.2檢測(cè)方法

1.3.2.1樣品前處理

稱(chēng)取2.0g±0.02g均質(zhì)(過(guò)20目篩網(wǎng))樣本于50mL離心管中,加入6mL硝酸溶液(0.5M)和4mL乙酸乙酯,具塞,充分振蕩5min后,4 000rpm離心5min;取1mL上清,加入2mL硫酸溶液(1M),振蕩3min,4 000rpm離心3min;棄上清,取500μL下清,立即加入0.5M PBS溶液(5min內(nèi)),振蕩混勻;取250μL該混合液,加入200μL EDTA-水溶液(0.5M),振蕩均勻,1min內(nèi)待檢。

1.3.2.2檢測(cè)步驟

(1)在進(jìn)行檢測(cè)前先完整閱讀使用說(shuō)明書(shū),從原包裝中取出試劑桶,打開(kāi)后取出所需數(shù)量的微孔試劑和試紙條,并做好標(biāo)記;微孔試劑取出后,請(qǐng)立即蓋好試劑桶蓋。

(2)使用前將試紙條、微孔試劑和待檢樣品恢復(fù)至室溫25℃;將所需微孔試劑置于加熱器上的微孔中。一次檢測(cè)樣品數(shù)量不要超過(guò)4個(gè);如果一次檢測(cè)樣品數(shù)量超過(guò)4個(gè),請(qǐng)按照4個(gè)一組,分批檢測(cè)。

(3)用微量移液器移取200μL回溫后的樣品于微孔試中,緩慢抽吸至檢測(cè)樣品與微孔試劑充分混勻;使用計(jì)時(shí)器,開(kāi)始計(jì)時(shí)。

(4)40℃條件下孵育5min;孵育結(jié)束后,停止計(jì)時(shí);從試劑桶中取出所需數(shù)量的試紙條并插入微孔試劑中,使印有LOGO手柄端向上,另一端向下并充分浸入溶液中;再次按下計(jì)時(shí)器,開(kāi)始第二次5min孵育。

(5)第二次5min孵育結(jié)束后,停止計(jì)時(shí);取出試紙條,擦除下端樣品墊,立即使用讀數(shù)儀讀取檢測(cè)結(jié)果。注意不要接觸或損壞測(cè)試條中部檢測(cè)區(qū)域,并在1min內(nèi)讀取結(jié)果。

(6)檢驗(yàn)完畢,剩余試紙條和微孔試劑放回試劑桶并蓋緊桶蓋,剩余所有的試劑蓋緊瓶蓋,一起放回試劑盒中,2~8℃保存。

1.3.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

稱(chēng)取陰性樣品,每份2g,然后加入重金屬鉛標(biāo)準(zhǔn)品,添加鉛含量在0μg/kg,20μg/kg,50μg/kg,100μg/kg,200μg/kg,400μg/kg。每個(gè)濃度三份平行。然后其余步驟同1.3.2.2,以T線灰度值作為縱坐標(biāo),以對(duì)應(yīng)的樣品中鉛添加濃度值為橫坐標(biāo),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2.4方法檢出限及定量限

稱(chēng)取20份陰性樣本,每份2g,根據(jù)步驟1.3.2.1和1.3.2.2進(jìn)行檢測(cè),該方法檢出限LOD以陰性樣品20次測(cè)定結(jié)果的均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算,定量限LOQ以空白樣品20次測(cè)定結(jié)果的均值加10倍標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算。

1.3.2.5準(zhǔn)確性

利用膠體金分析法與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法分別對(duì)8個(gè)糙米樣品進(jìn)行雙試驗(yàn)檢測(cè),采用配對(duì)t檢驗(yàn)法比較兩種方法的檢測(cè)結(jié)果是否存在顯著性差異。

1.3.2.6重復(fù)性

選取中等水平糙米樣品,重復(fù)測(cè)定8次,按照GB/T 4889-2008《數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理和解釋正態(tài)分布均值和方差的估計(jì)與檢驗(yàn)》中7.1單總體方差或標(biāo)準(zhǔn)差檢驗(yàn)實(shí)施x2分布檢驗(yàn),判斷該方法重復(fù)性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)差是否超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法中規(guī)定的重復(fù)性要求,同時(shí)采用8次測(cè)定極差與現(xiàn)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的8次測(cè)定重復(fù)性臨界極差進(jìn)行對(duì)照,考察該方法的重復(fù)性。

2結(jié)果分析

2.1結(jié)果判定

(1)打開(kāi)樣品卡殼,將定量試紙條插入樣品卡殼槽內(nèi),保證白色NC膜表面的兩條色帶在卡殼視窗中間。

(2)將樣品卡殼插入讀數(shù)儀樣品卡槽中,按照儀器操作程序,點(diǎn)擊觸屏“檢測(cè)”鍵或“TEST”按鈕,讀取結(jié)果。

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

將糙米的前處理液按照1.3.2.2用膠體金試紙條進(jìn)行檢測(cè)并用膠體金讀數(shù)儀掃描,以掃描檢測(cè)線的灰度值為縱坐標(biāo),以添加后的鉛濃度值(mg/kg)為橫坐標(biāo),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果如圖2所示。

2.3方法的檢出限和定量限

通過(guò)對(duì)20個(gè)獨(dú)立的陰性樣品進(jìn)行測(cè)定,該方法的檢出限LOD結(jié)果為0.041mg/kg,定量限LOQ結(jié)果為0.097mg/kg,具體的檢測(cè)結(jié)果如表1所示。

2.4準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)

