陳曉蘭，鄧全道，陳娟，蔡祥宇

（1.桂林出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣西桂林541004；2.廣西出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，廣西南寧530021）

噠螨靈又名速螨酮，是一種高效、廣譜的殺螨劑和殺蟲(chóng)劑，對(duì)植食性螨的整個(gè)生長(zhǎng)期即卵、幼螨、若螨和成螨均有很好的效果，殺蟲(chóng)效果持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，不受溫度變化影響，與常用的殺螨劑均無(wú)交互抗性。該農(nóng)藥常用于羅漢果種植過(guò)程中紅蜘蛛的防治，但是目前有關(guān)于噠螨靈殘留降解動(dòng)態(tài)的研究主要集中在棉花、柑桔、蘋果、香蕉、甘藍(lán)、枸杞等農(nóng)作物上[1-10]，而對(duì)其在羅漢果中的殘留降解動(dòng)態(tài)尚屬空白。羅漢果主要產(chǎn)于廣西桂林市永福縣、龍勝縣和臨桂縣，是廣西桂林著名的特產(chǎn)植物和大宗經(jīng)濟(jì)農(nóng)作物，同時(shí)也是國(guó)家衛(wèi)生部首批公布的藥食兩用植物之一[11]。從羅漢果中提取出的主要有效成分羅漢果甜甙具有高甜度（約為蔗糖的300倍）、低熱量的特點(diǎn)，有降低血糖、抗氧化的作用，對(duì)糖尿病、高血壓、高血脂和肥胖癥患者無(wú)任何副作用，是一種理想天然甜味添加劑[12]。羅漢果是一種傳統(tǒng)的出口產(chǎn)品，在東南亞、歐美等地深受消費(fèi)者的青睞。因此，其食用的安全性不僅關(guān)系到消費(fèi)者的身體健康，更關(guān)系到我國(guó)對(duì)外貿(mào)易的發(fā)展。近年來(lái)，國(guó)際貿(mào)易技術(shù)壁壘不斷抬頭，各國(guó)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留限量要求不斷提高，日本、歐盟以及美國(guó)等國(guó)對(duì)未制定最大殘留限量（maximum residual limit，MRL）的農(nóng)產(chǎn)品，頒布了按一律限量0.01 mg/kg基準(zhǔn)執(zhí)行的殘留限量規(guī)定[13-15]。而我國(guó)食品安全標(biāo)準(zhǔn)GB 2763-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[16]對(duì)羅漢果中噠螨靈等農(nóng)藥的MRL卻沒(méi)有做出相關(guān)規(guī)定，導(dǎo)致羅漢果及羅漢果深加工產(chǎn)品在出口市場(chǎng)上很容易產(chǎn)生糾紛，嚴(yán)重制約了羅漢果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和羅漢果這一廣西桂林名優(yōu)特色產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外的品牌地位的提升。

因此，本文以15%噠螨靈乳油（emulsifiable concentrates，EC）作為供試藥劑，以栽培羅漢果作為供試作物，采用消解動(dòng)態(tài)與最終殘留兩種試驗(yàn)方式，通過(guò)優(yōu)化建立起來(lái)的氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器（gas chromatography-electron capture detector，GC-ECD）分析方法，檢測(cè)施藥后不同時(shí)間采摘的羅漢果中噠螨靈的殘留量，研究該農(nóng)藥在羅漢果中的殘留降解動(dòng)態(tài)規(guī)律，旨在為噠螨靈在羅漢果種植過(guò)程中的合理施用及開(kāi)展安全性評(píng)價(jià)提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

乙腈、正已烷、甲醇（色譜純）：美國(guó)Fisher公司；無(wú)水硫酸鎂（分析純，MgSO4）：上海安譜實(shí)驗(yàn)公司，使用前在馬弗爐內(nèi)550℃烘烤4 h；石墨化炭黑（graphitized carbon black，GCB，120 目～400 目）、N-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA，40 μm～60 μm）、十八烷基鍵合硅膠（C-18，40 μm～60 μm）固相萃取材料：德國(guó)CNW公司；15%噠螨靈乳油：江蘇揚(yáng)農(nóng)化工集團(tuán)有限公司。

農(nóng)藥噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)品（純度大于99%）：德國(guó)Dr.公司，用甲醇溶解，配制成1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（-18℃下避光保存），再用正乙烷稀釋至10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間使用液（-18℃下避光保存），根據(jù)需要用正乙烷配制質(zhì)量濃度為 0.01、0.05、0.1、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/L標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2 儀器設(shè)備及色譜條件

1.2.1 儀器設(shè)備

7820A氣相色譜儀，配有電子ECD檢測(cè)器：美國(guó)Agilent公司；Milli-Q超純水設(shè)備：美國(guó)Milipore公司；OT-2A渦旋器：上海琪特公司；XS205電子天平：瑞士Metler Toledo公司；3K15高速離心機(jī)：德國(guó)SIGMA公司；GT200均質(zhì)器：北京格瑞德曼公司；XO-1020低溫恒溫槽：南京先歐儀器公司。

