(解放軍101醫(yī)院泌尿外科，無錫 214044)

為了建立快速、準(zhǔn)確的離子色譜測量尿鎂含量的方法，實驗采用Metrohm-883型離子色譜儀對人體新鮮尿液標(biāo)本同時進(jìn)行測定，取得了滿意效果。

1 資料與方法

1.1 檢測樣品

人體新鮮尿液樣品。

1.2 儀器

metrohm-883色譜儀(瑞士萬通)、陽離子交換色譜柱(Metrosep C4-150/4.0 )、保護(hù)柱(Metrosep C4 Guard/4.0)、Cleanert IC-C18(500mg/3ml)、微孔濾過頭，0.2μm濾過膜等；標(biāo)準(zhǔn)溶液(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；濃硝酸(65%，上海久億化學(xué)試劑有限公司)。

1.3 色譜條件

將65%濃硝酸0.388mL+超純水2.0L配制呈淋洗液，酸濃度為2.0mmol/L，流速：0.9mL/min，樣品經(jīng)C18柱與0.25μm濾過膜，進(jìn)樣量為1mL。

1.4 檢測方法

樣本的預(yù)處理：使用5000mL容器收集人體新鮮尿液，按照1∶100的比例用濃鹽酸酸化，樣本的pH維持在1.0～2.5。取上清尿液1mL+20mL高純水稀釋。稀釋尿液樣本經(jīng)IC-C18處理和0.2μm濾過頭過濾后，推入進(jìn)樣孔。人體尿液均來源于江蘇地區(qū)受試者，年齡18～69歲， 男女比例為2.4∶1。受試者皆診斷為腎臟、輸尿管結(jié)石；且其結(jié)石主要成分確定為草酸鈣。受試者無尿路感染、腸道手術(shù)史及特發(fā)代謝障礙，簽訂知情同意書。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的處理：此標(biāo)準(zhǔn)溶液含有鎂、鈉、鈣、鉀，濃度同為1mg/L。將其稀釋成5個濃度梯度，記為標(biāo)準(zhǔn)1，標(biāo)準(zhǔn)2，標(biāo)準(zhǔn)3，標(biāo)準(zhǔn)4，標(biāo)準(zhǔn)5，濃度分別為1mg/L、2mg/L、5mg/L，10mg/L、20mg/L。再將上述稀釋液分別上機測定，用作定量分析。

2 結(jié)果

尿液樣本中鎂與其他陽離子的基線分離度好，見圖1。選用Metrosep C4-150/4.0陽離子交換色譜柱及Metrosep C4 Guard/4.0保護(hù)柱，結(jié)果表明交換柱對鎂有良好的分離效果、波形顯示及保留時間，見表1。

不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液在上述條件下得到其線性范圍并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以峰面積(A)對標(biāo)準(zhǔn)濃度(C)進(jìn)行分析。在1～20mg/L的范圍內(nèi)，各組分線性關(guān)系均良好；檢出限采用3倍信噪比計算，結(jié)果見表2。

圖1 尿液標(biāo)本中鈉、鉀、鈣、鎂的色譜圖(1mg/人)

組分名稱峰序號保留時間(min)面積(μS/cm×min)高度(μS/cm)濃度(mg/L)鈉14.29512.994961.4102080.649鉀25.8452.751913.441836.458鎂310.6020.40480.54336.081鈣412.3270.02941.688112.233

表2方法的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、測定限

離子線性范圍(mg/L)線性方程相關(guān)系數(shù)檢出線(mg/L)測定限(mg/L)鎂1～20A = 9.94100E-3 + 0.0252792× Q0.9999990.0491.0

3 討論

目前全球范圍內(nèi)，尿結(jié)石的發(fā)病率仍在持續(xù)上升[1]。分析尿結(jié)石的成因，對于治療結(jié)石、減少結(jié)石復(fù)發(fā)率有重要意義。而低鎂尿癥，作為含鈣尿結(jié)石形成的代謝異常危險因素，已被國內(nèi)外廣泛認(rèn)可[2]。鎂與草酸鈣結(jié)石的生成存在直接、間接的關(guān)系：鎂離子可與尿液中的草酸根絡(luò)合成可溶物質(zhì)，從而降低尿結(jié)石的形成風(fēng)險[3]。另一方面，尿鎂可以伴隨尿枸櫞酸的變化，從而影響尿結(jié)石形成[4]。雖然體外試驗已經(jīng)驗證了鎂抑石的作用，但在人體內(nèi)，尿鎂影響尿結(jié)石形成還存有爭議[5]。

如同尿草酸，尿枸櫞酸，由于人種差異、飲食結(jié)構(gòu)等因素異常，東亞人群與歐美人群在尿鎂排泄方面也可能存在差異[6，7]。然而，目前國內(nèi)外研究未見針對國人尿結(jié)石患者尿鎂的調(diào)查。且仍未見測量尿鎂含量的標(biāo)準(zhǔn)方法。目前常見的測鎂方法有原子吸收分光光度法[8]、比色法[9]、酶法[10]等等。原子吸收分光光度法精確度高，但儀器昂貴、對實驗環(huán)境要求高。比色法設(shè)備、操作簡便，但是分析步驟繁瑣，方法靈敏性低，特異性欠佳。酶法亦屬于中間產(chǎn)物方法，其衍生試劑產(chǎn)生的揮發(fā)物有損人體健康。另外，全自動生化儀使用各種試劑盒測血清鎂[11]，但因成本問題還未廣泛應(yīng)用于測尿鎂。本實驗選用離子色譜法測尿鎂，其操作簡便、低碳、快捷，在樣本預(yù)處理完成后即可連續(xù)進(jìn)樣，避免反復(fù)接觸化學(xué)試劑，平均每5至10分鐘即可得到結(jié)果。值得注意的是，該方法能同時測尿鎂、鈣、鈉和鉀，亦能同時測量尿草酸和尿枸櫞酸[12]?？偟脕碚f，離子色譜法貼近泌尿外科專業(yè)，適合泌尿外科醫(yī)生進(jìn)行尿結(jié)石風(fēng)險因素代謝評估。