伊雅淞 鞠增睿 韓呼日查 李宏遠 侯毅鞠
摘 要:目的:通過對人骨肉瘤細胞G292的培養(yǎng),研究生脈注射液聯(lián)合長春新堿對癌細胞生長的影響,為進一步研究對抗癌細胞奠定基礎。方法:培養(yǎng)人骨肉瘤細胞G292,取對數(shù)生長期的細胞進行實驗。用不同濃度的生脈注射液,長春新堿,生脈注射液聯(lián)合長春新堿作用于人骨肉瘤細胞G292。加藥培養(yǎng)48小時后,顯微鏡下進行細胞形態(tài)學觀察,MTT法測定,藥物敏感性檢測。結果:細胞形態(tài)觀察結果顯示藥物對細胞生長具有抑制作用;MTT法結果顯示聯(lián)合應用抑制率高于長春新堿抑制率;藥物敏感性檢測結果顯示生脈注射液聯(lián)合長春新堿作用效果為相加作用。結論:生脈注射液聯(lián)合長春新堿用藥對細胞的抑制作用比單獨用藥更明顯,且作用效果為相加作用。
關鍵詞:人骨肉瘤細胞;長春新堿;生脈注射液;聯(lián)合用藥
中圖分類號:R285.5 文獻標識碼:A 文章編號:1671-2064(2018)17-0200-02
長春新堿(VCR)是夾竹桃科植物長春花中提取出的生物堿,針對抗腫瘤細胞具有良好作用[1]。生脈注射液(SM)主要成分為紅參,麥冬,五味子。生脈注射液功能主治心悸,氣短休克等癥狀[2]。實驗以人骨肉瘤G292細胞株為受試對象,研究生脈注射液和長春新堿及聯(lián)合應用此兩類藥物對接受藥物作用的人骨肉瘤細胞G292生長的影響。
1 材料與方法
1.1 試驗材料
G292細胞株;生脈注射液;長春新堿;新生牛血清;1640培養(yǎng)基。
1.2 細胞培養(yǎng)
配制血清濃度為12.5%的1640培養(yǎng)基,將G292細胞放置溫度37±1℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中貼壁生長,恢復至對數(shù)增長期,在超凈臺內(nèi)進行試驗。
1.3 試驗分組
將細胞共分為A、B、C、三組,分別為空白組,應用生脈注射液組(10、20、50、100μl/ml),應用長春新堿組(5、10、20、50μg/ml),生脈注射液聯(lián)合長春新堿應用組(生脈30μl/ml聯(lián)合長春新堿5、10、20、50μg/ml)。
1.4 細胞形態(tài)學觀察
在加入藥品培養(yǎng)48小時后,在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及數(shù)量,初步判斷藥物及藥物聯(lián)合應用對G292細胞的影響。
1.5 細胞生長抑制實驗
指數(shù)生長培養(yǎng)的G292細胞以5×104個細胞/孔的終濃度接種到96孔板,每孔200μl,細胞分別以不同濃度的生脈注射液培養(yǎng)48h后,向每個孔中加入20μL MTT(5mg/ml)。孵育4h后,吸棄培養(yǎng)基,紫色甲瓚晶體溶解于150μL/孔溫的DMSO中。使用酶聯(lián)免疫分析儀測定570nm處的吸光度。細胞的存活率以對照孔的百分比表示。每次測定重復三次,以確??煽啃浴?/p>
1.6 藥物敏感性檢測
指數(shù)生長培養(yǎng)的G292細胞,以5×104個細胞/孔的終濃度接種到96孔板,每孔200μl,細胞分別以不同濃度的長春新堿(5、10、20、50μg/ml),生脈30μl/ml聯(lián)合長春新堿5、10、20、50μg/ml用藥處理,培養(yǎng)48h后后續(xù)操作同1.5,并計算增敏倍數(shù)?;熢雒舯稊?shù)=單用化療藥物IC50/聯(lián)合用藥時化療藥物IC50。聯(lián)合治療效果常采用金正均Q值法評價:Q=EA+B/(EA+EB-EA·EB)。EA代表A藥單獨給藥時的抑制率,EB代表B藥單獨給藥時的抑制率,EA+B代表A、B兩藥合并給藥后的抑制率,0.85≤Q≤1.15為相加作用,Q>1.15為協(xié)同作用,Q<0.85為拮抗作用。
2 結果
2.1 細胞形態(tài)學觀察
分別加入對應藥品培養(yǎng)48小時后,在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)如圖1。
由圖1可見,生脈注射液30μl/ml組的細胞間距增加,長春新堿10μg/ml組細胞數(shù)量減少,濃度增加到50μg/ml后,細胞形態(tài)異常,生長狀態(tài)不良。與生脈注射液聯(lián)合用藥后,長春新堿10μg/ml組細胞形態(tài)改變顯著,細胞邊界模糊,細胞內(nèi)出現(xiàn)大量顆粒,長春新堿50μg/ml組細胞生長狀態(tài)極差,細胞數(shù)量急劇減少,出現(xiàn)大量死亡細胞,成明顯抑制。
2.2 細胞生長抑制實驗
生脈注射液能有效抑制G292細胞的增殖,如圖2所示, 10、20、50、100μl/ml體積分數(shù)的生脈注射液作用于G292細胞48h的生長抑制率為15.85%、27.02%、47.53%、63.38%、且其抑制作用呈濃度依賴性。IC50濃度為65.65μl/ml。
2.3 生脈注射液聯(lián)合長春新堿對G292細胞藥物敏感性的影響
選用體積分數(shù)為30μl/ml的生脈注射液與不同濃度的長春新堿聯(lián)合使用,觀察生脈注射液對長春新堿抗腫瘤增殖的相加作用,如圖3所示,IC50濃度為39.14μg/ml,體積分數(shù)為30μl/ml的生脈注射液與不同濃度的長春新堿(5、10、20、50μg/ml)聯(lián)用Q值分別為0.86、0.97、1.02、0.91。表現(xiàn)為相加作用,IC50濃度為3.04μg/ml,增敏倍數(shù)為12.875。
3 討論
人骨肉瘤發(fā)病率在原發(fā)性惡性腫瘤中占據(jù)首位,該瘤惡性程度甚高,愈后極差且腫瘤細胞原發(fā)或繼發(fā)的耐藥問題[3],可于數(shù)月內(nèi)出現(xiàn)肺部轉移,截肢后3~5年存活率僅為5~20%。通過研究發(fā)現(xiàn)長春新堿是作用于細胞周期的一種特異性藥物,一般在S期通過與微觀蛋白結合,阻斷細胞周期來抑制腫瘤細胞的增殖[4-5]。生脈注射液主要成分為中藥紅參、麥冬、五味子等,最新研究發(fā)現(xiàn)生脈注射液也具有一定的抗腫瘤作用且可以加強化療療效、減輕化療藥物的毒副作用、提高患者生存質量。通過本實驗結果可知,生脈注射液或長春新堿單藥均有抑制G292細胞增殖的作用,藥敏分析表明,聯(lián)合用藥效果為相加作用。以本研究結果作為依據(jù),可為臨床腫瘤治療提供更多治療方案,以此減低腫瘤患者化療副作用,提高生存質量,但藥物聯(lián)合作用機制需要進一步研究。
參考文獻
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[2]盧懿,侯世祥,陳彤.長春花抗癌成分長春新堿研究的進展[J].中國中藥雜志,2003,(11):13-16.
[3]王家騏,梅炯,蔡宣松.骨肉瘤化療的現(xiàn)狀和研究進展[J].同濟大學學報:醫(yī)學版,2004,25(6):538-540.
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