1.2.2 色譜條件

色譜柱：HP-5石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；升溫程序：初始溫度50℃保持1 min，以30℃/min升至130℃，然后以20℃/min升至250℃，再以5℃/min升至280℃，最后以20℃/min升至300℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度：250℃；ECD檢測(cè)器溫度：300℃；載氣：高純氮?dú)猓兌?9.999%）；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量 1 μL。

1.3 方法

1.3.1 田間試驗(yàn)

1.3.1.1 供試材料

供試作物：羅漢果大地2號(hào)；供試藥劑：15%噠螨靈乳油。

1.3.1.2 試驗(yàn)方法

依據(jù)農(nóng)業(yè)部NY/T 788-2004《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[17]和《農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》[18]，本試驗(yàn)于2017年8月中旬羅漢果果實(shí)個(gè)體至約為成熟可收成的一半大小時(shí)，在廣西桂林市臨桂區(qū)五通鎮(zhèn)保寧北塘村羅漢果種植基地進(jìn)行?；卦囼?yàn)區(qū)設(shè)6個(gè)處理，即消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)區(qū)、最終殘留量低劑量試驗(yàn)區(qū)（噴藥2次和3次）、最終殘留量高劑量試驗(yàn)區(qū)（噴藥2次和3次）以及清水空白對(duì)照區(qū)，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)包括10棵植株，小區(qū)間設(shè)保護(hù)行。

1）殘留消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)

本動(dòng)態(tài)試驗(yàn)施用劑量為最高推薦劑量的2倍，即300 mg/L，施藥處理后分別按 0.062 5、1、3、5、7、14、21 d隨機(jī)摘采不少于2 kg的田間樣品。

2）最終殘留量試驗(yàn)

最終殘留量試驗(yàn)以最高推薦劑量低劑量，即150 mg/L，以最高推薦劑量的2倍最為高劑量，即300 mg/L，每種劑量均設(shè)2次施藥和3次施藥2個(gè)處理。按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)間開(kāi)始第1次施藥，施藥間隔期7 d，距離最后1次施藥7、14、21 d后隨機(jī)摘采不少于2 kg的田間樣品。

所有采集完的田間樣品，即刻放置于便攜式采樣箱子里（0℃），保證在2 h之內(nèi)送回實(shí)驗(yàn)室。

1.3.2 檢測(cè)方法

1.3.2.1 樣品的制備

試驗(yàn)區(qū)采摘回來(lái)的羅漢果樣品切碎后，用四分法縮至500 g后裝入封口袋中，貼好標(biāo)簽，于-18℃低溫冰柜中保存。

1.3.2.2 樣品前處理

1）提取

準(zhǔn)確稱取經(jīng)過(guò)粉碎均勻的樣品10.0 g于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈，渦旋提取2 min，置于0℃低溫恒溫槽中，然后再加入3.0 g MgSO4及1.0 g NaCl，用手劇烈振搖1 min，再均質(zhì)提取2 min，最后于5 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，靜置待凈化。

2）凈化

稱取 300 mg MgSO4、150 mg PSA、100 mg C18 和15 mg GCB于15mL離心管中，渦旋混合均勻10 s，準(zhǔn)確加入2 mL上清液，迅速搖勻并渦旋混合2 min，于5 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，靜置，吸取上清液1.2 mL，氮?dú)獯蹈桑?.6 mL正乙烷溶解，渦旋混合，過(guò)0.22 μm微孔有機(jī)濾膜，待氣相色譜分析。

1.3.2.3 基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確吸取7份經(jīng)過(guò)上述凈化步驟中離心靜置后的空白樣品上清液各1.2 mL，氮?dú)獯蹈色@得空白基質(zhì)，分別取0.6 mL用正乙烷配制質(zhì)量濃度為0.01、0.05、0.1、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/L 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液復(fù)溶，渦旋混合，過(guò)0.22 μm微孔有機(jī)濾膜。每個(gè)樣品基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)濃度均為1個(gè)處理，每個(gè)處理6個(gè)重復(fù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)方法的驗(yàn)證

2.1.1 方法的線性關(guān)系、檢出限、定量限

在前處理方法及色譜條件確定的情況下，為了進(jìn)一步有效消除基質(zhì)效應(yīng)，采用“1.3.2.3”制備好的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行外標(biāo)法定量分析。以目標(biāo)峰的峰面積（y）對(duì)質(zhì)量濃度（x，mg/L）作回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果顯示，在0.01 mg/L～2.0 mg/L濃度范圍內(nèi)，回歸方程的相關(guān)系數(shù)（r2）為0.994 6，說(shuō)明分析組分在此濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。分別以目標(biāo)峰的3倍信噪比（S/N=3）和10倍信噪比（S/N=10）計(jì)算檢測(cè)方法的檢出限（limits of detection，LOD）和定量下限（limitsofquantitation，LOQ）。計(jì)算結(jié)果顯示，羅漢果中噠螨靈農(nóng)藥檢測(cè)方法的LOD為 1.8 μg/kg，LOQ 為 7.4 μg/kg。

