高丹丹 胡茂玉

摘要：目的：研究A注射液中的聚山梨酯-80，測(cè)定其在A注射液中的含量，并為其用量提供依據(jù)；研究項(xiàng)目：A注射液中聚山梨酯-80含量測(cè)定方法的建立，主要從紫外-可見(jiàn)分光光度法來(lái)考察；結(jié)果：A注射液中聚山梨酯-80含量測(cè)定紫外-可見(jiàn)分光光度法方法學(xué)考察項(xiàng)目均在可接受標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，本試驗(yàn)為聚山梨酯-80在A注射液中應(yīng)用的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：A注射液；聚山梨酯-80；含量測(cè)定

聚山梨酯-80，其化學(xué)名稱為聚氧乙烯-20-山梨醇酐單油酸酯[1]，商品名為吐溫-80[2]，是一種親水型非離子型表面活性劑[3]，為藥物制劑中常見(jiàn)的輔料之一。由于其具有較好的助溶作用，在制備難溶性藥物注射劑時(shí)，常用作助溶劑、乳化劑和穩(wěn)定劑[4]。有文獻(xiàn)報(bào)道，聚山梨酯-80的純度與不良反應(yīng)可能具有一定的關(guān)系[5]。因此在應(yīng)用該輔料時(shí)應(yīng)注意對(duì)注射用聚山梨酯-80加強(qiáng)質(zhì)量控制。

1紫外-可見(jiàn)分光光度法[6]

硫氰酸鈷銨溶液與聚山梨酯-80反應(yīng)，生成物在三氯甲烷液中能夠顯藍(lán)色[7]，采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定A注射液中聚山梨酯-80的含量。

1.1儀器設(shè)備。UV-2450紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、XS105電子天平、DK-S24恒溫水浴鍋、分液漏斗、移液管、試管、容量瓶

1.2試劑。硫氰酸鈷銨試液（硫氰酸銨17.4g與硝酸鈷2.8g加水至100ml）、三氯甲烷、A注射液，聚山梨酯-80對(duì)照品，純化水

1.3試驗(yàn)過(guò)程

1.3.1溶液穩(wěn)定性

1.3.1.1反應(yīng)溫度。精密量取A注射液成品1.0ml，加純化水補(bǔ)足至6.0ml，精密加入硫氰酸鈷銨試液9.0ml，搖勻，精密加入三氯甲烷10.0ml分別在0℃、25℃、50℃水浴條件下，每30min振搖一次，觀察反應(yīng)狀況，確定反應(yīng)溫度。

1.3.1.2反應(yīng)時(shí)間。精密量取A注射液成品1.0ml，加純化水補(bǔ)足至6.0ml，精密加入硫氰酸鈷銨試液9.0ml，精密加入三氯甲烷10.0ml，搖勻，在冰水浴中每30min振搖一次，測(cè)定前等待30min分層時(shí)間，在一段時(shí)間內(nèi)連續(xù)測(cè)定吸光度，確定其穩(wěn)定時(shí)間。

結(jié)論：反應(yīng)時(shí)間至少為8h，為便于實(shí)際操作，放置過(guò)夜后測(cè)定。8～13h的吸光度值RSD為0.76%，小于2.0%，說(shuō)明在8h后反應(yīng)達(dá)到穩(wěn)定，冰水浴中放置過(guò)夜的條件可用于測(cè)定。

1.3.1.3溶液穩(wěn)定性。精密量取A注射液成品1.0ml，加純化水補(bǔ)足至6.0ml，精密加入硫氰酸鈷銨試液9.0ml，搖勻，精密加入三氯甲烷10.0ml，搖勻，在冰水浴中每30min振搖一次，共振搖三次后放置至穩(wěn)定后，吸取三氯甲烷層，以加入三氯甲烷為空白，在620nm的波長(zhǎng)下，在120min內(nèi)每15min測(cè)定一次吸光度，計(jì)算RSD%。

結(jié)論：RSD為0.23%，小于2.0%，說(shuō)明測(cè)定溶液在120min內(nèi)穩(wěn)定。

1.3.2專屬性。精密量取純化水1.0ml，依法操作，吸取三氯甲烷層，以加入三氯甲烷為空白，在620nm的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度；再精密量取A注射液中間體（未加聚山梨酯-80）1ml，同法操作，以加入三氯甲烷為空白，在620nm的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。

結(jié)論：吸光度值均小于0.005，說(shuō)明方法專屬性符合規(guī)定，且測(cè)定時(shí)可以以三氯甲烷為空白。

1.3.3儀器精密度。精密量取A注射液成品1.0ml，依法操作，吸取三氯甲烷層，以加入三氯甲烷為空白，在620nm的波長(zhǎng)下連續(xù)測(cè)定6次吸光度，計(jì)算其RSD%。

