滕金玲 李 清 陳為峰 劉 鵬 陳忠霞 譚善杰

（1山東省莒南縣動物疫病預(yù)防控制中心，山東臨沂 276600；2山東省臨沂市畜牧獸醫(yī)檢測中心，山東臨沂 276003；3山東省臨沂市動物疫病預(yù)防控制中心，山東臨沂 264205；4山東省臨沂市畜牧站，山東臨沂 276600）

1 發(fā)病情況

某豬場飼養(yǎng)21頭母豬，產(chǎn)后20日齡左右仔豬出現(xiàn)腹瀉、高熱、偶有嘔吐或盲目運(yùn)動?？股厮幬镏委煙o效，同窩死亡率達(dá)100%，懷疑患有偽狂犬病。后又出現(xiàn)3窩發(fā)病，養(yǎng)豬場主電話求診。通過了解情況得知該豬場未做任何疫苗免疫，之前生產(chǎn)狀況穩(wěn)定。

1.1 臨床觀察

3窩發(fā)病仔豬為25～30日齡，已隔離?；疾∽胸i排黃色或黃褐色粘稠稀便，消瘦，食欲減少或廢絕，四肢無力，走路搖擺，眼屎增多，眼窩下陷，渾身被糞便污染臟膩。測量體溫大都在40.5℃以上，呼吸快，耳尖稍紫，個別病豬嘔吐或有神經(jīng)癥狀。

1.2 剖檢觀察

每窩各剖檢1頭病死仔豬，剖檢癥狀基本相似。死豬肌肉干燥，脫水嚴(yán)重，血液稀薄，肺臟、腎臟呈點(diǎn)狀出血，腸內(nèi)容物為黃色或褐色，淋巴結(jié)腫大出血，胃空癟，其中1頭膀胱有零星出血點(diǎn)，其他臟器無病變。

2 實(shí)驗(yàn)室檢測

對3窩豬進(jìn)行前腔靜脈采血，每窩采集母豬血液和2頭患病活仔豬血液，共采9份，編號為1～9號。第一窩：母豬1號，仔豬2號，仔豬3號；第二窩：母豬4號，仔豬5號，仔豬6號；第三窩：母豬7號，仔豬8號，仔豬9號。將9份血樣2 000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘后，取出血清備用。

2.1 豬瘟病毒抗體檢測

豬瘟病毒抗體檢測試劑盒采用美國（IDEXX）生產(chǎn)的ELISA檢測試劑盒。具體操作步驟按說明書進(jìn)行。使用前，所有試劑和微量包被反應(yīng)板在22℃室溫下放置2小時，并通過輕輕渦旋、旋轉(zhuǎn)混勻。

2.1.1 判定方法

陰性對照平均OD450nm＝1.076＞0.500，陽性對照阻斷率＝86.2%＞50%，試驗(yàn)成立。

計算被檢樣本阻斷率＝（陰性對照平均OD450nm－樣本OD450nm）/陰性對照平均OD450nm×100%。

如果被檢樣本的阻斷率≤30%，該樣本被判為陰性，無豬瘟抗體存在；被檢樣本阻斷率＞40%，該樣本被判為陽性，有豬瘟抗體存在；如果被檢樣品阻斷率在30%～40%之間，該樣本判為可疑。

2.1.2 檢測結(jié)果

由表1可知，母豬在沒有免疫豬瘟疫苗的情況下，豬瘟抗體阻斷率分別達(dá)到94%、93%、92%，應(yīng)視該抗體為野毒抗體，該母豬為豬瘟病毒帶毒豬。6頭患病仔豬的豬瘟病毒抗體阻斷率很低，均在30%以下，且均為負(fù)值，說明患病仔豬豬瘟抗體陰性，無豬瘟抗體存在，豬瘟感染風(fēng)險性大。

2.2 豬瘟病毒抗原檢測

豬瘟病毒抗原檢測試劑盒采用美國（IDEXX）的ELISA檢測試劑盒。使用前，所有試劑和微量包被反應(yīng)板在22℃室溫下放置2小時，并通過輕輕渦旋、旋轉(zhuǎn)混勻。整個試驗(yàn)過程嚴(yán)格操作程序，且不同的樣本和試劑使用不同的吸頭。2.2.1 判定方法

陽性對照OD的平均值（1.000）與陰性對照OD的平均值（0.085）之差為0.915，大于0.150；陰性對照OD的平均值為0.085，小于0.250，試驗(yàn)成立。計算S－N值，即樣品S（OD450nm）與陰性對照N（OD450nm）的平均值之差。被檢樣本S－N值≤0.100判為陰性；被檢樣本S－N值＞0.300判為陽性，即為感染豬瘟；被檢樣本0.100＜S－N值＜0.300，判為可疑。

2.2.2 檢測結(jié)果

2號、3號、5號、6號、8號、9號6頭患病仔豬的豬瘟病毒抗原S－N值均很高，大于0.3（見表2）。表明6頭患病仔豬都感染了豬瘟病毒，并且已呈現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，說明6頭患病仔豬均在豬瘟感染發(fā)病期（病毒血癥期）。

2.3 豬偽狂犬病毒gE抗體檢測

豬偽狂犬病毒 gpI（gE） 抗體檢測采用美國（IDEXX）檢測試劑盒。使用前，所有試劑和微量包被反應(yīng)板恢復(fù)至室溫（18～26℃），并通過輕輕渦旋、旋轉(zhuǎn)或顛倒混勻。整個實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格操作程序，且不同的樣本和試劑使用不同的吸頭。