2.1.2 方法的回收率及精密度

取羅漢果空白樣品進(jìn)行3個(gè)加標(biāo)水平的回收率和精密度試驗(yàn)，參考國(guó)標(biāo)食品中噠螨靈最大殘留限量的規(guī)定范圍[16]，添加水平設(shè)定為 0.02、0.1，1.0 mg/kg，每個(gè)添加水平重復(fù)測(cè)定6次，平均回收率為82.1%～95.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）均小于10%，具體見(jiàn)表1。

表1 羅漢果中噠螨靈測(cè)定方法的平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）Table 1 Average recoveries and RSD of the analysis method for pyridaben in Siraitia grosvenoriis（n=6）

由表1試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)可見(jiàn)，羅漢果中噠螨靈殘留量測(cè)定方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度均能符合農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則[17]的要求。

2.2 羅漢果中噠螨靈的殘留消解動(dòng)態(tài)

噠螨靈在羅漢果中的降解動(dòng)態(tài)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 噠螨靈在羅漢果中的降解動(dòng)態(tài)Table 2 The degradation dynamic of pyridaben in Siraitia grosvenoriis

從表2可以看出，施藥后噠螨靈降解前期速度較快，施藥后第一天采樣，噠螨靈濃度從0.827 4 mg/kg降至0.353 9 mg/kg，降解率達(dá)到57.2%，5天后噠螨靈殘留濃度已降至低于0.10 mg/kg，14天后噠螨靈濃度降至低于0.01 mg/kg，由此可見(jiàn)，噠螨靈屬于一種較為易降解的農(nóng)藥。

羅漢果中噠螨靈的殘留降解動(dòng)態(tài)曲線結(jié)果如圖1，符合一級(jí)動(dòng)力數(shù)學(xué)方程C=0.784 7e-0.511t（相關(guān)系數(shù)r2=0.972 2），降解半衰期 T1/2=1.36 d。

圖1 羅漢果中噠螨靈的殘留降解動(dòng)態(tài)曲線Fig.1 The degradation curve of pyridaben in Siraitia grosvenoriis

2.3 羅漢果中噠螨靈的最終殘留

目前，我國(guó)國(guó)標(biāo)GB 2763-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[16]中只對(duì)大豆、辣椒、柑橘與蘋果等8種農(nóng)產(chǎn)品中噠螨靈的MRL值作出了規(guī)定（范圍為0.1 mg/kg～2.0 mg/kg），那么可以把最嚴(yán)格的MRL 0.1 mg/kg假設(shè)為噠螨靈在羅漢果的MRL；再者，羅漢果產(chǎn)品主要出口國(guó)家或地區(qū)，例如美國(guó)、歐盟、日本等，亦尚未專門針對(duì)羅漢果中噠螨靈MRL作出具體的要求[13-15]，因此，對(duì)于未作為具體規(guī)定的MRL一律視為0.01 mg/kg。噠螨靈在羅漢果中的最終殘留試驗(yàn)結(jié)果如表3所示。

表3 噠螨靈在羅漢果中的最終殘留Table 3 The terminal residue of pyridaben in Siraitia grosvenoriis

從表3可知，噠螨靈低劑量施藥量為150 mg/L，高劑量施藥量為300 mg/L，分別各自均施藥2次與3次，每次施藥間隔7 d，那么末次藥后7 d殘留量低于0.1 mg/kg，14 d低于0.01 mg/kg，完全可以滿足國(guó)內(nèi)外對(duì)食品或農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留MRL的要求。因此，可以將14 d設(shè)定為噠螨靈在羅漢果上使用的安全間隔期。需要注意的是，安全間隔期與施藥量和施藥次數(shù)相對(duì)應(yīng)，改變施藥方式，安全間隔期也相應(yīng)發(fā)生改變。

3 結(jié)論

經(jīng)過(guò)對(duì)羅漢果中噠螨靈在田間降解行為的研究，結(jié)果表明，噠螨靈在羅漢果上的降解行為符合一級(jí)動(dòng)力數(shù)學(xué)模型，降解半衰期為1.36 d；噠螨靈在噴施濃度為150 mg/L和300 mg/L，分別施2次～3次情況下，末次藥后14 d在羅漢果中的殘留量＜0.01 mg/kg，完全可以滿足國(guó)內(nèi)外MRL的要求。因此，15%噠螨靈乳油的施用建議如下：施藥劑量100 mg/L～150 mg/L，施藥2次，安全采摘間隔期為14 d。