文/王青云 楊曉波* 李凱鋒 梁 超
( 黑龍江省完達(dá)山乳業(yè)股份有限公司)
牛初乳富含具有調(diào)節(jié)機(jī)體生理功能的活性物質(zhì),其中免疫因子主要是高含量、具有抗原結(jié)合特性的IgG[1],具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。初乳中常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分(蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、礦物質(zhì))和生物活性物質(zhì)(免疫因子、激素、生長(zhǎng)因子等)的含量比常乳高數(shù)倍,具有極高的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值[2]。本文主要用完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品喂食小鼠,對(duì)細(xì)胞免疫功能、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、體液免疫功能、單核—巨噬細(xì)胞吞噬功能和NK細(xì)胞活性進(jìn)行檢測(cè),驗(yàn)證產(chǎn)品具有免疫調(diào)節(jié)作用。
完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品,由黑龍江省完達(dá)山乳業(yè)股份有限公司提供,樣品為乳黃色粉末,感官檢查未見(jiàn)異常。
由黑龍江省腫瘤研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,編號(hào)為醫(yī)動(dòng)字第09-2-7號(hào)。將健康雌性小鼠隨機(jī)分為5 組,分別進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)(免疫Ⅰ組)、碳廓清試驗(yàn)(免疫Ⅱ組)、脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)和NK細(xì)胞活性測(cè)定(免疫Ⅲ組)、半數(shù)溶血值(HC50)測(cè)定和抗體生成細(xì)胞檢測(cè)(免疫Ⅳ組)。
完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品的人體推薦量為每人每日2 g(含IgG 2.26%),如成人體重以60 kg計(jì),則相當(dāng)于0.033 g/kg·bw。小鼠的等效劑量為人體推薦量的10 倍,即每日0.33 g/kg·bw(中劑量),上、下各設(shè)一個(gè)劑量組:0.99 g/kg·bw(高劑量)和0.17 g/kg·bw(低劑量)。同時(shí)設(shè)清潔水(20 mL)和普通奶粉(0.33 g/kg·bw)分別作為陰性對(duì)照組和普通奶粉對(duì)照組。各組動(dòng)物則按20 mL/kg·bw灌胃容積進(jìn)行灌胃,連續(xù)灌胃30 d后測(cè)定各項(xiàng)免疫指標(biāo)。
動(dòng)物天平、分析天平、冰箱、離心機(jī)、722型分光光度計(jì)、顯微鏡、二氧化碳培養(yǎng)箱等。
無(wú)菌手術(shù)器械、游標(biāo)卡尺(精密度0.01 mm)、微量注射器(25 μL)、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、紗布、試管、計(jì)時(shí)器、血色素吸管、24孔培養(yǎng)板等。
綿羊紅細(xì)胞(SRBC)、雞紅細(xì)胞、生理鹽水、補(bǔ)體(豚鼠血清)、SA緩沖液、都氏試劑、印度墨汁、Na2CO3、Hank's液(pH值7.2~7.4)、RPMI 1640培養(yǎng)液、小牛血清、青鏈霉素、氧化型輔酶I等。
表1 完達(dá)山牌乳珍對(duì)小鼠體重的影響
表2 完達(dá)山牌乳珍對(duì)小鼠臟器/體重比值的影響
表3 完達(dá)山牌乳珍對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響(免疫Ⅰ組)
用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
小鼠喂食完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后的體重變化見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn),各劑量組與對(duì)照組相比,初始體重和終末體重均無(wú)顯著性差異(p>0.05),說(shuō)明本試驗(yàn)條件下完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)無(wú)影響。
喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍30 d對(duì)臟器/體重值的影響見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn),經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,低、中、高劑量組與對(duì)照組相比,脾臟/體重值和胸腺/體重值均無(wú)顯著性差異(p>0.05),即完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠的臟器/體重值無(wú)影響。
喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響見(jiàn)表3。由表3可見(jiàn),經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,高劑量組與普通奶粉對(duì)照組相比,注射SRBC 24 h后的小鼠足跖腫脹度(足跖厚度)差異極顯著(p<0.01),即完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品能增強(qiáng)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。
表4 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬紅細(xì)胞功能的影響(免疫Ⅰ組)
表5 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠單核—巨噬細(xì)胞碳廓清功能的影響(免疫Ⅱ組)
喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞功能的影響見(jiàn)表4。由表4可見(jiàn),經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,各劑量組與普通奶粉對(duì)照組相比,吞噬百分?jǐn)?shù)和吞噬指數(shù)均無(wú)顯著性差異(p>0.05),即完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品不能增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。
喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠單核—巨噬細(xì)胞碳廓清功能的影響見(jiàn)表5。由表5可見(jiàn),經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,中、高劑量組與對(duì)照組相比,碳廓清功能差異顯著(p<0.05),即完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品能夠顯著增強(qiáng)小鼠單核—巨噬細(xì)胞的碳廓清功能。
喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的影響見(jiàn)表6。由表6可見(jiàn),經(jīng)口給予不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,各劑量組與陰性對(duì)照組相比,小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能均無(wú)顯著性差異(p>0.05),說(shuō)明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品不能影響小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能。
喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響見(jiàn)表7。由表7可見(jiàn),經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍30 d后,各劑量組與普通奶粉對(duì)照組相比,小鼠NK細(xì)胞活性均無(wú)顯著性差異(p>0.05),說(shuō)明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品不能增強(qiáng)小鼠NK細(xì)胞活性。
喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠半數(shù)溶血值(HC50)的影響見(jiàn)表8。由表8可見(jiàn),經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,高、中劑量組與普通奶粉對(duì)照組相比,小鼠半數(shù)溶血值差異分別極顯著(p<0.01)和顯著(p<0.05),表明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品能顯著提高小鼠半數(shù)溶血值。
表6 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的影響(免疫Ⅲ組)
表7 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響(免疫Ⅲ組)
表8 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠半數(shù)溶血值(HC50)的影響(免疫Ⅳ組)
表9 完達(dá)山牌乳珍對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞的影響(免疫Ⅳ組)
喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞的影響見(jiàn)表9。由表9可見(jiàn),經(jīng)口給予不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,高、中劑量組與普通奶粉對(duì)照組相比,抗體生成細(xì)胞差異顯著(p<0.05),表明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品能增強(qiáng)小鼠抗體生成細(xì)胞功能。
經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d,進(jìn)行了4 類(lèi)、7項(xiàng)試驗(yàn),即細(xì)胞免疫功能檢測(cè)(小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)和遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn))、體液免疫功能檢測(cè)(抗體生成細(xì)胞檢測(cè)和半數(shù)溶血值測(cè)定)、單核—巨噬細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)(小鼠單核—巨噬碳廓清功能試驗(yàn)和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn))以及NK細(xì)胞活性檢測(cè)。結(jié)果表明,完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品可顯著增強(qiáng)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、碳廓清功能、半數(shù)溶血值及抗體生成細(xì)胞功能。由此可見(jiàn),完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品可增強(qiáng)體液免疫功能、細(xì)胞免疫功能和單核—巨噬細(xì)胞吞噬功能,即具有免疫調(diào)節(jié)作用。