結(jié)論：RSD為0.29%，小于2.0%，說(shuō)明本法儀器精密度符合規(guī)定。

1.3.4重復(fù)性。分別精密量取6份A注射液成品1.0ml，依法操作，吸取三氯甲烷層，以加入三氯甲烷為空白，在620nm的波長(zhǎng)下分別測(cè)定吸光度，計(jì)算其RSD%。

結(jié)論：RSD為1.0%，小于2.0%，說(shuō)明本法重復(fù)性符合規(guī)定。

1.3.5線性與范圍。精密稱取聚山梨酯-80對(duì)照品適量制成約0.976mg/ml的溶液，精密量取1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5ml分別置分液漏斗中，依法操作，吸取三氯甲烷層，以加入三氯甲烷為空白，在620nm的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。以吸光度值為縱坐標(biāo)、聚山梨酯-80濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。

結(jié)論：在1.464mg/ml～4.392mg/ml范圍內(nèi)，r=1.000，大于0.990，說(shuō)明在1.464mg/ml～4.3921.464mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系符合規(guī)定。

1.3.6加樣回收率

精密稱取聚山梨酯-80對(duì)照品適量制成6.050mg/ml的溶液，另精密量取A注射液中間體（未加聚山梨酯-80）5.0ml9份，分別精密加入上述貯備液3.0，5.0，10.0ml，制成三種不同濃度的供試品溶液；另取聚山梨酯-80對(duì)照品適量，加水配制成每1ml含2.021mg、1.987mg與每1ml含3.901mg、3.906mg的溶液作為對(duì)照品溶液，分別精密移取供試品溶液與對(duì)照品溶液1.0ml，依法操作，后放置過(guò)夜，以加入三氯甲烷為空白，在620nm的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，計(jì)算加樣回收率及RSD%。

結(jié)論：平均回收率為100.1%，在100.0%±5.0%范圍內(nèi)，RSD為0.87%，小于5.0%，加樣回收率符合規(guī)定。

1.3.7中間精密度

精密稱取聚山梨酯-80對(duì)照品適量制成不同濃度的對(duì)照品溶液，分別精密量取對(duì)照品溶液與A注射液成品溶液1.0ml，依法操作，以加入三氯甲烷為空白，在620nm的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，計(jì)算含量。分別由兩個(gè)分析人員按上述方法對(duì)同一批A注射液成品的聚山梨酯-80含量各測(cè)定6組數(shù)據(jù)，計(jì)算RSD%。

結(jié)論：RSD為2.4%，小于5.0%，說(shuō)明中間精密度符合規(guī)定。

1.4小結(jié)

各方法學(xué)考察項(xiàng)目均在接受標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，通過(guò)方法學(xué)考察，故此方法可用于A注射液中聚山梨酯-80的含量測(cè)定。

2討論

2.1本法的主要機(jī)理是絡(luò)合顯色反應(yīng)，關(guān)鍵要使反應(yīng)完全，所以首先進(jìn)行反應(yīng)時(shí)間的考察，確定反應(yīng)穩(wěn)定的時(shí)間。由于反應(yīng)需7小時(shí)以上才能穩(wěn)定，時(shí)間比較長(zhǎng)，所以采用放置過(guò)夜后進(jìn)行測(cè)定。

2.2試驗(yàn)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)溫度對(duì)反應(yīng)影響較大，在測(cè)定時(shí)要注意勿把上層有色溶液帶入比色皿中，否則測(cè)定結(jié)果偏高。最后確定反應(yīng)的條件為0℃放置過(guò)夜。

參考文獻(xiàn)：

[1]孫會(huì)敏，楊銳，欒琳，等.聚山梨酯80質(zhì)量分析與致敏原探究[J].藥物分析雜志ChinJPharmAnal2011，31（10）：1850-1855.

[2]陳海峰.供注射用吐溫80的質(zhì)量控制分析[J].審評(píng)四部八室，2006.

[3]王慶利，彭健.吐溫80的安全性研究進(jìn)展.毒理學(xué)雜志[J]，2006，20（4）：262-264.

[4]張海燕，鄔偉魁，韋迎春，等.常用注射劑增溶性輔料的安全現(xiàn)狀[J].陜西中醫(yī)，2011，32（4）：503-505.

[5]黃曉麒，孫福春.一種高安全性注射用聚山梨酯-80及其制備方法[P].中國(guó)，200910014797.X，2009-08-19.

[6]閆位娟，王建農(nóng)，邵立軍.42種中藥注射劑中吐溫80定性定量測(cè)定[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30（21）：2366-2369.

[7]韋迎春，張海燕，等.適合中藥注射液用吐溫80的研究[J].

（作者單位：南京正大天晴制藥有限公司1

南京圣和藥業(yè)股份有限公司2）