分別采用膠體金試紙法和儀器法對(duì)8個(gè)已知濃度的樣品進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果如表2所示。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可知,膠體金試紙法和儀器法的檢測(cè)結(jié)果不存在顯著性差異。

2.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

按照步驟1.3.2.1和1.3.2.2進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果如表3所示,通過(guò)檢測(cè)結(jié)果計(jì)算得出,檢測(cè)結(jié)果平均值為0.125mg/kg,標(biāo)準(zhǔn)偏差s=0.013mg/kg,極差=0.043mg/kg;根據(jù)GB 5009.12-2017規(guī)定:在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算數(shù)平均值的20%,則兩次測(cè)定絕對(duì)差(即重復(fù)性限r(nóng))≤0.025,8次測(cè)定的重復(fù)性臨界極差ERR95(8)=F(8)*r/2.8=0.038,標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差Sr=r/2.8=0.008 9。顯著性水平a=0.05情況下,查表得x20.95(7)=14.067,x2=(n-1)s2/sr2=15.86>x20.95(7),極差0.043>重復(fù)性臨界極差ERR95(8),檢測(cè)結(jié)果表明該方法測(cè)定的重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差和極差均超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法中規(guī)定的重復(fù)性要求。

2.6注意事項(xiàng)

(1)檢測(cè)試紙條請(qǐng)?jiān)谟行趦?nèi)使用,使用前將試紙條和待檢樣本恢復(fù)至室溫。

(2)樣本大米和糙米可共用一條曲線,即糙米樣本也可用大米的曲線進(jìn)行檢測(cè)。

(3)所有溶液使用前需搖勻,試劑C會(huì)有沉淀出現(xiàn),但不影響結(jié)果。

(4)試劑A具有微弱的揮發(fā)性,建議佩戴口罩或在通風(fēng)櫥中操作。

(5)樣本在振蕩完,移取1.8mL上清時(shí),偶爾會(huì)有顆粒物堵塞槍頭的情況發(fā)生,可吹出、重新吸取。

(6)偶有樣本因顆粒度過(guò)細(xì)等出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,造成上清取液量不足,則“方法二”中第一步振蕩5min后,可以靜置10min后再離心,也可適當(dāng)增加離心時(shí)間至8~10min。

(7)檢測(cè)過(guò)程中請(qǐng)勿觸摸試紙條中央的白色膜面,如不小心接觸后請(qǐng)遺棄。

(8)槍頭與離心管等耗材不可混用,以免交叉污染。

(9)樣品要與微孔中試劑充分混合均勻,避免產(chǎn)生泡沫。

(10)第二次孵育后,務(wù)必立即去掉測(cè)試條下端的樣品墊,并在1min內(nèi)讀取結(jié)果,因?yàn)樵嚰垪l干燥后顏色深度會(huì)產(chǎn)生一定變化,影響最后的結(jié)果。

(11)儀器讀取結(jié)果必須使用配套讀數(shù)儀和樣品卡槽。

(12)試劑從試劑桶取出后,請(qǐng)立即蓋好試劑桶蓋。用完一桶試劑再打開(kāi)另外一桶,如果一次用不完8個(gè)微孔,可取用所需數(shù)量的微孔,將剩余微孔立即放回到裝有干燥劑的試劑桶中密封保存。請(qǐng)小心開(kāi)啟微孔蓋,以保證全部試劑保留在微孔中。

(13)如發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性,檢測(cè)結(jié)果需要使用法定的確證方法進(jìn)行確證。

(14)試驗(yàn)遇到的任何問(wèn)題,請(qǐng)與供應(yīng)商聯(lián)系。

3結(jié)論

通過(guò)一系列性能評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn),重金屬離子鉛膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)時(shí)間在15min內(nèi),檢出限為0.041mg/kg,定量限為0.097mg/kg。該方法重復(fù)性良好,檢測(cè)結(jié)果與儀器法檢測(cè)結(jié)果一致,方法簡(jiǎn)便,對(duì)人員專(zhuān)業(yè)技能要求較低,并且其靈敏度、穩(wěn)定性和特異性等均達(dá)到了食品中有毒有害物質(zhì)快速檢測(cè)的要求,非常適用于糧庫(kù)收購(gòu)環(huán)節(jié)的篩選工作。

猜你喜歡
微孔重復(fù)性試劑
CJ/T 263—2018水處理用剛玉微孔曝氣器
微細(xì)電火花微孔加工技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀
池塘微孔納米增氧技術(shù)應(yīng)用
改良小切口手術(shù)根治腋臭72例療效觀察
高職教育中針對(duì)“對(duì)口單招學(xué)生”教學(xué)改革的探索
“四指定”脫離實(shí)際 有礙實(shí)驗(yàn)創(chuàng)新
高中生物學(xué)中幾種特殊試劑的應(yīng)用
物質(zhì)鑒別題的解題方略
高一化學(xué)綜合檢測(cè)題
来宾市| 方正县| 宜昌市| 龙口市| 金山区| 甘孜县| 汾西县| 赤壁市| 安宁市| 玉屏| 冀州市| 信丰县| 新泰市| 鄂州市| 云阳县| 南江县| 应城市| 邛崃市| 沂南县| 虹口区| 四子王旗| 昭平县| 云龙县| 方城县| 武强县| 东源县| 姜堰市| 庆阳市| 泰顺县| 会东县| 新巴尔虎右旗| 育儿| 上犹县| 延川县| 昆山市| 揭阳市| 久治县| 长武县| 布拖县| 招远市| 合肥市|