張 健，梁 喬，王宏燕

（1.遼寧省動物疫病預防控制中心，遼寧 沈陽 110164；2.遼寧省動物醫(yī)學研究院，遼寧 沈陽 110164）

豬葡萄球菌主要引起豬的滲出性皮炎，又稱仔豬油皮病[1]，是最常見的葡萄球菌感染。該病的發(fā)生和流行無明顯的季節(jié)性，一年四季均可發(fā)生。此病需要特別注意皮膚損傷，防止外傷是關鍵[2]。感染病豬還可能會出現(xiàn)敗血性多發(fā)性關節(jié)炎。豬葡萄球菌為條件致病菌、革蘭氏陽性菌，常寄居在皮膚、黏膜上。當動物機體抵抗力降低或皮膚、黏膜破損時，病原便乘虛而入[3]。豬葡萄球菌是導致豬滲出性皮炎的病原，有資料顯示從患有滲出性皮炎的豬分離到該菌的幾率是100%[4]。豬葡萄球菌對生長條件要求不高，可以在普通營養(yǎng)瓊脂上生長。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）采集具有典型臨床患病癥狀的患病豬的肝、脾、心、肺等組織臟器各3份。

（2）培養(yǎng)基、試劑。營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（產品批號20150608），購于北京奧博星生物技術有限公司；麥康凱培養(yǎng)基（產品批號20150708），購于北京奧博星生物技術有限公司；藥敏紙片，購于杭州微生物試劑有限公司；微量生化鑒定管，購于杭州微生物試劑有限公司；VITEX2革蘭氏陽性細菌鑒定卡；其他為實驗室常規(guī)試劑。

（3）試驗于2018年1月18—24日在遼寧省動物疫病預防控制中心實驗室進行。

1.2 方法

1.2.1 細菌分離、純培養(yǎng) 無菌操作采集病豬的肝、脾、肺等組織臟器劃線分區(qū)分別接種于普通營養(yǎng)瓊脂和麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基上，放入恒溫培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)24 h后，觀察細菌的生長狀況及菌落特征，在普通營養(yǎng)瓊脂平板挑取中等大小的灰白色菌落（所對應劃線區(qū)內麥康凱上無菌落生長）進行涂片、染色、鏡檢。革蘭氏染色、形態(tài)、大小及菌落形態(tài)符合豬葡萄球菌特征描述，用普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板純培養(yǎng)。

1.2.2 細菌生化試驗 采用微量生化反應管，將純培養(yǎng)的菌株接種于生化反應管中，按照說明書要求的不同時間觀察試驗結果并記錄。

1.2.3 細菌鑒定儀 應用梅里埃的細菌鑒定儀，選取革蘭氏陽性細菌鑒定卡，挑取18～24 h營養(yǎng)瓊脂純培養(yǎng)的菌落于0.45%的NaCl（3 mL）中，將菌濁度調至0.5～0.63之間，放入陽性卡，上機。6～8 h查看結果。1.2.4 藥敏試驗 采取常規(guī)藥敏紙片法，參照文獻[5]挑取已分離鑒定的菌落劃線接種于MH瓊脂培養(yǎng)基后，將病原菌純培養(yǎng)18～24 h，挑取純培養(yǎng)的菌落放置于無菌的生理鹽水中，制成菌濁液相當于0.5麥氏單位，用滅菌棉簽蘸取適量菌濁液，均勻涂抹到MH瓊脂培養(yǎng)基表面，反復幾次，最后用鑷子夾取藥敏片沿平皿周圍貼好藥片，完成后置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18～24 h后觀察結果。測量抑菌環(huán)直徑，并記錄結果。

2 試驗結果

2.1 細菌分離與培養(yǎng)結果

2.1.1 細菌純培養(yǎng)結果 無菌采集，劃線分區(qū)接種，接種在營養(yǎng)瓊脂和麥康凱瓊脂平板上，37℃18～24 h恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)普通營養(yǎng)瓊脂平板上長出灰白色不透明的圓形菌落，相對劃線區(qū)麥康凱平板上不生長。挑取一個菌落后純培于普通營養(yǎng)瓊脂和麥康凱平板上，37℃18～24 h恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，營養(yǎng)瓊脂平板上長出邊緣光滑，突起，濕潤，不透明的灰白色菌落，4℃放置，部分菌落呈圓潤的點狀，菌落顏色變白黃。麥康凱平板上不長。

2.1.2 染色鏡檢 將菌落涂片，革蘭氏染色后鏡檢。菌落鏡檢呈革蘭氏陽性紫色，鏡檢可見菌落呈球形，單個，成對或聚集呈葡萄串狀，無芽孢或莢膜（圖1）。

圖1 鏡檢圖像

2.2 生化試驗

豬葡萄球菌的生化試驗結果見表1。

表1 豬葡萄球菌生化試驗結果

2.3 細菌鑒定儀

應用梅里埃的細菌鑒定儀，細菌鑒定儀結果顯示為95%的豬葡萄球菌。

2.4 藥敏試驗

測量抑菌圈直徑，并記錄結果。檢測結果根據(jù)NCCLS標準進行判定，分 3級：敏感（S）、中敏（I）和耐藥（R），見表2。

目前對豬葡萄球菌進行治療可選用頭孢類藥物，但對青霉素的敏感性正在逐年降低。治療的同時，應給予病豬充足的飲水。

表2 豬葡萄球菌藥敏試驗結果

3 討論

（1）葡萄球菌廣泛分布于自然界，葡萄球菌病的發(fā)生和流行有許多誘發(fā)因素，如飼養(yǎng)管理差，衛(wèi)生條件不好，營養(yǎng)不良及機體抵抗力下降等[6]。豬群發(fā)生本病，一要早診斷，快治療，并要立即采取防控措施控制該??；二要加強生豬的飼養(yǎng)管理，防止因圈舍環(huán)境臟亂而降低生豬抗病力，及時調整生豬飼養(yǎng)密度，降低感染幾率；三要做好豬圈舍的衛(wèi)生外，還應要嚴格控制和隔離有受傳染病菌威脅的病豬，以便減少其與健康豬的接觸；四要對被污染的圈舍和物品及各種器械用具消毒。豬滲出性皮炎在臨床上經常發(fā)生，對豬場的生產影響較大[7]。

（2）近年來，仔豬滲出血性皮炎的發(fā)生與流行有增加趨勢[8]。本試驗的藥敏試驗顯示，該菌對青霉素類、林可酰胺類、大環(huán)內酯類、氨基糖苷類、喹諾酮類、四環(huán)素類藥物均耐藥，對頭孢類藥物較敏感，建議用作仔豬滲出性皮炎的治療。同時采取對癥治療，給予發(fā)病豬足夠的體液替代品[9]。目前抗生素的普遍使用和濫用極易使細菌產生耐藥性，尤其一些散養(yǎng)戶缺少一定的藥理知識。本試驗表明豬葡萄球菌耐藥性在上升，耐藥性的產生直接影響疾病的治療和控制[10]。