李艷紅

（吉林工程職業(yè)學院，吉林四平 136001）

斷奶是養(yǎng)豬過程中的一個關鍵時期，在這期間，小豬暴露在不同類型的應激源下，如環(huán)境、營養(yǎng)、心理等，導致仔豬生理結(jié)構(gòu)和消化道的功能發(fā)生一系列變化。斷奶后會使仔豬腸道絨毛變短，隱窩深度加深，同時胰腺活動降低，胰蛋白酶分泌量減少，仔豬消化吸收功能受損，導致生長緩慢、飼料轉(zhuǎn)化率降低以、及發(fā)生腹瀉（Hedemann和Jensen，2004）。斷奶仔豬通常需要較高水平的日糧，用于促進早期肌肉、骨骼的生長和蛋白質(zhì)的沉積，若消化不良，則高水平未消化的蛋白會被腸道微生物用于發(fā)酵和增殖，微生物發(fā)酵未消化的蛋白質(zhì)產(chǎn)生有毒物質(zhì)，如氨和胺這兩種物質(zhì)，它們都會抑制生長，引起仔豬腹瀉（Dong等，1996）。有相關學者研究表明，外源性蛋白酶對改善畜禽蛋白質(zhì)的利用率具有促進作用（易中華等，2005）。但目前大多數(shù)關于蛋白酶的研究數(shù)據(jù)主要集中在對家禽影響上，因此，本試驗以斷奶仔豬為研究對象，在日糧中添加100 mg/kg復合蛋白酶，研究其對斷奶仔豬生長性能、營養(yǎng)物質(zhì)消化率、血液指標及腸道健康的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗設計 選擇200頭28 d斷奶仔豬（平均體重為6.40 kg），將其隨機分為2組，每組4個重復，每個重復25頭豬。對照組飼喂以膨化玉米為主的基礎日糧，試驗組在基礎日糧中添加100 mg/kg復合蛋白酶，試驗分為3個階段（1～7 d、8～21 d、22～42 d）共42 d。試驗用復合蛋白酶購自加拿大Jefo公司，這種酶是細菌發(fā)酵產(chǎn)生的堿性絲氨酸肽內(nèi)切酶，最適pH為8.5。基礎日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.2 樣品收集與測定 分別在試驗第1、7、21和42天對各重復豬只按個體進行稱重，記錄采食量，計算平均日增重、平均日采食量和飼料轉(zhuǎn)化率。采用指示劑法測定營養(yǎng)物質(zhì)消化率，即在飼料中添加2 kg/t三氧化二鉻作為指示劑，豬只從14～21 d和35～42 d飼喂含三氧化二鉻的飼料，每個重復收集2只豬的糞便，-20℃保存。在進行化學分析前，糞便在60℃條件下烘72 h，參考Kong和Adeola（2014）研究方法測定干物質(zhì)、總能和氮的表觀消化率，采用以下公式進行計算：

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平

營養(yǎng)物質(zhì)消化率 /%=[1-（Nf×Cd）/（Nd×Cf）]×100

其中：Nf表示糞中養(yǎng)分含量；Nd表示日糧中營養(yǎng)物質(zhì)含量；Cd表示日糧中鉻的含量；Cf表示糞中鉻的含量。

在試驗第42天每個處理選擇5頭豬，采血5 mL，用于分析紅細胞、白細胞、淋巴細胞、肌酐、尿素氮和IgG的含量，具體方法參考Brosnan等（2011）的研究方法。

在試驗第42天，每個處理選擇5頭豬收集糞樣，于冰上置于無菌試管中，每克混合糞樣加入9 mL 1%的肉湯培養(yǎng)基，參考Wen等（2012）研究方法測定糞中硫醇化物、氨氣、乳酸桿菌、大腸桿菌的含量。糞便評分在每天早上8點到晚上8點進行，1分代表顆粒硬糞，2分代表成型便，3分代表軟糞，4分代表不成型軟糞，5分代表稀糞。

