蘇 丹

(重慶市涪陵食品藥品檢驗所，重慶 408000)

舒肝平胃丸收載于《中國藥典》(2015年版一部)[1]，由厚樸、陳皮、麩炒枳殼、法半夏等7味中藥組方而成。能疏肝和胃、化濕導(dǎo)滯，用于治療肝胃不和、濕濁中阻所致的胸脅脹滿、胃脘痞塞疼痛、嘈雜噯氣、嘔吐酸水。目前，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]設(shè)立了厚樸中的有效成分厚樸酚、和厚樸酚的含量測定，文獻[2]也報道了采用高效液相色譜法(HPLC)測定其中蒼術(shù)的有效成分蒼術(shù)素，但對處方中其他藥味成分含量無測定報道。為了更好地控制舒肝平胃丸的內(nèi)在質(zhì)量，保證其臨床用藥的安全有效，在前期報道的基礎(chǔ)上[3]，本試驗建立HPLC法同時測定其中橙皮苷、柚皮苷和新橙皮苷的含量，為制定其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 安捷倫1200型高效液相色譜儀(包括在線脫氣機、四元泵、自動進樣器、VWD檢測器、安捷倫色譜工作站，美國安捷倫公司)；梅特勒-托利多XP204型和XPE205型電子分析天平(瑞士梅特勒公司)。

1.2 試藥 柚皮苷對照品(批號110722-201111，純度為93.2%)、橙皮苷對照品(批號110721-201316，純度為95.3%)、新橙皮苷對照品(批號111857-201102，純度為99.6%)，均購自中國食品藥品檢定研究院。水為超純水，乙腈為色譜純(購自迪馬科技公司)，其他試劑均為分析純(購自成都市科龍化工試劑廠)。舒肝平胃丸(購自山東方健制藥有限公司，批號為20160610、20160822、20161208)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(18∶82)；流量：1.0 ml/min；檢測波長：283 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 分別取柚皮苷對照品、橙皮苷對照品、新橙皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成含柚皮苷217.5 μg/ml、橙皮苷361.9 μg/ml和新橙皮苷215.3 μg/ml的對照品貯備液，于4 ℃貯存，備用。分別精密吸取柚皮苷對照品貯備液1、2、4、6、8和10 ml，橙皮苷對照品貯備液1、2、4、6、8和10 ml，新橙皮苷對照品貯備液0.5、1、2、3、4和5 ml，各濃度點分別置同一25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得混合對照品溶液。各個濃度的混合對照品溶液中，柚皮苷對照品的濃度為8.70、17.40、34.80、52.21、69.61和87.01 μg/ml；橙皮苷對照品的濃度為14.48、28.96、57.91、86.87、115.82和144.78 μg/ml；新橙皮苷對照品的濃度為4.31、8.61、17.23、25.84、34.45和43.07 μg/ml。

2.2.2 供試品溶液的制備 取舒肝平胃丸(批號為20160610)適量研細(xì)，精密稱取1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100 ml，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，續(xù)濾液用0.45 μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按照舒肝平胃丸的處方比例及制備工藝制備缺陳皮、枳殼的陰性樣品，并照“2.2.2”項下方法制成陰性樣品溶液。

2.3 專屬性試驗 吸取混合對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μl，照“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和其他成分均達到基線分離，理論塔板數(shù)均不低于5 000；陰性樣品溶液色譜圖中在與供試品溶液色譜中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷相應(yīng)保留時間位置上未見色譜峰，說明其他藥材對測定無干擾。色譜圖見圖1。

2.4 線性關(guān)系考查 精密吸取各個濃度的混合對照品溶液10 μl注入液相色譜儀，以濃度為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進行線性回歸，各成分在各自線性范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1。

表1 線性回歸方程

2.5 精密度試驗 精密吸取最高濃度的混合對照品溶液10 μl，連續(xù)進樣6次，測得柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷峰面積的RSD值分別為1.2%、1.2%和1.1%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品(批號20160610)，于0、2、4、8、12和24 h，按照“2.1”項下色譜條件進樣，測定各成分的峰面積。測得柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷峰面積RSD值分別為1.4%、1.5%和1.8%(n=6)，表明在室溫條件下，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.柚皮苷 2.橙皮苷 3.新橙皮苷

2.7 重復(fù)性試驗取 取同一供試品(批號20160610)，按“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，照“2.1”項下色譜條件，測得柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的平均含量分別為：5.61、8.62和3.03 mg/g, RSD值分別為1.2%、1.2%和1.3%(n=6)，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收試驗 取已知含量的供試品(批號20160610)9份，每3份1組，每份0.5 g，精密稱定，分別加入對照品貯備液(低濃度組：8 ml；中濃度組：10 ml；高濃度組：12 ml)，再加入甲醇，使加入的溶劑總量為100 ml，再按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，照“2.1”項下色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的平均回收率分別為99.0%、99.7%和99.2%，RSD分別為0.9%、1.0%和0.8%，結(jié)果見表2-4。

表2 柚皮苷加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

表3 橙皮苷加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

表4 新橙皮苷加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

2.9 樣品測定 取供試品3批，每批3份，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下測定，記錄峰面積，外標(biāo)法測定樣品中各成分含有量，結(jié)果見表5。

表5 樣品含量測定(n=3) mg/g

3 討論

3.1 提取方法選擇 本試驗選取甲醇為提取溶劑，并考查超聲提取和回流提取對三種有效成分提取率的影響，發(fā)現(xiàn)后者提取率較高。再考查回流提取0.5、1和2 h的提取率，發(fā)現(xiàn)1 h后提取率無明顯提高，故選擇回流提取1 h。

3.2 最大吸收波長選擇 取橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷對照品的甲醇溶液，進行紫外吸收光譜掃描，在283 nm波長處均有最大吸收，且無雜質(zhì)干擾，故以283 nm作為檢測波長。光譜圖見圖2。

圖2 橙皮苷(A)

3.3 流動相選擇 參照2015年版《中國藥典》中枳殼、陳皮含量測定的洗脫條件[1]以及文獻[4-6]中對三種成分含量測定的報道，本試驗考查了乙腈-0.1%磷酸作為流動相。舒肝平胃丸藥味多，成分復(fù)雜，最終確定乙腈和磷酸溶液的比例為18∶82，各成分可以達到較好的分離效果。陳皮、枳殼是舒肝平胃丸中具行氣寬中功效的藥對，本文確定了橙皮苷、柚皮苷和新橙皮苷作為目標(biāo)成分，建立了同時對舒肝平胃丸中該3種成分進行定量測定的HPLC法，結(jié)果顯示，該方法簡單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，能夠為舒肝平胃丸的質(zhì)量控制提供精確的檢測手段。