2.3.1 判定方法

陰性對照N（OD650nm）的平均值（0.879）減去陽性對照P（OD650nm）的平均值（0.169）等于0.71，大于0.300，試驗(yàn)成立。計算S/N值，即樣品S（OD650nm）與陰性對照N（OD650nm）的平均值之比。被檢樣本S/N值≤0.60判為陽性，即被偽狂犬野毒感染；被檢樣本S/N值＞0.60判為陰性；被檢樣本0.60＜S/N值≤0.70，判為可疑，過一段時間后需要重新檢測。

2.3.2 檢測結(jié)果

1～9號9頭豬偽狂犬病毒gE抗體S/N值均為陰性，且gE抗體水平基本一致，表明均未感染豬偽狂犬病毒（表3）。

2.4 豬偽狂犬病毒gB抗體檢測

豬偽狂犬病毒gB抗體檢測采用美國（IDEXX）ELISA試劑盒。使用前，所有試劑和微量包被反應(yīng)板一律恢復(fù)至室溫（18～26℃），并通過輕輕渦旋、旋轉(zhuǎn)或顛倒混勻。

表1 豬瘟病毒抗體阻斷率

表2 豬瘟病毒抗原S-N值

2.4.1 結(jié)果有效性

陰性對照N（OD650nm）的平均值（1.315）減去陽性對照P（OD650nm）的平均值（0.101）等于1.214，大于0.300，試驗(yàn)成立。計算S/N值，即樣品S（OD650nm）與陰性對照N（OD650nm）的平均值之比。結(jié)果判定：被檢樣本S/N值≤0.60判為PRV抗體陽性；被檢樣本S/N值＞0.60判為PRV抗體陰性；被檢樣本0.60＜S/N值≤0.70，判為可疑，過一段時間后需要重新檢測。

表3 偽狂犬病毒gE抗體S/N值

表4 偽狂犬病毒gB抗體S/N值

2.4.2 檢測結(jié)果

9頭豬偽狂犬病毒gB抗體S/N值均為陽性，且gB抗體水平基本一致，說明1～9號豬偽狂犬病毒抗體狀況穩(wěn)定（表4）。

3 診斷結(jié)論

由以上結(jié)果分析得出，該豬場發(fā)病豬為豬瘟感染病例，而非偽狂犬病病例。

4 總結(jié)

4.1 豬瘟和豬偽狂犬病臨床相似點(diǎn)

體溫高（40.5℃以上）、眼分泌物多、呼吸快、組織末梢發(fā)紫，皮下有出血點(diǎn)，嘔吐，出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，拉黃色稀便，腎臟和肺臟呈點(diǎn)狀出血，有扁桃體出血、壞死等癥狀。

4.2 豬瘟和豬偽狂犬病臨床不同點(diǎn)

⑴病原不同：豬瘟病毒是黃病毒科、瘟病毒屬、RNA病毒；豬偽狂犬病毒是皰疹病毒科、水痘病毒屬、DNA病毒。

⑵臨床癥狀不同：豬瘟呈現(xiàn)全身皮下出血點(diǎn)或斑，甚至大面積融合性出血，重者全身呈“紫羅蘭”色。豬瘟表現(xiàn)全身組織、器官泛性出血，后期皮膚蒼白或黃染，高熱稽留，仔豬腹瀉，糞便起初黃色粘稠，后期褐色，中大豬尿液為黃褐色，糞便干稀交替，甚至血便等。

豬偽狂犬病呈現(xiàn)腹下或腹股溝皮下出血點(diǎn)，少數(shù)病例會出現(xiàn)皮膚壞死，仔豬嘔吐、腹瀉、拉黃白色稀便、轉(zhuǎn)圈等盲目運(yùn)動，叫聲嘶啞，耳朵直立，目光呆直，趨暗避光，中大豬頑固性咳嗽，后軀麻痹；母豬流產(chǎn)、木乃伊胎，屢配不孕不發(fā)情或情期不規(guī)律；公豬睪丸、精液質(zhì)量下降等。

⑶剖檢病變不同：豬瘟以出血為主。典型豬瘟病例呈現(xiàn)全身組織器官的廣泛性出血，包括心、肝、脾、肺、腎、腸、胃、膀胱、肋骨、肌肉、脂肪等，喉頭出血，淋巴結(jié)周邊出血，脾臟出血性壞死，回盲結(jié)處鈕扣狀潰瘍灶，血凝不良等。

豬偽狂犬病以壞死為主。某些器官心、肝、脾、肺、腎等出現(xiàn)白色、顆粒狀、凝固性、米粒至豆粒大小的壞死灶，淋巴結(jié)腫大壞死、質(zhì)地堅硬、紅白相間；扁桃體、喉頭氣管壞死，頜下、胃部、腸系膜水腫等。

4.3 小結(jié)

豬瘟和豬偽狂犬病分別是由不同的病毒引起的病毒性疾病，但是在臨床發(fā)病中，很多時候表現(xiàn)出相似的臨床癥狀和剖檢變化，憑經(jīng)驗(yàn)和肉眼難以做出診斷。因此，必須采用實(shí)驗(yàn)室診斷方法才能進(jìn)行確診。實(shí)踐中，采用血清學(xué)ELISA方法進(jìn)行豬瘟抗原、豬瘟抗體和豬偽狂犬病毒gE抗體檢測，進(jìn)行鑒別性診斷；或采集相應(yīng)病料用PCR方法進(jìn)行豬瘟和豬偽狂犬病的病原學(xué)檢測加以確診，這兩種方法可操作性強(qiáng)，結(jié)果精準(zhǔn)，是獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測豬病的常用方法。