1.3 統(tǒng)計分析 所有試驗數(shù)據(jù)在EXCEL（2016）中做簡單的均值計算處理后，采用SAS軟件中一般線性模型進行單因素方差分析，各組差異用T檢驗進行分析，以P＜0.05作為差異顯著判定標準。

2 結(jié)果與分析

2.1 復合蛋白酶對斷奶仔豬生長性能的影響

復合蛋白酶對斷奶仔豬日增重、日采食量、料重比的影響見表2。本試驗選擇的斷奶仔豬初重無顯著差異 [（6.40±0.1）kg，P ＞ 0.05]。試驗組與對照組對7～21 d斷奶仔豬體重無顯著影響（P＞0.05），但試驗組顯著提高了42 d斷奶仔豬體重（P＜0.05）。此外，試驗組顯著提高了1～42 d日增重、1～7 d和8～21 d日采食量（P＜0.05）。對照組與試驗組對斷奶仔豬1～7 d、8～21 d、22～42 d及1～42 d料重比影響無顯著差異（P＞0.05）。2.2 復合蛋白酶對斷奶仔豬營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響 日糧添加復合酶對斷奶仔豬21和42 d干物質(zhì)、氮和總能的消化率見表3。試驗組較對照組顯著提高了斷奶仔豬21和42 d干物質(zhì)和氮的消化率（P＜0.05），但對兩階段總能消化率的影響無顯著差異（P＞0.05）。

表2 日糧添加復合蛋白酶對斷奶仔豬生長性能的影響

表3 日糧添加復合蛋白酶對斷奶仔豬??????營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響?????????%

2.3 復合蛋白酶對斷奶仔豬血液指標的影響由表4可知，試驗組和對照組對血液紅細胞數(shù)、白細胞數(shù)、淋巴細胞、尿素氮及IgG的含量的無顯著影響（P＞0.05），但試驗組較對照組顯著降低了血液肌酐的濃度（P＜0.05）。

表4 日糧添加復合蛋白酶對斷奶仔豬?血液指標的影響

2.4 復合蛋白酶對斷奶仔豬糞中菌群和有害氣體含量的影響 由表5可知，對照組與試驗組對斷奶仔豬糞便評分無顯著影響（P＞0.05）。日糧添加復合蛋白酶顯著降低了糞中氨氣的含量（P＜0.05）。與對照組相比，試驗組對斷奶仔豬糞便硫醇化物、乳酸桿菌和大腸桿菌含量的影響無顯著差異（P＞0.05）。

表5 日糧添加復合蛋白酶對斷奶仔豬糞中菌群和有害氣體含量的影響

3 討論

日糧中補充外源性蛋白酶可以提高蛋白質(zhì)的利用率的方案得到了人們的廣泛關注。但這些研究結(jié)果多數(shù)在家禽上報道，而在仔豬上的應用研究數(shù)據(jù)較少。因為對豬只而言，其具有更大的蛋白質(zhì)消化能力，其腸道發(fā)酵功能強，飼料消化時間長。但對于早期斷奶仔豬，斷奶應激會影響蛋白質(zhì)、氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)的消化利用率（Pluske等，1997）。因此，在斷奶仔豬日糧中添加復合蛋白酶具有重要意義。本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧添加復合蛋白酶可以提高斷奶仔豬各階段的體重及全期平均日增重，但對整個試驗期飼料利用率無顯著影響。Wang等（2011）研究發(fā)現(xiàn)，保育豬日糧中添加角蛋白酶可以顯著提高平均日增重。Zuo等（2015）也發(fā)現(xiàn)，在蛋白質(zhì)消化率低的斷奶仔豬日糧中添加復合蛋白酶可以顯著改善仔豬的生長性能。以上結(jié)果說明，通過添加復合蛋白酶可以改善飼料蛋白或氨基酸的利用率，進而提高斷奶仔豬的生長性能。

