闕江龍 陶志英 王生 張燕萍 賀剛

(江西省水產(chǎn)科學(xué)研究所，農(nóng)業(yè)部湖泊漁業(yè)資源環(huán)境科學(xué)觀測試驗(yàn)站，江西南昌 330039)

鳙(Aristichthysnobilis)又名花鰱、胖頭魚、大頭魚，也叫雄魚。隸屬于鯉形目(Cyprinomorpha)、鯉科(Cyprinidae)、鳙屬(Aristichthys)，濾食性魚類，主要以浮游動物為食，也攝食浮游植物，有“水中清道夫”的雅稱，四大家魚之一，多分布在水域的中上層，是中國特有魚類，分布范圍很廣，經(jīng)濟(jì)價值較高[1]。

近年來，隨著環(huán)境污染，棲息地破壞，酷漁濫捕等原因，內(nèi)陸水域漁業(yè)資源嚴(yán)重衰退，經(jīng)濟(jì)魚類尤其是四大家魚呈低齡化小型化趨勢，增殖放流已成為主要的資源養(yǎng)護(hù)手段[2]，但增殖放流有效的標(biāo)記回捕方法仍是目前的一大難題。

目前的一些常規(guī)標(biāo)志方法有切鰭法、掛牌法和衛(wèi)星定位等[3，4]，但這些標(biāo)記方法操作復(fù)雜、費(fèi)用較高或?qū)︳~體存在損傷，不適于大規(guī)模較小個體魚苗的增殖放流標(biāo)記。利用能與鈣結(jié)合的化學(xué)染料浸泡魚類幼體，標(biāo)記量大，方便簡單、成本低且標(biāo)記穩(wěn)定[5]，已被用于珊瑚魚類[6]和香魚(Plecoglossusaltivelis)[7]增殖放流的生態(tài)學(xué)研究，本文利用化學(xué)染料茜素絡(luò)合物(Alizarin complexone，ALC)溶液浸泡增殖放流主要種類鳙，旨在研究其染色技術(shù)，尋找最佳的浸泡濃度，為大規(guī)模增殖放流標(biāo)記提供技術(shù)支持，為放流種群的生態(tài)學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

20日齡鳙魚苗均來自江西省水產(chǎn)科學(xué)研究所黃馬基地，實(shí)驗(yàn)采用化學(xué)染料茜素絡(luò)合物指示劑(分子式：C19H15NO8，中文別名為茜素氨羧絡(luò)合劑；3-茜素甲基胺-N，N-二乙酸；茜素絡(luò)合劑，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

染料的浸泡液濃度、浸泡時間及樣本大小見表1，設(shè)定4個不同的茜素絡(luò)合物浸泡標(biāo)記濃度和1個空白平行樣。茜素絡(luò)合物濃度分別為50mg/L、75mg/L、100mg/L和150mg/L。實(shí)驗(yàn)桶盛裝已制好的實(shí)驗(yàn)所需濃度液5L，實(shí)驗(yàn)開始時將鳙魚幼魚放入相應(yīng)的濃度中，每個實(shí)驗(yàn)桶10尾，浸泡開始前24h不投餌，持續(xù)浸泡8h后統(tǒng)計(jì)死亡率，浸泡結(jié)束將存活個體放入等體積的清水中暫養(yǎng)。

1.3 耳石摘取及檢測

在Mshot解剖鏡(MD50)下用解剖針挑取鳙耳石，蒸餾水洗滌，95%乙醇脫水，光學(xué)顯微鏡觀察標(biāo)記效果，并拍照。按照無、可見、明顯、鮮艷記錄耳石熒光反應(yīng)強(qiáng)度[8]。

2 結(jié)果與分析

2.1 浸泡死亡率

茜素絡(luò)合物浸泡處理后，鳙魚的死亡率如表1所示，在水溫25～28℃、濃度為50～100mg/L的茜素絡(luò)合物溶液中浸泡8h，鳙魚幼魚的存活率均為100%，當(dāng)溶液濃度達(dá)到150mg/L時，對鳙魚幼魚具有較強(qiáng)的毒性，浸泡后幼魚全部死亡。

表1 茜素絡(luò)合物標(biāo)記方案和標(biāo)記效果

2.2 標(biāo)記效果

解剖鏡觀察結(jié)果(圖1、圖2)顯示，茜素絡(luò)合物溶液浸泡標(biāo)記的仔稚魚耳石，50mg/L實(shí)驗(yàn)組標(biāo)記不明顯，75mg/L實(shí)驗(yàn)組耳石周圍可見紫紅色標(biāo)記環(huán)，經(jīng)濃度100mg/L茜素絡(luò)合物浸泡處理，鳙耳石邊緣具明顯的標(biāo)記環(huán)。

圖1 未浸泡染料幼魚耳石

圖2 茜素絡(luò)合物浸泡耳石標(biāo)記效果a、b、c溶液濃度分別為50mg/L、75mg/L、100mg/L

3 討論

3.1 安全濃度

熒光染料茜素絡(luò)合物浸染于魚苗中時，能附著沉積于標(biāo)志目標(biāo)身體的鈣化組織如鱗片、耳石、鰭棘等硬骨組織上，以產(chǎn)生在顯微鏡下可識別的著色點(diǎn)標(biāo)記[9]。不同魚類在不同生長階段對不同濃度的茜素絡(luò)合物敏感性不一樣[10，11]。從本實(shí)驗(yàn)的存活率可知，茜素絡(luò)合物濃度在不高于100mg/L時，對20日齡的鳙存活沒有顯著影響，而當(dāng)其濃度達(dá)到150mg/L時，所有的幼魚死亡。因此，茜素絡(luò)合物安全濃度為不高于100mg/L。

3.2 標(biāo)記效果

從圖2中可知，在安全濃度范圍內(nèi)，灰白色鳙耳石隨著浸泡濃度的增加，標(biāo)記環(huán)越明顯，在8h的浸泡持續(xù)時間下，50mg/L濃度組的鳙耳石在右側(cè)略見淡紅色的標(biāo)記，75mg/L濃度組在耳石四周能看見淡紅色的標(biāo)記環(huán)，100mg/L濃度組能看見明顯標(biāo)記環(huán)。100mg/L濃度的茜素絡(luò)合物為最適標(biāo)記濃度，此濃度在可見光下能達(dá)到清晰易于辨認(rèn)的標(biāo)記效果。

經(jīng)過上述分析與討論可知，茜素絡(luò)合物適用于鳙幼魚的耳石標(biāo)記，由于操作簡單，價格合理，能持續(xù)較長時間[12]，適用于在全國范圍內(nèi)內(nèi)陸水域的增殖放流標(biāo)記及后續(xù)的跟蹤回捕，為追蹤放流群體的生活史，研究魚類種群動態(tài)提供了可能。