從試驗結(jié)果來看，試驗組較對照組顯著提高了斷奶仔豬21和42 d干物質(zhì)和氮的消化率。Guggenbuhl等（2012）研究發(fā)現(xiàn)，在玉米-豆粕型日糧中添加復合蛋白酶可以提高蛋白質(zhì)利用率。蛋白酶可能中和飼料中的抗營養(yǎng)因子，如蛋白酶抑制劑，這樣就可以解釋其提高蛋白質(zhì)消化率的原因（Huo等，1993）。本試驗發(fā)現(xiàn)，總能的消化率得到一定的提高與蛋白酶破壞了淀粉蛋白質(zhì)基質(zhì)有關（McAllister，1993）。此外，蛋白酶對能量消化率的改善具有選擇性，如植物性蛋白豆粕、菜粕或豌豆粕，動物性蛋白肉粉或肉骨粉等（Nielsen等，2013）。

血液中肌酸苷的含量在試驗組表現(xiàn)為顯著降低，而紅細胞、白細胞、淋巴細胞和IgG的數(shù)量及尿素氮濃度與對照組相當。肌酸和磷酸肌酸的降解是血液中肌酸苷的主要來源，血液中肌酸苷水平升高，使肌肉動員蛋白質(zhì)，減少營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，最終導致斷奶仔豬腹瀉率升高（Brosnan等，2011）。但由于本試驗中豬只未發(fā)生腹瀉，試驗組低水平的肌苷酸說明該組氨基酸的利用率高于對照組。肌肉中肌酸降解的減少可以降低甲硫氨酸和精氨酸的代謝負擔，從而對整個機體氮代謝起到平衡作用（Brosnan等，2011）。

斷奶仔豬日糧高蛋白水平與其對蛋白質(zhì)的消化能力有關，高蛋白可能導致腸道細菌的增殖，從而引起腹瀉（Dong等，1996）。我們假設給斷奶仔豬日糧提供蛋白酶可以降低腸道病原菌的數(shù)量，進而降低腹瀉。但本試驗結(jié)果卻發(fā)現(xiàn)，蛋白酶組和對照組對糞中乳酸桿菌和大腸桿菌的含量無顯著影響。Zhang等（2014）發(fā)現(xiàn)，日糧中添加外源性復合酶（木聚糖酶、淀粉酶、蛋白酶）可以提高乳酸桿菌的數(shù)量，降低糞中大腸桿菌的數(shù)量，降低仔豬腹瀉率。試驗結(jié)果存在差異的原因可能與日糧類型、酶的種類和衛(wèi)生條件及環(huán)境有關（Wen等，2012）。在本研究中，試驗豬在一個環(huán)境衛(wèi)生條件相對較好的欄位中，而養(yǎng)豬業(yè)環(huán)境衛(wèi)生條件可以影響斷奶仔豬胃腸道微生物的水平。從豬糞中釋放出的惡臭氣體，如氨氣對環(huán)境及設備具有負面影響，同時也可能會讓斷奶仔豬產(chǎn)生呼吸道疾病。日糧添加復合蛋白酶顯著降低糞中氨氣含量，而McAlpine等（2012）研究卻發(fā)現(xiàn)，肥豬階段條件蛋白酶提高了糞中氨氣濃度，而添加蛋白酶和木聚糖酶則降低了糞中氨氣濃度。盡管豬日齡和飼料結(jié)構(gòu)有所不同，引起這種差異的原因需進一步研究。未消化的蛋白質(zhì)或氨基酸在后腸微生物發(fā)酵產(chǎn)生氨氣，進而通過糞排出（Gaskins，2000）。因此，在目前研究中，糞中氨氣濃度低的原因為日糧蛋白質(zhì)和氨基酸的消化率較高，復合蛋白酶限制了后腸微生物對未消化蛋白的利用。

4 結(jié)論

斷奶仔豬日糧添加復合蛋白酶可以有效改善斷奶仔豬的生長性能和養(yǎng)分消化率，尤其是提高蛋白質(zhì)的利用率。另外，復合蛋白酶可以降低糞中氨氣的含量，可以作為畜牧業(yè)中降低環(huán)境污染的有效措施。